传染病的免疫学检测一伤寒副伤寒血清学诊断课件.pptx
第八部分 传染病的免疫学检测 一、伤寒、副伤寒血清学诊断（一）肥达（Widal）试验方法：试管法步骤：试管编号稀释病人血清+菌液混匀,放置16-20小时观察结果。结果判定:以出现+凝集的血清最高稀释倍数为该血清的凝集抗体的效价,1,谢谢观赏,2019-7-3,2,谢谢观赏,2019-7-3,正常值：O1:80；H1:160 临床意义：1.“O”和“H”均高于正常值，可考虑为伤寒；恢复期较急性期增长4倍以上确定诊断。2.“O”抗体（IgM）出现较早，“H”抗体（IgG）出现较晚 3.病程第2周以后，大多出现阳性反应，一般以第3、4周阳性率最高，病愈后，可持续数月。,3,谢谢观赏,2019-7-3,（二）酶联免疫（ELISA）试验方法：抗原(伤寒杆菌脂多糖或Vi抗原)包被+待测 血清+第二抗体（酶标记）底物显色参考值：1:20临床意义：1.早期诊断(发病1周后即可升高）2.检测抗Vi抗体，可以诊断伤寒带菌者,4,谢谢观赏,2019-7-3,5,谢谢观赏,2019-7-3,二、抗链球菌溶血素“O”测定 溶血抑制法原理：抗链球菌溶血素“O”（ASO）存在于感染链球菌病人的血清中，可以和溶血素“O”特异性结合，使之失去溶血作用方法：病人血清 倍比稀释 溶血素+红细胞 观察溶血现象结果判定：无溶血现象的血清最高稀释倍数定为ASO的单位数。参考值：ASO400U临床意义：1.链球菌感染1周，ASO，46周达高峰。2.风湿热：ASO。,6,谢谢观赏,2019-7-3,三、肝炎的免疫学检测（一）甲型肝炎（HAV）的免疫学检查：1.粪便中HAV抗原的检测 ELISA夹心法方法：标本处理：待测粪便+牛肉汤盐水冻融离心取上清(即待测抗原)；包被抗体；加待测标本；加酶标抗体(HRP-抗甲肝IgG)；加酶底物；测定OD492。结果判断：待测标本OD值 2.1阳性 阴性对照OD值,7,谢谢观赏,2019-7-3,2 抗HAV-IgM的检测 抗体捕获ELISA法方法：抗人链包被+待检血清(含抗HAV-IgM)+HAAg+HRP-抗HAV-IgG+酶底物测定OD492。结果判断：待测标本吸光度值 2.1阳性 阴性对照吸光度值临床意义：发病4周后，几乎全部患者抗HAV-IgM 为阳性，用于甲肝诊断。检测抗HAV-IgG可用于流行病学调查。,8,谢谢观赏,2019-7-3,9,谢谢观赏,2019-7-3,（二）乙型肝炎的免疫学检测 1.HBsAg的检测 反向间接血凝试验方法：致敏红细胞(抗HBsAgRBC)患者血清(含HBsAg)凝集,10,谢谢观赏,2019-7-3,2.抗HBs检测 ELISA抑制法方法：抗HBs包被+HBsAg(已知浓度)+待测标 本+HRP-抗HBs+酶底物 目测或测 定OD492结果判定：目测：阳性孔无色或浅黄 阴性孔桔黄色 OD值测定：0.5,待测孔OD值,阴性对照OD值,11,谢谢观赏,2019-7-3,12,谢谢观赏,2019-7-3,血中HBV标志物检查法及其阳性意义 标志物 常用检测法 阳性意义 HBsAg ELISA夹心法 正在或曾经感染 抗-HBs ELISA抑制法 曾感染或疫苗注射 抗-HBc(IgM类)抗体捕获ELISA 发病期，慢性恶化期 抗-HBc(IgG类)ELISA抑制法 曾感染，急性恢复期 HBeAg ELISA夹心法,RPHA HBV复制，感染性强 抗-HBe ELISA抑制法，PHA 急性感染，趋向恢复 HBV-DNA PCR法 HBV复制 前S2Ag ELISA夹心法 HBV复制 抗-前S2 ELISA抑制法 提示预后良好,13,谢谢观赏,2019-7-3,四、梅毒血清学检查 1.未灭活血清反应素试验(unheated serum reagin test,USR)玻片凝集法方法：病人血清和脂质抗原(心磷脂、卵磷脂和胆固醇混合物）各一滴 玻片上 混合振动4min 观察结果结果判断：（阴性）无凝集（弱阳性）小凝集块(阳性)中或大凝集块,14,谢谢观赏,2019-7-3,2.快速血浆反应素试验(rapid plasma reagin test,RPR)方法：病人血清RPR抗原(活性炭结合类脂质Ag)观察凝集颗粒或絮片结果判断：阴性 无黑色凝集 阳性 明显黑色凝集颗粒或絮片临床意义：1.梅毒患者 USR阳性者，7090；RPR阳性者，8095。2.某些麻风、SLE、硬皮病、类风湿性关节炎等也可出现USR假阳性。,15,谢谢观赏,2019-7-3,3.荧光密螺旋体抗体吸收实验(FAT-ABS)方法：病人血清(56,30min)加非致病螺旋 体抗原吸收 滴加于抗原(梅毒螺旋体)片+FITC-抗人IgG 荧光显微镜检 查。结果判定：+阳性+可疑-阴性,16,谢谢观赏,2019-7-3,17,谢谢观赏,2019-7-3,五、获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)的相关检测技术1.抗HIV抗体的检测：酶联免疫吸附试验（ELISA）明胶颗粒凝集实验(PA)免疫荧光检测法（IFA）免疫印记法（western blot）放射免疫沉淀法（RIP）应用：、和用于筛查；和用于确定诊断。,18,谢谢观赏,2019-7-3,2.HIV病毒检测：细胞培养分离病毒 检测HIV抗原。3.细胞免疫功能：检测T细胞功能 a.CD4T淋巴细胞计数 b.迟发变态反应皮试 c.有丝分裂原刺激反应 检测B细胞功能 a.循环免疫复合物 b.免疫球蛋白,19,谢谢观赏,2019-7-3,1.血清中抗HIV抗体检测 间接免疫荧光法方法：淋巴细胞(感染HIV)涂片 待检血清(16稀 释 FITC-抗人IgG 观察结果结果判定：阳性 胞浆出现弥漫性荧光,20,谢谢观赏,2019-7-3,2.血清中抗HIV抗体检测 免疫印记法方法：HIV-1蛋白抗原裂解物 SDS-PAGE电泳 转移至硝酸纤维膜+待测血清+HRP-抗人IgG+酶低物 观察结果。结果判定：阴性 无可见显色条带 阳性 可见显色条带，根据显色带对应的 抗原的分子量判定HIV感染，如：P24、P31和gP41或gP160/120显色 可确定为感染阳性，缺少P24或P31 为可能阳性，只有其一为可疑。,21,谢谢观赏,2019-7-3,22,谢谢观赏,2019-7-3,
