血清CK及其同工酶测定课件.ppt

血清CK及其同工酶测定检验系生化,一、概述,肌酸激酶（Creatine kinase，CK，EC2.7.3.2）全称腺苷三磷酸：肌酸N-磷酸转移酶，催化肌酸（Cr）和ATP或磷酸肌酸（CrP）和ADP之间磷酸转移的可逆反应。肌酸+ATP 磷酸肌酸+ADP+H+,CK,偏碱pH有利于顺向反应进行，中性pH倾向逆向反应，一般逆向反应较顺向反应快26倍；Mg2+是CK 的必需激活剂，但过量反而抑制；样品宜用血清或肝素化血浆；标本应避免严重溶血；血清中CK较不稳定，室温4h或412h可使酶失活。,二、CK测定方法,比色法紫外分光光度法荧光法,比色法,利用顺向反应1、测磷法 CrP在酸液中易水解成Cr及无机磷酸。（ATP与ADP在酸性条件下较稳定）,2、酶偶联-丙酮酸测定法 肌酸+ATP 磷酸肌酸+ADP ADP+磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸+ATP 丙酮酸+2，4-二硝基苯肼 丙酮酸-2，4-二硝 基苯腙,CK,丙酮酸激酶,顺向反应测定CK的底物较便宜；测磷法的试剂较易得而稳定；丙酮酸激酶价格较贵，不易获得；顺向反应速度较慢，灵敏度较低。,利用逆向反应CrP+ADP Cr+ATPCr+双乙酰+-萘酚 红色化合物Mg2+作激活剂；半胱氨酸供给巯基；氢氧化钡和硫酸锌沉淀蛋白并终止反应。,CK,逆向反应的速度较快，敏感性较高，成为目前国内推荐的主要方法。必须用中性或偏碱的蛋白沉淀剂以防止底物CrP在酸性蛋白沉淀剂中非酶性水解成Cr。,紫外分光光度法,多利用逆向反应，是国际最常用方法CrP+ADP Cr+ATPATP+Glu ADP+6-P-Glu6-P-Glu+NADP+6-P-GA+NADPH+H+,CK,己糖激酶,G-6-PD,全部反应最适pH为6.86.9；主要干扰因素谷光甘肽还原酶腺苷酸激酶,荧光法,利用逆向反应生成的Cr在强碱性溶液中与茚三酮反应产生荧光复合物，测其荧光强度，经与同样处理的Cr标准管比较，可计算CK活力。优点：快速、敏感，巯基化合物不产生干 扰，试剂易得，操作条件易于掌握。缺点：需精密荧光分光光度计，不适宜基 层单位使用。,酶偶联-丙酮酸测定法步骤（顺向反应）,计算：Au/As200U/L,三、血清CK同工酶测定,方法：琼脂糖凝胶电泳法。,