液体活检学习ppt课件.ppt
,液体活检在肿瘤精准治疗中的研究进展,1,内容摘要,一.液体活检,1）&概念和最新研究进展,二.研究方法和进展,2）液体活检应用和意义,三.我们的研究,2,液态活检,来源于肿瘤组织，存在于血液中：循环肿瘤细胞（）循环肿瘤（）肿瘤外泌体 提示肿瘤发展进程及抗药性等信息，指导个体化精准治疗,:.J.2014;32(6):579586,3,:循环游离，机体细胞释放入外周血循环后发生部分降解的内源性。高度片段化，约170。:正常细胞、异常细胞（如肿瘤细胞），病毒 等:半衰期短，动态表达量，核小体以单个、双联或三联的形式进入血液，并逐步分解。,（）,4,:循环肿瘤，是指肿瘤细胞经脱落或细胞凋亡后释放进入循环系统。一种特征性的肿瘤生物标记物，可以被定性、定量和追踪。:来源于肿瘤细胞的，属于的一种类型。不同患者的水平差异显著，受肿瘤负荷，分期等因素的影响,（）,5,&,a.2015,112123,6,1：（）癌症个体化深度测序分析方法:利用定制化的 作为”筛选器“对样本靶向捕获后再深度测序，灵敏度高，特异性强且经济可行。2：利用数字错误抑制（）的方法和（测序方法），能够检测到频率低至0.004的突变等位基因,A F,.(2016):10.1038.3520,高通量测序,7,片段谱系分析,a,a,W.,J.2016 14;164(1-2):57-68.,8,：循环肿瘤细胞，是指从实体瘤中脱离出来并进入外周血液循环的肿瘤细胞。:原发肿瘤和转移灶都会释放。可检测到的是肿瘤细胞在循环系统微环境下生存竞争的结果。,（）,9,液体活检应用价值（监测肿瘤特异性突变发现肿瘤复发）,a.2015,112123,10,液体活检应用价值（分析耐药株的遗传变异）,a.2015,112123,11,液体活检优势及前景,液态活检无侵入性、可频繁多次检测及快速反应能力均体现出发展潜力巨大应用价值。将削减无效肿瘤医疗开支、降低医疗成本。适应症广泛，如乳腺癌、结直肠癌、肺癌、胃癌、食管癌等常见肿瘤均可用液态活检技术进行诊断与监测。2015年美国发布的肿瘤治疗计划的四大举措之一：“液态活检”血浆开发新方法来评估治疗反应以及抵抗可能的耐药性。根据中国国家癌症中心发布的数据，我国5年内诊断为癌症且仍存活的病例数约为749万。也是液态活检巨大的市场。,12,研究概况,1）与转移的关系 2）异质性与肿瘤治疗 3）应用和意义 4）研究方法,13,(,),早在1896年就提出了循环肿瘤细胞的概念。侵入循环系统的肿瘤细胞，大部分由于机体的免疫识别、机械杀伤及自身凋亡在短期内死亡，只有极少数存活下来，在适于自身存活和增殖的器官或组织形成转移灶。,14,与肿瘤转移,A,M,.,.2015;7(1):111.,15,A,B,D,.2016 9.:10.18632.8015.,异质性,16,应用和意义,肿瘤转移预测,肿瘤治疗,数量改变反映了肿瘤细胞对各种治疗方案的敏感性和有效性，为个体化治疗提供依据。,监测早期转移,乳腺癌、前列腺癌结肠癌、肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌多种肿瘤,监测基因表达突变，找到药物敏感的靶点，指导个体化治疗,17,优化治疗方案,2014年，接受多西他赛联合阿曲生坦治疗的转移性去势抵抗性前列腺癌患者，基线循环肿瘤细胞数量可预测预后，3周时升高提示总生存较差，有望作为重新指导和优化治疗的较好指标。,A，B，S0421：a 2014 32(11)：1136-1142,2012年,乳癌患者在接受化疗（白蛋白结合型紫杉醇+卡培他滨+曲妥珠单抗）前后变化。治疗前：3，2+；1疗程：0。6疗程：病理学。证实值在乳腺癌治疗早期发生显著变化，能够准确预示疗效，能够科学指导选择治疗方案。,L，T，Y，：”?J 2012，24：403-407,18,的研究方法,.:,.141:209221.,19,研究方法（1）,系统是唯一经批准进入临床应用的检测方案。原理：抗体标识的微磁珠从全血中捕获细胞，用免疫荧光识45进行磁性分离。,45,20,数据解读:1.7.5外周血 判断阈值：转移性乳腺癌 5 细胞 前列腺癌 5细胞 结肠癌：3细胞 表明预后不良3.目前只批准用于以上三种肿瘤,21,的研究方法（2）-基因芯片,22,的研究方法（3）-测序,，.,2013,52(110)21083-21088.,23,，.,2013,52(110)21083-21088.,24,.:,.141:209221.,的分离方法（1）,25,的分离方法（2）-体外培养,.2014;345(6193):216220.,：；67：；45：；：.,26,研究概况,1）定义 2）三者关系 3）研究进展 4）研究难点和未来方向,27,背景介绍,循环肿瘤干细胞（,）：中具有干细胞特性，即自我更新及分化潜能的一小群细胞。作为标志物具有更重要的临床价值。可使获得干细胞特性，而具有药物耐受性和高侵袭性。已在包括肝癌，乳腺癌，胃癌，结直肠癌等多种肿瘤中被证实。,28,（肿瘤转移等级结构图）,A,:J.2015;27(5):437-49.,29,A,:J.2015;27(5):437-49.,30,乳腺癌研究进展,学者们采用不同的表面标志物组合来定义：4424；124；212,S，0，D，a1 J，2012，14(1)：R15,I，A，S，a1 a a J，2013，31(6)：539544,31,乳腺癌研究进展,M A，a1 J，2013，339(6119)：580-584,47 44,32,2013年上海复旦大学附属肝癌研究所樊嘉及周俭研究组通过研究123例肝癌患者相关肿瘤干细胞免表标记物，包括133、2、90、以及。2013年 等鉴于 1 可能是肝癌干细胞标志物，也采用流式细胞术检测了肝癌血样，发现部分病例可检出 45-1+细胞，这样的细胞具有较强的体外成球和体内致瘤能力。.,.,.,2013.57(4):p.1458-68。S,N,X,.1 J.,2013,144(5):1031-1041,肝癌研究进展,33,我们的研究,1)2),34,项目研究基础前期基金支持,1.2014年福建省卫教联合项目：结直肠癌循环肿瘤细胞和肿瘤干细胞的分子机制研究（14）2.2012年福建省科技厅重点项目:循环肿瘤细胞与肿瘤干细胞在恶性肿瘤个体化治疗中的应用研究（2012Y0017）；,3.2012年福建省卫生厅青年课题:结直肠癌循环肿瘤细胞及其上皮间质变标 志物的定量检测（2012-2-13）；,4.2012年福建省自然科学基金项目:148家族-靶蛋白网络在肝癌干细胞中调控机制研究（2012J05138）；,5.2011年福建省医学创新课题:乳腺癌循环肿瘤细胞（）及其单细胞多基因检测的临床意义（201116）；,6.2011年福建省自然科学基金项目:循环肿瘤细胞及其耐药基因表达水平在晚期乳腺癌化疗敏感性中的应用研究（2011J01141）,35,基金支持,8.2009年福建省自然科学基金项目:靶向乳腺癌干细胞的树 突状瘤苗抗肿瘤的研究(2009J01118)9.2008年福建省自然科学基金项目:靶向肝癌、细胞基因差异表达的研究（2008J0077）,7.2016年福建省自然科学基金项目：194调控肝癌干细 胞的靶基因和 鉴定（2016J01436）,36,超高速流式细胞分选系统,稀有细胞检测的灵敏度高,分选速度快,研究基础设备,37,(),.:33342 a 33342.,38,39,3B 5 7,40,实验数据,5 7 3B,12;1103;:;:.,41,A 370 5,27,.,42,实验数据148b在中低表达,43,实验数据148b改变比例,44,实验数据148b改变增殖与耐药,45,实验数据148b改变迁移侵袭与血管生成,46,实验数据148b过表达抑制肿瘤生成,47,实验数据148b沉默促进肿瘤生成,48,研究方案,49,研究方案分选流程,50,已完成200例鼻咽癌患者检测，100例乳腺癌患者检测，100例肺癌患者检测，150例直肠癌患者检测，具备完善的检测技术流程。在研项目：150例初诊未治肠癌患者，跟踪其全病程临床资料并抽取各阶段血样，分析患者各个时期数值，以为观察点，评估数值与临床分期、预后、治疗方案及疗效等情况的相关性，尤其是手术配合细胞治疗的疗效观察，开发在疗效评估中的应用。,研究数据,51,入组初诊未治肠癌患者150例,跟踪患者全程临床资料并抽取各阶段血样（组：根治术前、术后第一次细胞治疗后、细胞治疗2个周期后、细胞治疗3个周期后对照组：根治术前、术后7天、术后1月，术后2月每月一次）,利用对计数,患者各个时期数值与临床分期、预后、治疗方案及疗效等情况相关性,以为观察点，评估手术配合细胞治疗的疗效观察,52,难点和关键技术,研究难点,稀有性：仅占的1/106,活性：难以保持细胞活性进行后续研究,单细胞性：细胞稀少难以进行后续研究,分选精度可达到1/106,可保持分选后细胞的活性,进行单细胞水平提取和预扩增，保证下游基因表达谱分析的质量,超高速流式细胞分选系统,本项目关键技术,53,流式分析敏感性专一性检测,研究数据,54,研究数据,的画门模式,55,研究数据,的画门模式,56,的检测,研究数据,57,研究数据,的检测,58,首诊初治结直肠癌患者检测分析结果,研究数据,59,结直肠癌患者转移后化疗期间变化跟踪,研究数据,60,分选,分选白细胞对照：45,分选细胞：45,61,实验方案,62,研究数据-表达谱芯片聚类图,肿瘤组织 正常组织 细胞 白细胞对照,63,实验方法,区域中与基因表达的相关分析图,表达谱芯片 比较基因组杂交,64,近年发表文章,.148b 1.,2015;35(4).,.2013.30:2056-62.龚福生，黄伟炜，刘健,等.乳腺癌患者循环肿瘤细胞检测的临床意义.中华肿瘤防治杂志,2015,22(13):1009-1013.待发表袁婕 郑秋红 徐鹭英，等.流式细胞术检测鼻咽癌患者外周血循环肿瘤细胞及临床相关性分析 第八届中国肿瘤学术大会暨第十三届海峡两岸肿瘤学术会议 论文，2014.6.,.7901.2011.97:393-399.7.,.5.,2011,18(2):126-132.8.L,C,J,.2011.118(12):3410-3418.,65,近年发表文章,G,L,J,.2013.:10.1002.21076.J,C,F,.a.2013.:10.1002.23619.L,.,.2013.,.J.2013.43(2):274-8.Y,X,G,.1.J.2012.7:73-82.J,S,G,.J.2012.17(2):026004.7.S,J,G,.,.2012.7(6):e38655.8.M,S,G,.2012.34(3):181-5.,66,未来发展方向,1.高新技术已逐渐渗入的分离与分析，新研发的技术设备功能更强，性能与检测效果逐步提高。2.单细胞全基因测序技术及单细胞基因组学可解决血液数量稀少的难题，能检测更多药效相关基因及分析耐药机制，为的分子分型及靶向药物治疗提供更准确的信息。,67,结语,谢谢！,液体活检，肿瘤精准治疗的宠儿！,68,R.,.,.2014,69,2013年 等 对 33 例（0期）非转移结直肠癌患者和 9 名健康人，通过进行 表达、17 号染色体及 2 基因水平分析，同时分析 的表型和基因型，结果表明：原发灶无2 蛋白表达，却有 63.33%的 出现 2 蛋白过表达。全面 分析可以为肿瘤个体化治疗提供更多疾病信息。,M,R,J,.J.,2013,28(11):1439-1450.,与肿瘤个体化治疗,70,研究难点,研究难点,稀有性：仅占的1/106 或者更少,活性：难以保持细胞活性进行后续研究,单细胞性：细胞稀少难以进行后续研究,71,研究数据-表达谱芯片散点图,正常组织,肿瘤组织,细胞,白细胞对照,72,乳腺癌CTSC研究进展,2013年Yu，侵袭性强的乳腺癌类型，以间质性表型CTCs为主；而病情恶化的患者的间质型CTCs计数明显增多。在CTCs动态监测中，初始对相应靶向药物疗效较好，CTCs数量明显降低并以上皮型为主；经7个月治疗后出现了耐药性及病情进展，间质CTCs升高。患者CTCs、EMT干细胞特性与药物疗效或耐药情况密切相关。,Yu MBardia A，Wittner BSet a1Circulating breast tumor cells Exhibit dynamic changes In Epithelial and mesenehymal eompostionJScience，2013，339(6119)：580-584,73,
