酵母形态观察及死活细胞鉴别微生物大小测定显微镜直接计数法课件.ppt

微生物学实验Lab work on Microbiology,三峡大学化学与生命科学学院微生物学教学组,实验指导老师：涂 璇,实验七、酵母形态观察、死活细胞鉴别和显微镜直接计数法,一、目的和要求二、实验原理三、实验器材四、实验步骤五、实验报告,一、实验目的,1 观察酵母菌的形态和出芽生殖方式2 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法,酵母形态观察及死活细胞鉴别,二、基本原理,酵母菌是单细胞真核微生物，通常以出芽方式进行无性繁殖，有的进行分裂繁殖；通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖，有性繁殖要在特定培养条件下才能进行。染料美蓝氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞分泌的还原酶，能使美蓝由蓝色的氧化型转变为无色的还原型。借此即可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。,三、实验器材,1 菌种：酿酒酵母2 仪器：显微镜、载玻片、盖玻片等,四、实验步骤,美蓝浸片的观察在载玻片中央加一滴0.1吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。（染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。镜检。将制片放置约3min后再次镜检并对照，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。,滴加染液涂片加盖玻片镜检3min后再次镜检,五、实验报告,绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征思考题1、酵母死活细胞鉴别的基本原理是什么？,一、实验目的,1 明确血细胞计数板计数的原理2 掌握用血细胞计数板进行微生物计数的方法,显微镜直接计数法,二、基本原理,显微镜直接计数法血球计数板的结构：四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格,网，每个方格网共分为九个大方格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格；另一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格，无论哪种每个大方格中的小方格都是400个。,每一个大方格边长为1mm，高0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。计数时，通常只用5个中格内的菌体(孢子)数即可。然后求出每个中方格的平均值，再乘上25或16，得出一个大方格中的总茵数，再换算成1ml菌液中的总菌数。若设5个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，（1）如果是25个中方格计数板，则计算方法为：1ml菌液中的总菌数=（A/5)25104B=50000AB(个)（2）如果是16个中方格计数板，则计算方法为：1ml菌液中的总菌数=(A/4)16104B=40000AB(个),三、实验器材,1 菌种：酿酒酵母2 仪器：血球计数板、显微镜、载玻片、盖玻片等,四、实验步骤,1.菌悬液制备，以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。2.取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。3.取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。4.静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央。,5.在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。6.清洗血细胞计数板 计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。,五、实验报告,实验结果,结 束请注意实验台面清洁！请值日生留下来打扫卫生！,