《药物分析》——第七章课件.ppt
2023/3/16,基本要求,一、掌握芳胺类、苯乙胺类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法。二、熟悉苯丙胺类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。,2023/3/16,第一节 芳胺类药物的分析,芳胺类药物分为两类,芳伯氨基未被取代,芳伯氨基被酰化,一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质,（一）基本结构与典型药物,2023/3/16,苯佐卡因,盐酸普鲁卡因,2023/3/16,盐酸丁卡因,盐酸普鲁卡因胺,2023/3/16,1.芳伯氨基特性：重氮化偶合反应；芳醛缩合成Schiff碱；易 氧化变色等。盐酸丁卡因无此特性。,（二）主要理化性质,水解特性：分子结构中的酯键或酰胺键易水解，除盐酸 丁卡因外水解产物为对丁基苯甲酸外，上述 均为对氨基苯甲酸。,弱碱性：除苯佐卡因外，其余均含有叔胺氮的侧链，故具 有弱碱性。,4.其它特性：因结构中有 芳伯氨基或同时具有脂烃胺侧链，其 游离碱多为碱型油状液体或低熔点固体，难溶于 水，可溶于有机溶剂。其盐酸盐则易溶于水。,2023/3/16,二、酰胺类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构与典型药物,2023/3/16,对乙酰氨基酚（扑热息痛）,醋氨苯砜,2023/3/16,盐酸布比卡因,盐酸利多卡因,2023/3/16,1.水解后显芳伯氨基特性：分子结构中含有芳酰氨基，酸 水解后显芳伯氨基的特性反应。注意空间位阻的影响。2.水解产物易酯化：对乙酰基酚和醋氨苯砜，酸水解生成 醋酸，在硫酸中与乙醇反应，发出醋 酸乙酯香味。,（二）主要化学性质,2023/3/16,3.酚羟基特性：对乙酰氨基酚有游离酚羟基；醋氨苯砜酸 水解有酚羟基，可与FeCl3发生显色反应，可相互区别。4.弱碱性：利多卡因和布比卡因烃胺侧链有叔胺氮，显 碱性，可与生物碱沉淀剂发生沉淀反应，可 相互区别。5.与金属离子发生沉淀反应：利多卡因和布比卡因酰胺 基上氮可与Cu2+,Co2+生成 有色配位化合物沉淀。,2023/3/16,三、鉴别试验,（一）重氮化-偶合反应 分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，均可发生此反应。,2023/3/16,直接反应：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸普 鲁卡因胺,间接反应：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜,利多卡因和布比卡因由于空间位阻很难发生此反应。,2023/3/16,2023/3/16,丁卡因虽无芳伯氨基，但可与NaNO2反应生成N亚硝基化合物的乳白色沉淀。,2023/3/16,2023/3/16,（二）与三氯化铁反应,对乙酰氨基酚+FeCl3,蓝紫色化合物,2023/3/16,1.与铜和钴离子反应：利多卡因与硫酸铜生成蓝紫色配位化合物；与氯化钴生成亮绿色沉淀。,（三）与金属离子反应,2023/3/16,2023/3/16,2.羟肟酸铁盐反应 基于普鲁卡因胺分子中的 芳酰胺结构。,2023/3/16,1.盐酸普鲁卡因的鉴别,(四)水解产物反应,2023/3/16,2023/3/16,2.苯佐卡因的鉴别,苯佐卡因+NaOH,乙醇,乙醇+I2+NaOH,CHI3（碘仿臭气，黄色沉淀）,2023/3/16,(五)制备衍生物测熔点,1.三硝基苯酚衍生物的制备：利多卡因和布比卡因,2023/3/16,2.硫氰酸盐衍生物的制备：盐酸丁卡因,2023/3/16,(六)紫外特征吸收光谱法,1.在max 处测定供试液的百分吸收系数。例如：对乙酰氨基酚在0.4%NaOH中于max=240nm;E1%1cm=715 在HCl(0.1mol/L)-甲醇于max=249nm;E1%1cm=880,2.在规定的浓度测定max 例如：醋氨苯砜5g/ml;max=256nm;284nm 再例如：盐酸普鲁卡因胺5g/ml;max=280nm,2023/3/16,（一）对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查 1.乙醇溶液的澄清度与颜色：因其生产工艺用铁粉作还原剂，可 能带入，致使乙醇溶液产生浑浊，中间体对氨基酚易氧化产生 有色化合物，在乙醇溶液中显橙红色或棕色。,四、特殊杂质检查,检查方法：配制0.1g/ml本品乙醇溶液，溶液应澄清，无色；如显浑浊，与1号浊度标 准液比较，不得更浓；如显色，与棕红色2号或橙红色2号 标准液比较，不得更深。,2023/3/16,2.有关物质检查：Ch.P是以对氯苯乙酰胺为对照品，采用TLC 法 中的杂质对照品法。,3.对氨基酚检查：利用对氨基酚在碱性条件下可与 亚硝基铁氰化钠生成蓝色配位化 合物，采用比色法。,2023/3/16,(二)盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查,为什么要检查？,怎样检查？,采用TLC法中的杂质对照品法进行检查。,2023/3/16,（一）亚硝酸钠滴定法 Ar-NH2;Ar-NHCOR;Ar-NO2均可采用此法 Ch.P中的苯佐卡因、盐酸普鲁卡因和盐酸普鲁卡因胺及其制剂可直接采用本法；醋氨苯砜及注射液水解后用本法。,五、含量测定,2023/3/16,2023/3/16,1.原理：,Ar-NHCOR+H2O,Ar-NH2+RCOOH,H+,Ar-NH2+NaNO2+2HCl,Ar-N2+Cl-+NaCl+2H2O,2023/3/16,测定主要条件：,(1)加KBr增加反应速度,重氮化的反应历程为：,NaNO2+HCl,HNO2+NaCl,HNO2+HCl,NOCl+H2O,KHCl,2023/3/16,2023/3/16,KBr+HCl,HBr+KCl,HNO2+HBr,NOBr+H2O,KKBr,KHBr 比KHCl大300倍,生成NOBr量大得多加快反应速度,2023/3/16,(2)加过量HCl加速反应：重氮化速度加快；重氮盐在酸性介质中稳定；防止生成氨基偶氮化合物。Ar-N2+Cl-+H2N-Ar Ar-N=N-NH-Ar+HCl 一般摩尔比为Ar-NH2:HCl=1:2.56。,2023/3/16,(3)室温条件下滴定:温度高反应速度快；每升高10加快2.5倍,太高,可使Ar-N2+Cl-+H2O,Ar-OH+N2+HCl,(4)滴定管尖端插入液面下滴定,2023/3/16,3.指示终点的方法(1)永停滴定法 溶液 检流计 终点前：无过量 无电流 HNO2 终点时：有过量 有电流（使指针偏离零 HNO2 永停在某一位置）(2)外指示剂法 用KI-淀粉指示剂 指示终点的原理：2NaNO2+2KI+4HCl 2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O,2023/3/16,(二）非水溶液滴定法,基于盐酸丁卡因、盐酸利多卡因和盐酸布比卡因 侧链叔胺氮具有弱碱性，用冰醋酸溶解。盐酸丁卡因在冰醋酸中碱性仍较弱，可加醋酐可增加其碱性。因醋酐合乙酰氧离子比醋酸和质子的酸性强，可增加碱性。采用高氯酸滴定液进行滴定。,2(CH3CO)2O,(CH3CO)3O+CH3COO-,相当于,BHCl+Hg(Ac)2,BHAc+HgCl2,BHAc+HClO4,BHClO4+HAc,2023/3/16,1.对乙酰氨基酚原料的含量测定 在0.4%NaOH介质中；257nm D%E1%1cm样 E1%1cm标100；E1%1cm715 2.对乙酰氨基酚片溶出度测定（测定条件同上）1片稀HCl 24ml+H2O 1000ml 精密量 取5ml+0.4%NaOH10ml+H2O 100ml 257nm测定A。W110005100100C（g/100ml)W(g)=200 C;C=A/715 溶出度W标示量10080为合格,（三）分光光度法,2023/3/16,中性条件下的重氮化反应,（四）比色法,盐酸普鲁卡因+1,2-蒽醌-4-磺酸钠,pH4-9,棕红色化合物，max482nm处测定A,2023/3/16,（五）盐酸普鲁卡因胺的快速荧光测定,ex400nm（激发波长）、em485nm（发射波长）处测定荧光强度，标准曲线法定量。,盐酸普鲁卡因胺+荧胺,pH7.5,荧光物,2023/3/16,此法主要用于盐酸普鲁卡因注射液的测定。因该注射液中 常含有降解产物对氨基苯甲酸；可以苯甲酸为内标同时测定两 者的含量，该法简单准确。色谱条件：色谱柱为BondapakC18 300mm4mm 流动相为甲醇1HAc(40:60);UV检测器250nm.,（六）HPLC法,2023/3/16,第二节 苯乙胺类药物的分析,一、苯乙胺类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构与典型药物,*,2023/3/16,常见的苯乙胺类药物,2023/3/16,2023/3/16,2023/3/16,2023/3/16,（二）主要化学性质,1.弱碱性 本类药物结构中有烃氨基侧链，为仲胺氮 显弱碱性。2.酚羟基特性 本类药物结构中有酚羟基，可与 FeCl3;发生氧化。3.光学活性 多数药物结构中有手性碳原子，具有旋 光性。,2023/3/16,二、鉴别试验,(一)与三氯化铁反应,Ar-OHFeCl3,络合显色 碱液,颜色变化,(二）甲醛硫酸反应 在此试剂中形成醌式结构而显色。,2023/3/16,药 物 三氯化铁 甲醛硫酸 肾上腺素 0.1mol/LHCl显绿色,甲氨试液显红紫红 红色 重酒石酸去甲肾上腺素 绿色,加Na2CO3试液显紫色红色 淡红色 盐酸去氧肾上腺素 紫色 玫瑰红橙红棕红 盐酸异丙肾上腺素 深绿色,加5Na2CO3试液显蓝紫色红色 棕色暗紫色,2023/3/16,(三）氧化反应,本类药物具有Ar-OH，易被氧化剂I2,H2O2,K3Fe(CN)6氧化而显色，例如：肾上腺素在中性或酸性条件下，被I2,H2O2 氧化后，生成肾上腺素红；盐酸异丙肾上腺素在酸性条件下，被I2氧 化，生成异丙肾上腺素红。,2023/3/16,(四）紫外特征吸收与红外吸收光谱,例如：盐酸异丙肾上腺素 0.05mg/ml max=280nm A=0.50,这一类药物均可采用红外吸收光谱进行鉴别,2023/3/16,(五）与亚硝基铁氰化钠(Rimini试验）是鉴别脂肪伯氨基的特殊反应；可用于重酒石酸间羟胺鉴别。,D 亚硝基铁氰化钠 丙酮 Na2CO3,红紫色,2023/3/16,(六)双缩脲反应 是鉴别芳环氨基醇的特殊反应；可用于盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱鉴别：,D CuSO4+NaOH,显蓝紫色,乙醚，醚层(紫红色)水层(蓝色),2023/3/16,(一)酮体检查 本类药物在生产过程中多采用酮体氢化制得，若氢化不完全，易引入酮体杂质。采用UV法检查：利用酮体在310nm有吸收，本类药物无吸收。例如：肾上腺素本项检查 配2.0mg/ml=310nm A0.05 盐酸去氧肾上腺素 配2.0mg/ml=310nm A0.02 盐酸异丙肾上腺素 配2.0mg/ml=310nm A0.15,三、特殊杂质检查,2023/3/16,(二)有关物质的检查 盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇TLC 盐酸苯乙双胍-PC 盐酸氨溴索HPLC采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。,2023/3/16,盐酸氨溴索的检查方法对照样品制备：本品供试品溶液对照溶液(1/100)供试样品制备：本品甲醇溶解加甲醛溶液加热吹干溶剂用水和流动相溶解HPLC分析色谱条件：RP-HPLC 0.01mol/lNH4H2PO4-CH3CN(50:50);248 nm分析：对照溶液主成分峰为满量程的2025%，记录至主成分峰保留时间的2倍，注入供试品溶液，如有杂峰，各杂峰的面积之和不得大于对照液主峰面积的三分之一。,2023/3/16,(三)盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查PC法样品制备：本品甲醇溶解即得展开：7.550 cm，EtOAc-ethanol-water(6:3:1)显色：10铁氰化钾10亚硝基铁氰化钠10NaOH检测：剪下显色斑点后甲醇萃取用UV法测定,2023/3/16,(一)非水溶液滴定法 本类药物的原料药多采用此法。1.重酒石酸去甲肾上腺素的测定 相当于B的有机酸盐可直接滴定。2.盐酸克仑特罗的测定 相当于B的HX酸盐不能直接滴定，需加Hg(Ac)2处理后滴定。3.硫酸沙丁醇的测定 相当于B的H2SO4盐可直接滴定,也可处理后滴定。,四、含量测定,2023/3/16,2023/3/16,(二)溴量法 本类药物重酒石酸间羟胺、盐酸去氧肾上腺素及其注射液用此法。,基本原理：,2023/3/16,基本操作：供试品精密称定加水溶解后精密加溴滴定液盐酸放置并振摇加碘化钾振摇用Na2S2O3滴定至近终点加淀粉指示液继续滴定至蓝色消失同时进行空白实验,2023/3/16,（三）提取酸碱滴定法,基本原理：药物的盐酸盐或硫酸盐易溶于水，而药物本身不溶于水，加适量碱化试剂后，用适当的有机溶剂萃取，提取也蒸干后用中性乙醇溶解，用标准酸液直接滴定，或加入滴定过量的标准酸溶液，用标准碱溶液进行回滴。,2023/3/16,硫酸苯丙胺的含量测定：,BH2SO4+NaOH+NaCl,乙醚,提取B,+H2SO4,蒸去乙醚,终点,2023/3/16,(四)紫外分光光度法与比色法 利用药物分子结构中的芳伯氨基进行重氮化偶合反应，以及分子结构中的Ar-OH与Fe3络合显色，进行比色测定。盐酸异丙肾上腺素注射液 重酒石酸间羟胺注射液 盐酸甲氧明注射液 硫酸沙丁胺醇注射液及胶囊,2023/3/16,例如：盐酸克伦特罗栓的含量测定,上述偶合剂可与HNO2显色，干扰比色测定，可先加氨基磺酸铵分解过量的HNO2。,HNO22H2NSO3NH4,2N2+(NH4)2SO4+H2SO4+H2O,2023/3/16,(五)荧光分光光度法,肾上腺素测定：,ex410nm、em520nm处测定荧光强度，对照法定量。,肾上腺素+I2,肾上腺红,一定条件下,N-甲基-3,5,6-三羟基吲哚,2023/3/16,(六)HPLC法 例一、重酒石酸去甲肾上腺素注射液的测定 采用RPIP-HPLC-UV法；用外标一点法进行定量测 定。例二、血浆中儿茶酚胺类（肾上腺素类）药物的测定 采用RPIP-HPLC-ECD 法；用标准曲线法进行定量 测定。,2023/3/16,(七)衍生化GC法（GC-FID 以盐酸美西律作内标物)应用示例：盐酸芬氟拉明片的含量测定 盐酸芬氟拉明三氟乙酰肝 衍生物,2023/3/16,第三节 苯丙胺类药物的分析,基本结构与主要性质,ACE抑制剂,2023/3/16,马来酸依那普利,盐酸贝那普利,中国药典收载的代表药物,2023/3/16,西那普利,赖诺普利,2023/3/16,主要性质1、酸碱性：分子中含有-COOH，显酸性；含有烃氨链，显弱碱性2、氨基酸特性：结构是脯氨酸的衍生物3、光学活性：分子中含有不对称中心，具有旋光性4、水解特性：本类药物大多是Pre-drug，在体内转化为活性代谢物,2023/3/16,二、鉴别试验,一、物理与化学鉴别法1、熔点测定法BP(马来酸依那普利）2、高锰酸钾反应红色消失（氧化还原反应）3、溴间苯二酚反应：先进行溴代反应，使溴颜色消失，再与间苯二酚反应，显棕红色4、羟胺三氯化铁反应：先进行羟胺的生成（羟胺甲醇液KOH乙醇液）FeCl3 显棕红色,2023/3/16,二、旋光法,2023/3/16,三、光谱与色谱法鉴别,2023/3/16,三、特殊杂质的检查,1、马赖酸依那普利有关物质的检查：依那普利拉依那普利双酮采用HPLC法检查2、西那普利中有关物质的检查：A、B、C、D四个主要杂质杂质A-TLC法检查（硅胶G板，目视比较），不得超过0.1BP杂质B、C、D及其它杂质HPLC法，分别不得超过0.5、0.1、0.2和0.1BP,2023/3/16,2023/3/16,TLC法检查A杂质制备样品液：供试品溶液（40 mg/ml）、对照品溶液a（40 g/ml)、对照溶液b（0.5 mg/ml）点样与展开：硅胶G板，HAc-H2O-n-Hex-MeOH-EtOAc(1:1:3:3:12)显色：KBiI4-HAc(1:10)比较：供试品如显杂质A斑点，颜色对照液a的主斑点。要求对照液b显示两个清晰分开的斑点时，结果有效。,2023/3/16,HPLC法检查B、C、D和其它杂质,样品测定液配制：供试品溶液（0.5 mg/ml)、对照溶液a(2.5 g/ml）、对照溶液b（杂质D对照品0.5 mg/ml）色谱条件：ODS 色谱柱，四氢呋喃三乙胺为流动相，流速1.0ml/min，检测波长：214nm色谱系统适用性：分别进样对照溶液a和b，使对照溶液a的主成分峰为满量程的50，在对照溶液b中西那普利与杂质D的分离度不得低于2.5。,2023/3/16,测定与评判：1、色谱图记录至峰A被洗脱为止2、杂质B、C、D与西那普利的相对保留时间分别为0.6、1.6、0.93、峰面积杂质B0.5（对照液a的主峰面积）峰面积杂质C0.1（对照液a的主峰面积）峰面积杂质D0.2（对照液a的主峰面积）峰面积其它0.1（对照液a的主峰面积）,2023/3/16,（三）残留溶剂的测定,马来酸依那普利中残留溶剂乙腈的检查 capillary GC法0.041样品溶液的制备：本品加二甲基甲酰胺溶解100mg/ml对照溶液的制备：取乙腈加二甲基甲酰胺溶解40g/ml分析方法：PEG-20M为固定液的毛细管柱，FID检测器，程序升温洗脱：,Injection tem.:200,detector tem.:250,injection volume:1l,2023/3/16,四、含量测定,一、酸碱滴定法：利用本类药物结构中的-COOH和氮原子氨基，可进行酸碱滴定法进行含量分析1、非水滴定法 马来酸依那普利非水碱量法滴定，以冰醋酸和无水二氧六环为溶剂，结晶紫为指示剂，高氯酸为滴定液,2023/3/16,2、水溶液中的滴定马来酸依那普利：供试品新沸过的冷水溶解NaOH滴定电位法指示终点3、在醇水混合溶液中滴定 供试品甲醇和水溶解后进行碱液滴定（雷米普利和西拉普利）,2023/3/16,二、HPLC法,举例说明：马来酸依那普利片的含量测定色谱条件：C8柱，乙腈和磷酸盐缓冲液为流动相，检测波长215 nm，柱温50色谱系统适用性：n300，T2.0,主峰与其它杂质峰的R4.0进样与计算：20 l，外标法定量,2023/3/16,盐酸喹那普利的含量测定色谱条件：CN柱guard column(3 cm 4.6 mm,5 m)，乙腈水甲磺酸为流动相，流速1.5 ml/min，检测波长214 nm色谱系统适用性：主峰与A的R1.75，主峰与B的R3.5，n550，RSD2.0%(n=5),2023/3/16,练习与思考,A型题,1盐酸普鲁卡因注射液中检查的特殊杂质是A.水杨醛 B.间氨基酚 C.水杨酸 D.对氨基苯甲酸 E.氨基酚2对乙酰氨基酚中检查的特殊杂质是A.水杨醛 B.间氨基酚 C.对氨基酚 D.苯甲酸 E.苯酚3肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素中检查的特殊杂质是A.水杨醛 B.间氨基酚 C.对氨基酚 D.酮体 E.苯甲酸,2023/3/16,B型题,A。硫酸铜反应 B.氧化反应 C.还原反应 D.水解后重氮化-偶合反应 E.重氮化-偶合反应 1.盐酸利多卡因 2.肾上腺素 3.盐酸普鲁卡因 4对乙酰氨基酚,A,B,E,D,2023/3/16,A。溴量法 B.紫外分光光度法 C.亚硝酸钠滴定法 D.RP-HPLC法 E.非水滴定法 5.盐酸去氧肾上腺素 6.肾上腺素注射液 7.盐酸普鲁卡因 8对乙酰氨基酚,A,D,C,B,2023/3/16,X型题,1.直接能与FeCl3产生颜色反应的药物有A。盐酸普鲁卡因 B.盐酸去氧肾上腺素 C.对乙酰氨基酚 D.盐酸利多卡因 E.盐酸丁卡因 2.直接和水解后能发生重氮化-偶合反应的药物有A。盐酸丁卡因 B.盐酸普鲁卡因 C.对乙酰氨基酚 D.对氨基酚 E.盐酸肾上腺素,
