自身抗体研究进展与临床应用课件.ppt

自身抗体研究进展及临床应用,总论,自身抗体的分类,一、细胞内1、细胞核：抗核抗体（ANAs）2、细胞浆：抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）二、细胞膜HLADR2、DR3、DR4HLAB27三、细胞外类风湿性因子（RF）、抗甲状腺球蛋白抗体、抗血浆成分（如凝血因子）抗体、抗磷脂抗体等。,壹、细胞核：抗核抗体（ANAs）,抗核抗体的定义,是指针对核酸和核蛋白抗体的总称，其靶抗原包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞周期蛋白等全部细胞成分。,抗核抗体的分类,抗DNA抗体 抗双链DNA、抗单链DNA、抗左旋DNA。抗组蛋白抗体 总组蛋白抗体：H1、H2a、H2b、H3、H4 抗DNP抗体 抗核小抗体抗非组蛋白抗体 ENA抗体（ENA抗体谱）、抗着丝点抗体抗核仁抗体 抗5rRNA、核小体、Nor-90、U3nRNP抗其他细胞成分 线粒体、中心体,ANA的荧光染色型别,细胞核：核均质型（DNA、组蛋白和核小体等）核颗粒型（Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和型周期蛋白）核膜型（板层素、gp120等）核仁型（SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纤维蛋白等）核浆点型（着丝点、核多点及核少点型）细胞浆：胞浆颗粒型（线粒体、Jo-1、核糖体等）胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等分裂期细胞阳性：纺垂体、中间体、中心体等,根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：,ANA常见五种核型及临床意义,核膜型与抗ds-DNA有关，多见于SLE，特别是有肾炎者均质型与AHA、抗DNA有关，引起LE形成 主要见于SLE、药物性狼疮斑点型与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体核仁型多见于硬皮病着丝点型多见于CREST综合征,核膜型 与抗ds-DNA有关，多见于SLE，特别是有肾炎者,均质型与AHA（抗组蛋白抗体）、抗DNA有关，引起LE形成主要见于SLE、药物性狼疮,斑点型 与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体,核仁型多见于硬皮病,着丝点型多见于CREST综合征,细胞核,均质性（homogeneous）,荧光显微镜下的ANA模型：,斑点型（speckled）,荧光显微镜下的ANA模型：,核颗粒型：核粗颗粒型,抗核抗体染色类型 核仁型（nucleolar）,荧光显微镜下的ANA模型,荧光显微镜下的ANA模型,荧光显微镜下的ANA模型,荧光显微镜下的ANA模型,细胞浆,抗中性粒细胞浆抗体在显微镜下的荧光模型:,分裂期细胞阳性,荧光显微镜下的ANA模型,ANA的 荧光类型,ANA试验的结果中一般会报告其分型，这些分型可能与某一特定的抗原反应活性相关。,一、抗DNA抗体,已确认出两大类抗体特异性：天然的双链DNA（dsDNA）：对诊断SLE特异性高变性的单链DNA（ssDNA）多数实验室采用以下方法进行测定：放射免疫分析法（RIA，Farr分析法）：定量酶联免疫吸附法（ELISA）：定量间接免疫荧光法（IIF，短膜虫法）：半定量抗体水平与疾病活动度相关，随着疾病活动的控制，抗dsDNA抗体滴度可以下降或消失。抗dsDNA抗体与SLE肾损伤有关：DNA形成免疫复合物在肾小球基底膜沉积，或抗dsDNA抗体直接作用于肾小球抗原。强烈提示其致病作用。,抗DNA抗体,分类：1、天然的双链DNA2、变性的单链DNA 双链DNA抗体针对的是DNA（外围区）脱氧核糖核酸骨架 单链DNA抗体针对的是嘌呤及嘧啶碱基,抗ds-DNA抗体,临床意义 对SLE的诊断有较高特异性 滴度与SLE活动相关，可作为病情监测及疗效观察指标 与SLE肾损害有关检测方法 放免法（Farr)敏感，有利于早期预测 检测高亲合力的抗ds-DNA 间接免疫荧光法(IF)特异 ELISA可检测低亲合力的抗ds-DNA 有助于中枢狼疮的病情监测 金标免疫斑点法,抗双链DNA的检测方法：多数实验室采用以下三种方法：一.RIA 二.ELISA 三.IIF,抗双链DNA在荧光显微镜下的模型（绿蝇短膜虫基质）：,抗DNA的临床意义：在SLE患者的肾脏病变处发现了抗DNA抗体，这强烈提示其致病作用。在具有抗DNA抗体的人中，有85%会在5年内发展成SLE 抗体水平与疾病活动度相关,二、抗组蛋白抗体（Anti-Histone Antibody，AHA）,组蛋白是染色质基本结构-核小体的重要组成部分；在药物性狼疮的患者中出现率很高（78-95%）；在多种结缔组织病中出现。服用异烟肼的病人中最高，但临床上并没有出现狼疮的临床症状，其它肼苯哒嗪、普鲁卡因酰胺。,抗组蛋白抗体,抗组蛋白的定义：组蛋白是(histones)为主要的DNA相关蛋白,其分子量介于11.2-21.5kDa之间,作用为稳定DNA双螺旋,也可能在基因调节中起作用.组蛋白可分为五种:H1、H2A、H2B、H3和H4，这五种组蛋白都有各自对应的自身抗体。组蛋白与DNA一起形成高度有序的核小体。中心由H3-H3-H4-H4四聚体组成，H2A-H2B二聚体位于其两侧。组蛋白核心被两圈DNA双螺旋（共146对碱基对）环绕。核小体象串珠样连接在一起，在结合区，DNA（连接DNA）与组蛋白H1相联。,ANA分类抗组蛋白抗体,抗原:组蛋白H1,H2A,H2B,H3,H4(主要的靶抗原为H1和H2B)相关疾病:药物诱导性 LE:100%（标志性抗体）SLE:40%-80%在其他风湿病中很少见,抗组蛋白的临床意义:,抗组蛋白抗体主要用于药物性狼疮的诊断,95%的药物性狼疮患者抗组蛋白抗体阳性，另外，抗组蛋白抗体还见于30-70的非药物诱导的红斑狼疮以及15-50的类风湿关节炎患者。,抗核小体抗体（AnuA）,核小体是细胞染色质中的一种成分，它是由DNA和组蛋白以特殊的方式相连而组成，在SLE的诱导和致病中起重要作用对SLE的早期诊断有重要意义比抗ds-DNA、抗组蛋白抗体更早出现阳性率：50%90%特异性98%,抗核小体抗体（antinucleosome antibodies,AnuA）,核小体是染色体的功能亚单位，是DNA与组蛋白形成的复合体，存在于细胞核中，核小体是SLE主要的自身抗原；AnuA对SLE诊断的敏感性和特异性分别为56.0%-64.2%和97.0%-98.8%，敏感性优于抗dsDNA，是SLE的标记抗体之一。AnuA可出现于SLE疾病进程的各个时期，并且是狼疮肾炎的标记性抗体，与SLE病情活动的生物标志物。AnuA与抗dsDNA抗体可不同时出现，AnuA出现早于抗dsDNA抗体，这对SLE的早期诊断更为有利,目前我科已展开了第二代AnuA的检测。,抗核小体抗体,抗核小体的定义：组蛋白与dsDNA的复合物。组蛋白与DNA一起形成高度有序的核小体，中心由H3-H3-H4-H4四聚体组成，H2A-H2B二聚体组成，H2A-H2B二聚体位于其两侧。组蛋白部分被DNA双链围绕两圈（共146个碱基对）。核小体象串珠样连接在一起，在结合区，DNA（连接DNA）与组蛋白H1相联。,抗核小体的临床意义:,抗核小体抗体(AnuA)的检测主要用于SLE的诊断，特异性较高，特异性98%。在SLE中的阳性率为7090。在非活动期的检出率为62，其阳性率均高于抗dsDNA抗体，尤其对于非活动期的患者，且该抗体的出现比dsDNA抗体早，因此，不但有助于提高SLE的诊断率，还有助于早期诊断。此外，该抗体还是SLE病情恶化的早期标志，定期检测有助于病情观察。该抗体因其也可见于药物性狼疮，特异性不及抗dsDNA抗体。,三、抗非组蛋白抗体,（一）抗ENA抗体（二）抗着丝点抗体（ACA）,（一）抗核酸结合蛋白/可提取性核抗原（Extractable Nuclear Antigen,ENA）抗体,抗ENA抗体的类型,抗U1RNP抗体抗Sm抗体抗Ro/抗SSA抗体抗La/抗SSB抗体肌炎特异性抗体（MSA）与系统性硬化相关的抗体,抗ENA抗体的类型:抗U1RNP抗SM抗SSA抗SSB抗JO-1抗SCL-70抗rRNP抗体（抗核糖体P蛋白）,抗ENA抗体,抗RNP MCTD100%阳性，且滴度高双手肿胀，雷诺现象，肌炎，指（趾）端硬化肾脏保护性抗体？抗Sm SLE的标记性抗体，阳性率30%有助于早期、不典型及治疗缓解后SLE的回顾性诊断抗Sm阳性一定伴抗RNP阳性，但抗RNP阳性可单独存在抗SSA 原发性SS：60-75%SLE:40-50%与皮损、光过敏、白细胞减少、淋巴结肿大、血管炎、紫癜相关 可造成新生儿狼疮、婴儿心脏传导阻滞抗SSB原发性SS：40%，较抗SSA更特异其它CTD伴抗SSB者常伴继发性SS,抗ENA抗体,抗Jo-1 多肌炎/皮肌炎标记性抗体抗Scl-70 硬皮病标记性抗体抗Rib胞浆抗原核糖体位于胞浆内 抗Rib阳性+其它自身抗体阴性=ANA阴性 临床意义 是SLE的又一特异性抗体，阳性率10-20%多见于SLE活动期 与抗ds-DNA抗体的消长相平行 但不会随病情缓解立即消失 可持续1-2年后才转阴,抗ENA抗体的检测及临床意义,采用免疫扩散法；ELISA和免疫印迹法。几乎仅出现于患有结缔组织病的患者中。如果无症状者中出现高滴度的抗ENA抗体，常预示着未来可能发展成结缔组织病。抗体常在疾病的整个病程中均能够被检测到。滴度与疾病活动度并无一致的关系。,抗U1RNP抗体,抗nRNP(nuclear RNP)：以抗核内的核糖核蛋白而得名。临床上应用较多的是u1RNP抗体。通常又把nRNP称之为u1RNP。抗u1RNP抗体在混合性结缔组织病（MCTD）中几乎均为阳性，且其滴度很高；是区分结缔组织病和非结缔组织病的有力指标。抗u1RNP抗体阳性的病人，常有双手肿胀、雷诺现象、肌炎和指（趾）端硬化。2530的SLE患者存在该抗体，一般与抗Sm抗体一同出现。,抗U1RNP抗体：混合性结缔组织病有高滴度的抗U1RNP抗体，是其特异指标。25%-30%的SLE患者存在该抗体，一般与抗SM抗体一同出现。也出现于干燥综合征、RA、硬皮病、多发性肌炎。,SM抗体:是SLE的诊断标准之一.30%左右SLE存在该抗体.与临床的相关性并不强,但有证据显示其与中枢神经系统受累、肾脏病变、肺纤维化、心包炎有关。与ds-DNA一起，是SLE的特异性指标，但仅见于20%-40%病人中。,抗Sm抗体（Smith）,ACRSLE诊断标准中，抗Sm抗体是诊断标准标准之一。抗Sm抗体非常有助于作出SLE的诊断。30左右SLE存在该抗体。SLE患者中，常与抗U1RNP抗体一同出现 与临床的相关性并不强，但有证据显示其与中枢神经系统受累、肾脏病变、肺纤维化、心包炎有关。有人认为可以作为疾病活动度的指标。,抗Sm/nRNP抗体,Sm和nRNP是同一分子复合物（RNA-蛋白颗粒）中的不同抗原位点，Sm含有u1、u2和u4-u6，而nRNP(u1RNP)仅含u1RNA。也即抗Sm抗体阳性均伴有抗u1RNP抗体，而抗u1RNP抗体可以单独存在。抗u2RNP抗体在系统性硬化症伴多发性肌炎的重叠综合征中阳性频率较高。银屑病及雷诺现象的病人也可呈阳性。抗u3RNP抗体常与系统性硬化相关，且常伴有肺动脉高压、骨骼肌和小肠受累。,SS-A抗体：常见于干燥综合症，也见于SLE，偶见于慢活肝。100%新生儿SLE出现SS-A抗体，以胎盘传给胎儿引起炎症反应。其也可导致新生儿先天性心脏传导阻滞。,抗SS-A/Ro抗体,抗SSA/RO抗体：由于该抗体与干燥综合征（Sjogren Syndromes，SS）相关，故取名为SSA；SSA与Ro的抗原性、生化特点一致。在以鼠肝为底物的ANA检测中，抗SSA抗体常呈阴性反应，而以Hep-2细胞为底物，则ANA阳性时SSA也常呈阳性。,抗Ro抗体阳性的临床相关性,正常健康人干燥综合征淋巴结病白细胞减少抗La抗体RFANASLE光过敏性皮疹血小板减少间质性肺炎ANA（）,亚急性皮肤型红斑狼疮抗La抗体其它风湿性疾病RA多发性肌炎系统性硬化原发性胆汁性肝硬化新生儿狼疮综合征先天性完全性心脏传导阻滞新生儿狼疮性皮炎Ro反应针对52kD抗原而非60kD抗原。,抗SS-B抗体：仅见于干燥综合症（40-80%）和SLE（10-20%）女性患者中。男女比例为29：1。SS常同时出现SS-A抗体和SS-B抗体,抗SSB/La抗体,在原发性SS病人中，抗SSA/Ro和抗SSB/La阳性率分别为60%和40%，它们是诊断干燥综合征的血清学标志。抗SSB抗体较抗SSA抗体诊断干燥综合征更为特异。免疫扩散法与免疫印迹法（Western Blot）得出的结果常常不一致。SSA和抗SSB抗体阳性可造成新生儿狼疮及婴儿心脏传导阻滞等先天性心脏病。抗SSA和抗SSB抗体常与血管炎、淋巴结肿大、白细胞减少、光过敏、皮损、紫癜等临床症状相关。,抗SCL-70抗体：见于25%-75%的进行性系统性硬化症患者中。不出现于局限性的硬皮病。约40%的系统性硬皮病和70%的弥漫性硬皮病中SCL-70抗体阳性,与系统性硬化相关的抗体,抗拓扑异构酶1抗体（抗scl 70抗体）：存在于25的患者；主要见于患有弥漫型硬皮病以及存在系统性损害（特别是肺间质变）的患者。抗着丝点抗体：存在于30的患者中；90的CREST综合征患者存在该抗体；见于患有原发性或继发性雷诺病的患者。抗核仁抗原的抗体：见于5的患者中，患者常常患有严重的弥漫型疾病。,JO 1抗体：见于多发性皮肌炎，发生率为25%-35%。常与肺间质纤维化相关,“肌炎特异性自身抗体”（Myositis-Specific Antibody,MSA）,抗合成酶抗体（20）：Jo-1抗体占所有抗合成酶抗体的80%，其它还有：抗PL-7抗体、抗PL-12抗体、抗OJ抗体等。抗SRP抗体（抗信号识别颗粒抗体）（5）与肌炎、心脏扩大、对治疗的抵抗相关,5年生存率为20抗Mi2抗体（10）：5年生存率为100几乎仅见于或最常见于多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM）或PM/DM重叠综合征。存在于35至40的肌炎患者中。一个人出现一种以上MSA的情况很少见。,抗合成酶综合征,临床表现为：肌炎、间质性肺疾病、关节炎以及常出现雷诺现象的一组临床表现的特征性；患者的手指侧面常出现角化过度，并伴有脱屑、裂纹和色素沉着，从而形成许多肮脏的横纹。即“技工手”。50至70发生间质性肺疾病（就肌炎总体而言，为10至20）。血清中含多有抗合成酶抗体（Jo-1抗体）。肌炎常常难以通过治疗达到完全缓解。,核糖体P蛋白：主要见于SLE,抗核糖体P抗体（又称为：抗rRNP抗体）,针对3磷蛋白P0、P1和P2的抗体。诊断SLE的高度特异性标记物。在1015的SLE患者中出现。抗体水平与疾病的活动度相关。与狼疮脑病有关。,（二）抗着丝点抗体（ACA）,ANA分类抗非组蛋白抗体,抗着丝点抗体 靶抗原:着丝点中的4种蛋白分子：A-(17 kDa)、B-(80 kDa)、C-(140 B-(80 kDa)、C-(140 kDa)、D-蛋白(50 kDa)主要的靶抗原是着丝点蛋白B 相关疾病:硬皮病:18%局限型(CREST综合征):80%-95%,四、抗核仁抗体,抗RNA多聚酶/原纤维蛋白抗体,ANA分类抗核仁抗体,靶抗原:核仁内的RNA多聚酶、原纤维 和To/Th抗原 相关疾病：SSc 4%,五、抗其他细胞成分,抗线粒体抗体抗高尔基抗体抗肌动蛋白抗体抗溶酶体抗体抗角蛋白抗体,抗线粒体抗体,抗线粒体的定义：是一种抗细胞浆成分的自身抗体，是非特异性抗体，其靶抗原可分为九种亚型(M1到M9),抗线粒体在荧光显微镜下的模型:,抗线粒体的临床意义:,.AMA-M2:阳性率96%PBC 特异性97%早期甚至肝功能正常无症状期即可阳性AMA-M4和M9:诊断价值还有待进一步评价.现有的数据表明:M4为预后差的指标,M9抗体阳性可能提示预后良好.,抗体对应的抗原 相关疾病M1 梅毒（提示活动性）系统性红斑狼疮 进行性系统性硬化症，干燥综合征 夏普综合征，类风湿性关节炎M2 原发性胆汁性肝硬化（高滴度）其它慢性肝病 进行性系统性硬化症M3 假性狼疮综合征M4 原发性胆汁性肝硬化M5 非特异性胶原病M6 肝炎（异丙异烟肼引起）M7 急性心肌炎 心肌病M8 原发性胆汁性肝硬化M9 原发性胆汁性肝硬化 其它类型的肝炎,抗角蛋白抗体,抗角蛋白抗体的定义:,抗角蛋白抗体在显微镜下的模型:,抗角蛋白抗体的临床意义:抗角蛋白抗体是类风湿性关节炎患者的特异性抗体，而特异性为95%-99%。并且抗角蛋白抗体罕见于其它非类风湿关节炎的炎症性风湿病以及非炎症性风湿病。抗角蛋白抗体的出现可以先于疾病的临床表现，有时可提前几年的时间，对于血清学检测可疑的RA患者，在早期检测到抗角蛋白抗体为疾病进行性发展的标志，抗体滴度与疾病活动性相关，高滴度的抗体对类风湿性关节炎有确诊价值。故对RA的早期预防、早期诊断起到关键性作用。,抗角蛋白的临床意义:抗角蛋白抗体是类风湿性关节炎患者的特异性抗体，特异性为95%-99%抗体滴度与疾病活动性相关，高滴度的抗体对类风湿性关节炎有确诊价值 高抗体滴度可能预示着较严重的类风湿性关节炎类型。,贰、细胞浆：抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）,抗中性粒细胞浆抗体,抗中性粒细胞浆抗体的定义:是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成分为靶抗原的自身抗体.其靶抗原主要为PR3、MPO、弹性蛋白酶、乳铁蛋白酶、组织蛋白酶、溶菌酶、杀菌/膜通透性境高蛋白等.,抗中性粒细胞浆抗体,ANCA包括核周型（PANCA）和细胞浆型（CANCA）两种。前者为针对髓过氧化物（MPO）、弹力酶和乳铁蛋白的抗体；后者针对的抗原为分布在细胞浆的丝氨酸蛋白3（PR3）。,抗中性粒细胞浆抗体的分类:C-ANCA(胞浆型),主要抗原PR3 P-ANCA(核周型),主要抗原MP0,抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）,ANCA的临床意义,c-ANCA和PR3-ANCA 对韦格纳肉芽肿有高度特异性（95%），敏感性80%与病情活动性相关 常作为判断药物疗效和病情复发的指标p-ANCA和MPO-ANCA 不如c-ANCA具有诊断特异性 阳性者血管炎程度较高，其滴度也与病情活动相关 主要与显微镜下多血管炎 坏死性新月体肾小球肾炎 变应性肉芽肿性血管炎 相关,抗中性粒细胞浆抗体在显微镜下的荧光模型:,抗中性粒细胞浆抗体的临床意义:cANCA可见于多种系统性血管炎。主要见于Wegeners肉芽肿，约占ANCA阳性率的80%-95%。cANCA被认为是活动性Wegeners肉芽肿及微动脉炎的特异和敏感的标志抗体 pANCA对UC（溃疡性结肠炎）的敏感性为70%，特异性为90%，可作为对UC和CD（过敏性肠炎）的鉴别诊断及UC的早期诊断。pANCA见于多种系统性血管炎。该抗体也可见于Wegeners肉芽肿，但仅占ANCA阳性率的5%-20%，,不同疾病中出现的ANCA抗体及其可能对应的抗原,各论,自身抗体风湿病中的应用,疾病标志性自身抗体非常少见 SLE：抗Sm、抗rRNP、抗pANCA。疾病特异性自身抗体：SLE：抗双链dSDNA疾病相关性自身抗体：PSS：抗SSA、抗SSB疾病非特异性自身抗体生理性自身抗体低滴度非特异性自身抗体,一.根据临床意义分类,抗核抗体谱抗中性粒细胞浆抗体谱抗磷脂抗体谱类风湿因子抗体谱不育不孕抗体谱恶性贫血抗体谱重症肌无力抗体谱等。国外临床常规自身抗体检测项目达百种以上，而我室现开展项目不足20项。,二.根据疾病的类别分类,全自动自身抗体分析仪,自动化检测检测定量化单个项目随时检测多个项目同时检测45-90分钟报告结果原厂质控和校正血清精确温度调控系统五点定标、三重检测,风湿病的实验室诊断,血清学检查 自身抗体特异性 非特异的免疫相关指标滑液分析一般的实验室检查项目,常见的自身抗体及其检测方法,(1),(2),常见的自身抗体及其检测方法,抗Ku抗体（Ku),抗Mi抗体（Mi-2）,抗PM-Scl抗体,抗JO-1抗体（JO-1）,多发性肌炎、皮肌炎,抗线粒体抗体M2型（AMA-M2）,原发性胆汁性肝硬化,抗nRNP抗体（U1-snRNP）,混合性结缔组织病（MCTD）,抗Scl-70抗体（Scl-70）,抗着丝点B抗体（CENP-B）,系统性硬化,抗SSB/La抗体,抗SSA/R052抗体,抗SS-A/R060抗体,干燥综合征/系统性红斑狼疮,抗核糖体P蛋白（PO）,抗增殖细胞核抗原抗体（PCNA),抗Sm抗体,抗组蛋白抗体,抗核小体抗体,抗双链DNA抗体IgG抗体,系统性红斑狼疮,项 目 名 称,疾 病,ANA谱17项（免疫印迹法）,(3),常见的自身抗体及其检测方法,SLE患者特异性自身抗体,靶抗原 阳性率(%)ssDNA 70-95dsDNA 30-90组蛋白 40-80U1-nRNP 15-40Sm 5-30SS-A 20-60SS-B 10-20核糖体P蛋白 5-15增殖性细胞核抗原I(PCNA)3心磷脂，2-糖蛋白1 20-40Ku 5-10抗核小体抗体 90,多肌炎和皮肌炎抗体谱,靶抗原 阳性率(%)ssDNA40-50Jo-125-35PM-Scl(重叠综合征)8Mi-2 5Ku(与硬皮病的重叠综合征)1-7PL-7、PL-12、OJ、EJ、KJ 2-3,原发性干燥综合征抗体谱,靶抗原 阳性率(%)SS-A 40-95SS-B 40-95ssDNA 40-95,进行性系统性硬化症抗体谱,靶抗原 阳性率(%)着丝点 80-95Scl-70 25-75ssDNA 30-60原纤维蛋白 5-10RNA 多聚酶 4PM-Scl(重叠综合征)3NOR-90(核仁形成区)少见Ku(与多肌炎的重叠综合征)1-7,可出现ANA的感染、药物,疟疾血吸虫结核麻风沙门氏菌克雷伯菌EB病毒HIV,肯定的药物肼苯哒嗪普鲁卡因酰胺异烟肼可能的药物(近80种）米诺环素SASPEtanercept,Infliximab,可出现ANA的肝病慢性活动性肝炎原发性胆汁性肝硬化自身免疫肝炎自身免疫胆管炎可出现ANA的肺病特发性肺纤维化石棉导致的纤维化原发性肺动脉高压可出现ANA的肿瘤白血病黑色素瘤实体瘤（卵巢瘤、乳腺癌、肺癌、肾癌）淋巴瘤,可出现ANA的血液病特发性血小板减少性紫癜自身免疫性溶血性贫血可出现ANA的内分泌病1型糖尿病Grave病Hashimoto甲状腺炎,类风湿关节炎,RA自身抗体谱及临床意义,RF 60RA中出现，量与RA活动性及 严重性呈正相关。亦在其它CTD出现 抗CCP 在50RA中出现（聚角蛋白微丝 蛋白）特异性较高AKA（抗角蛋白抗体）在40RA阳性APF（抗核周因子）在52RA阳性抗RA33RA阳性率为35抗Sa在部分RA阳性,类风湿因子（RF),抗原：变性的IgG Fc段意义RA阳性率70%，阳性预测值24%。滴度与疾病活动平行其他风湿病可阳性感染、非感染疾病、正常人可阳性,类风湿关节炎（RA）,类风湿因子（RF）早期诊断的系列指标抗RA33/36抗体抗核周因子（APF）抗角蛋白抗体（AKA）抗Sa抗体抗环瓜氨酸抗体（抗CCP）,类风湿因子（RF）,抗人IgG分子Fc片段上抗原决定簇的特异性抗体,分为IgM、G、A、E型RF在RA中的阳性率为70%，是诊断RA的重要标准之一RF含量与病情的活动性和严重性成正比，持续高滴度的RF常提示RA病情活动，骨侵蚀发生率高，常可伴有皮下结节或血管炎等关节外表现，提示预后不良,类风湿因子（RF）,RF并非RA独有的特异性抗体，对RA的诊断不具特异性 SLE 30%SS 70%90%SSc 20%30%MCTD 50%60%非风湿性疾病 5%以下的正常人RF阳性不等于一定就是RARF阴性也不等于一定就不是RA,非风湿病中的RF,RF常用检测方法,RF 1：40阳性 乳胶凝集法（测IgM-RF）RF 256 Iu/ml 双抗夹心ElISA法(测总RF）RF-IgG 110IU/ml-IgA 18IU/ml ELISA法-IgM 200IU/ml,RA早期诊断的系列指标,敏感性 特异性抗RA33/36抗体 35.8%99.6%APF 40%-80%70%-90%AKA 40%-55%85%-95%抗Sa抗体 40%-60%98.6%抗CCP 46%-70%96%,抗核周因子-(APF),靶抗原位于人颊粘膜细胞的核周颗粒中间接免疫荧光法检测对RA诊断的特异性高达90%以上APF阳性与病情相关，往往提示预后欠佳（尤其对RF阴性的患者）,抗角蛋白抗体-（AKA）,取6周龄雄性Wistar大鼠的中1/3食道切片为底物间接免疫荧光法以典型的角质层板层状、线状沉积的荧光为阳性对RA诊断的敏感性44.13%、特异性89%与RA的病情严重程度相关,提示预后不良,抗 Sa 抗 体,新鲜胎盘提取免疫印迹法分子量为50和/或55KD部位出现条带者为阳性敏感性 36.7%、特异性 91.6%HLA-DR4相关是慢性、严重RA的早期标记RA的滑液中也有高浓度的抗Sa抗检出，提示在滑膜可能发生原位免疫反应,抗RA33/36抗体,从Hela细胞或Ehrilich瘤细胞核中提取免疫印迹法分子量33或36KD区带出现阳性者为阳性敏感性 35.8%、特异性 99.6%,抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体,1998年 证实抗filaggrin相关抗体识别的主要抗原决定簇成分是瓜氨酸2000年 合成环瓜氨酸肽（CCP），并将抗CCP抗体用于RA检测ELISA法检测对RA诊断高度敏感和特异阳性者骨破坏较阴性者严重对RA的早期诊断和预后评估都很有意义,抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP）,瓜氨酸是RA血清抗聚角蛋白微丝蛋白相关 抗体的主要抗原决定簇对RA诊断具有高度特异性（98%）可在RA早期出现预测早期关节炎发展为RARA关节侵蚀破坏的早期识别及预测,抗肽酰基精氨酸脱亚氨酶(PADI4)抗体,RA抗PADI4抗体阳性率为47%,抗PADI4抗体对RA诊断的敏 感性为43%,特异性为92%。RF阴性患者PADI4抗体阳性 50%;AKA阴性的患者PADI4抗体阳性43%;抗CCP抗体阴性的患者抗PADI4抗体阳性60%。,抗突变型瓜氨酸化波形蛋白(MCV)抗体,136例RA患者抗MCV抗体敏感性和特异性分别为95.6%和80.8%。抗MCV抗体与抗CCP抗体、AKA和RF的重叠阳性率分别为91.9%、52.8%和76.5%。,系统性红斑狼疮,系统性红斑狼疮（SLE）,是一种临床表现有多系统损害症状的慢性系统性自身免疫性疾病，其血清有以抗核抗体为主的大量不同的自身抗体自身抗体（1）抗核抗体谱ANA、抗ds-DNA、抗ENA抗体（2）抗磷脂抗体（3）抗组织细胞抗体抗RBC抗体 抗血小板相关抗体 抗神经元抗体（4）其它RF、p-ANCA,抗核抗体（ANA）,定义以细胞核内物质为抗原的抗体临床意义SLE的筛查抗体:95%阳性，但滴度与SLE活动性无相关 阴性基本可排除SLE阳性并非SLE特异 阳性并非风湿病特异:风湿病（SLE、SSc、SS、RA)非风湿性疾病（感染、慢肝、肺纤维化、肿瘤）服用某些药物（INH、苯妥英钠、肼苯达嗪、普鲁卡因酰胺）,抗核抗体（ANA）,方法间接免疫荧光法结果判断:滴度1：100为阳性 常见核型5种 不同核型的临床意义不同,ANA常见五种核型及临床意义,核膜型与抗ds-DNA有关，多见于SLE，特别是有肾炎者均质型与AHA、抗DNA有关，引起LE形成 主要见于SLE、药物性狼疮斑点型与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体核仁型多见于硬皮病着丝点型多见于CREST综合征,核膜型 与抗ds-DNA有关，多见于SLE，特别是有肾炎者,均质型与AHA（抗组蛋白抗体）、抗DNA有关，引起LE形成主要见于SLE、药物性狼疮,斑点型 与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体,核仁型多见于硬皮病,着丝点型多见于CREST综合征,ANA检测方法,间接免疫荧光法印迹法ELISA法,抗核抗体谱（ANAs）,定义：以细胞核内物质为抗原的抗体 抗DNA抗体抗ss-DNA 抗ds-DNA 抗组蛋白抗体H1，H2A，H2B，H3，H4 抗非组蛋白抗体抗ENA抗体 抗着丝点抗体 抗核仁抗体 其它线粒体、溶酶体、高尔基体等,抗ds-DNA抗体,临床意义 对SLE的诊断有较高特异性 滴度与SLE活动相关，可作为病情监测及疗效观察指标 与SLE肾损害有关检测方法 放免法（Farr)敏感，有利于早期预测 检测高亲合力的抗ds-DNA 间接免疫荧光法(IF)特异 ELISA可检测低亲合力的抗ds-DNA 有助于中枢狼疮的病情监测 金标免疫斑点法,抗ENA抗体,抗RNP MCTD100%阳性，且滴度高双手肿胀，雷诺现象，肌炎，指（趾）端硬化肾脏保护性抗体？抗Sm SLE的标记性抗体，阳性率30%有助于早期、不典型及治疗缓解后SLE的回顾性诊断抗Sm阳性一定伴抗RNP阳性，但抗RNP阳性可单独存在抗SSA 原发性SS：60-75%SLE:40-50%与皮损、光过敏、白细胞减少、淋巴结肿大、血管炎、紫癜相关 可造成新生儿狼疮、婴儿心脏传导阻滞抗SSB原发性SS：40%，较抗SSA更特异其它CTD伴抗SSB者常伴继发性SS,抗ENA抗体,抗Scl-70 硬皮病标记性抗体抗Jo-1 多肌炎/皮肌炎标记性抗体抗Rib胞浆抗原核糖体位于胞浆内 抗Rib阳性+其它自身抗体阴性=ANA阴性 临床意义 是SLE的又一特异性抗体，阳性率10-20%多见于SLE活动期 与抗ds-DNA抗体的消长相平行 但不会随病情缓解立即消失 可持续1-2年后才转阴,抗核小体抗体（AnuA）,核小体是细胞染色质中的一种成分，它是由DNA和组蛋白以特殊的方式相连而组成，在SLE的诱导和致病中起重要作用对SLE的早期诊断有重要意义比抗ds-DNA、抗组蛋白抗体更早出现阳性率：50%90%特异性98%,血管炎,血管炎,抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）,ANCA的临床意义,c-ANCA和PR3-ANCA 对韦格纳肉芽肿有高度特异性（95%），敏感性80%与病情活动性相关 常作为判断药物疗效和病情复发的指标p-ANCA和MPO-ANCA 不如c-ANCA具有诊断特异性 阳性者血管炎程度较高，其滴度也与病情活动相关 主要与显微镜下多血管炎 坏死性新月体肾小球肾炎 变应性肉芽肿性血管炎 相关,血管炎相关抗体,cANCA 靶抗原：PR-3(蛋白酶3pANCA 靶抗原：MPO(髓过氧化酶)弹性蛋白酶 乳铁蛋白,Wegener肉芽肿 其量指示病情活动其它血管炎及炎性 肠病,抗丝氨酸蛋白酶（PR3)抗体,抗原：丝氨酸蛋白酶（PR3）意义主要出现在Wegner肉芽肿和显微镜下多动脉炎 在Wegner肉芽肿、显微镜下多动脉炎cANCA持续高滴度或滴度升高常与疾病复发相关(2/3)。,针对蛋白酶3的cANCA的意义,抗髓过氧化物酶（MPO）抗体,抗原：髓过氧化物酶（MPO）意义可出现于多种血管炎性疾病。也可见于SLE、药物等,针对MPO的pANCA的意义,cANCA(胞浆型,丝氨酸蛋白酶),pANCA(核周型）1、髓过氧化物酶2、弹力酶3、组织蛋白酶G4、乳铁蛋白5、溶酶体6、细菌增透蛋白7、Azurocidin8、,自身免疫性肝病,自身免疫性肝病,我科开展的自身免疫肝炎系列抗体包括：抗核抗体（ANA）抗肝细胞膜抗体(抗LMA)抗平滑肌抗体（ASMA）抗肝肾微粒体抗体（抗LKM抗体）抗肝-胰抗体(抗LP抗体)抗可溶性肝细胞抗体（抗SLA）抗线粒体抗体（AMA）,自身免疫性肝炎（AIH）ANA 抗平滑肌抗体（SMA）抗肝肾微粒体抗体原发性胆汁性肝硬化（PBC）抗线粒体抗体（AMA）M2原发性硬化性胆管炎 ANCA阳性,自身免疫性肝病,原发性胆汁性肝硬化抗体谱,靶抗原 阳性率(%)AMA M2 85-95 AMA M4 40-60 AMA M9 35 Sp-100(核点)30 肌动蛋白 10-20,AMA M2,靶抗原:由3种不同的乙酰基转移酶 组成的多酶复合物：-丙酮酸脱氢酶(74 kDa)-2-酮酸脱氢酶(50 kDa)-2-酮戊二酸脱氢酶(50kDa)与丙酮酸脱氢酶复合物相关 的蛋白X(52 kDa)相关疾病:PBC:85%-95%,自身免疫性肝炎抗体谱,靶抗原 阳性率(%)肝特异性蛋白(LSP)50-100肝细胞膜抗原(LMA)35-100唾液酸糖蛋白受体 80-90肌动蛋白 40-90ANA 30-40核膜?SLA/LP 15-30肝肾微粒体(LKM-1)7LC-1?,抗磷脂抗体(APA),APA定义：是一大类针对各种负电荷磷脂一蛋白复合 物的自身或同种抗体。APA的检测方法：ELISA法ACL LAC的检测方法：白陶土凝血时间 激活的部分凝血活酶时间 复钙凝血时间 鲁塞尔蝰蛇毒凝血时间等。所测得时间延长,而不能为正常血浆所纠正时,则提示有LAC存在。,LAC和ACL可出现于多种自身免疫病：,溶血性贫血ITP（近30%）幼年关节炎RA（7-50%）银屑病关节炎(28%)硬皮病（25%）白塞病（20%）,干燥综合征(25-42%)MCTD（22%）PM/DM风湿性多肌痛(20%)慢性盘状狼疮雷诺氏现象,APL也可出现在感染和使用某些药物病人中,甲肝流行性腮腺炎败血症HIV梅毒HTLV-1疟疾卡氏肺囊虫感染性单核细胞增多症风疹,氯苯嗪苯妥英肼苯哒嗪普鲁卡因酰胺奎尼丁奎宁丙戊酸盐阿莫西林普洛奈尔可卡因磺胺嘧啶乙胺嘧啶链霉素,抗b2糖蛋白-1(b2GP-1)抗体,抗原：b2糖蛋白-1(与磷脂结合的凝血抑制因子)意义常与其他抗磷脂抗体同时出现，但有11%的APS病人仅有抗b2GP-1。抗b2GP-1较单独抗心磷脂抗体与APS相关性更好。感染、药物病人APL无抗b2GP-1活性。,哪些患者需要查自身抗体,不明原因发热不明原因蛋白尿、血尿、浮肿不明原因多关节炎雷诺现象面部对称性红斑,反复口腔溃疡不明原因带肌疼痛长期口干、或眼干不明原因肺部间质性炎症不明原因多系统损害等,其他,(一)皮肌炎/多发性肌炎（PM/DM）,免疫学检查ANAENA抗Jo-1阳性其它检查肌酶谱肌酸磷酸激酶（CPK）:MM-心肌和骨骼肌 MB-心肌 BB-平滑肌和脑内乳酸脱氢酶（LDH）谷草转氨酶（AST）谷丙转氨酶（ALT）碱性磷酸酶（ALP）,(二)干燥综合征（SS）,ANA阳性率40%70%ENA抗SSA抗体阳性率70%96%抗SSB抗体阳性率50%87%抗-Fordrin对于pSS或sSS的诊断有一 定意义，但特异性和敏感性并不理想。RF阳性率75%100%高球蛋白血症WBC下降,(三)系统性硬化病（pSS）,ANA阳性率50%55%ENA抗Scl-70阳性率15%40%抗着丝点抗体(ACA)阳性,(四)混合性结缔组织病（MCTD）,ANA阳性ENA抗RNP高滴度阳性,（五）抗磷脂抗体综合征（APS）,是一种非炎症性自身免疫病，临床上以动/静脉血栓形成、习惯性流产和血小板减少等症状为表现，血清中存在抗磷脂抗体血清学检查抗心磷脂抗体（ACA）IgG、IgM、IgA（ELISA）抗2糖蛋白1抗体（抗2-GP1)狼疮抗凝物（LA）凝血酶原时间（PT）激活的部分凝血活酶时间（APTT）白陶土凝集时间（KCT）蛇毒试验（RVVT）,抗磷脂抗体,抗2-GP1抗体比LA和ACA在APS患者中更具有特异性，是导致APS的主要抗体抗2GP1抗体只出现于自身免疫性疾病,而ACA也可出现于一些感染性疾病,如梅毒、AIDS、肝炎、结核等,风湿病的实验室诊断,自身抗体特异性非特异的免疫相关指标一般的实验室检查项目血常规尿常规肝功能肾功能等,注意事项,选择做哪些检查项目时要重点突出 避免“大撒网”解释实验结果时应考虑以下几个问题实验方法本身的敏感性、特异性、可靠性及实验室之间的差异性结合临床应把与之相关的一组实验结果放在一起考虑,全国自身抗体检测质量控制总结,由中华医学会风湿病分会计划 参与质控的医院和检测的项目逐年增多，多为三甲医院,自身抗体的检测对于风湿性疾病的诊断、病情评估、治疗和预后都及其重要。但影响其检测的因素很多，如检测方法、检测技术、操作人员、使用仪器等等，这些都会导致出现假阳性或假阴性，因此对自身抗体进行检测质量控制是非常必要的。,目前自身抗体检测过程中主要存在以下三个问题：1.检测方法的差异2.检测试剂盒不规范3.检测人员的知识水平差异,建议：统一检测方法以统一敏感