戊巴比妥钠半数有效量的测定.docx

戊巴比妥钠半数有效量的测定实验三 戊巴比妥钠半数有效量的测定 Determination Of Median Effective DoesOf Sodium Pentobarbital 目的和原理 测定戊巴比妥钠腹腔注射对小鼠催眠作用的ED50值。 戊巴比妥钠为巴比妥类镇静催眠药，用适当剂量给小鼠腹腔注射后产生的催眠效应，常用翻正反射的消失来判断，该指标仅有阳性和阴性两种现象，属于质反应。 质反应量效曲线的横坐标为对数剂量，而纵坐标采用阳性反应发生的频数时，一般为常态分布曲线。如改用累加阳性频数为纵坐标时，可以得到标准的S型曲线。该曲线的中央部分接近一条直线，斜度最大，其相应的剂量也就是能使群体中半数个体出现某一效应的剂量，通常称为半数效应量。如效应为疗效，则称半数有效量；如效应为死亡，则称半数致死量。这些数值是评价药物作用强度和药物安全性的重要参数。 测定ED50和LD50的方法基本一致，只是所观察的指标不同。前者以药效为指标，后者以动物死亡为指标。常用的测定方法有Bliss法，Litchfield-Wilcoxon机率单位图解法，Kaerber面积法，孙瑞元改进的Kaerber法及Dixon-Mood法等。其中孙氏改进的Kaerber法因其简捷性和精确性更为常用。 孙氏改进的Kaerber法的设计条件是：各组实验动物数相等，各组剂量呈等比数列，各组动物的反应率大致符合常态分布。若以Xm为最大反应率组剂量的对数，i为组间剂量比的对数，p为各组反应率，Pm为最高反应率，Pn为最低反应率，n为实验组数，则： ED50lg-1Xmii/4 含0%及100%反应率时， ED50lg-1Xmi ED50的95可信限lg-1 åP-åP其中Si 实验材料 2n-1小鼠60只，体重1824g；戊巴比妥钠溶液2.00mg/ml，2.40mg/ml，2.89mg/ml，3.47mg/ml，4.16mg/ml，5.00mg/ml；小鼠笼，天平，0.5ml或0.25ml注射器。 实验步骤 1、确定给药剂量：先以少量动物做预实验，以获得小鼠对戊巴比妥钠催眠反应率为100的最小剂量和反应率为0的最大剂量。然后在此剂量范围内，按等比数列分成几个剂量组，各组剂量的公比为 rn-1ED100/ED0 求得r后，自第一剂量组开始乘以r，可得相邻的下一个组的剂量。若共分为6个组，各组剂量分别为ED0、r·ED0、r2·ED0、r3·ED0、r4·ED0、r5·ED0。 2、给药：取体重1822g的健康小鼠50只，查随机数字表，随机分为6个组，每组10只。按表46所列的各组给药浓度分别腹腔注射10ml/kg。 3、记录结果：以翻正反射消失为入睡指标，观察药物的催眠效应，记录各组腹腔注射后15min内睡眠鼠数，填入表46。 结果整理及分析 依表46所列，分别计算各组P和P2。再按或式计算ED50，及式计算ED50的95可信限。 表46 戊巴比妥钠ED50计算用表 药物浓度 组别 1 2 3 4 5 小鼠数 10 10 10 10 10 2.00 2.40 2.89 3.47 4.16 20.0 24.0 28.9 34.7 41.6 1.3010 1.3806 1.4602 1.5398 1.6194 给药剂量 对数剂量 催眠鼠数 P P2 6 10 5.00 50.0 1.6990 注意事项 1、若用50只小鼠，随机分为5个剂量组进行实验，各组动物可参照20mg/kg、25mg/kg、31mg/kg，39 mg/kg，49 mg/kg给药。以20ml/kg腹腔注射。 2、随机分组时，可先称各小鼠体重，将体重相同小鼠放一笼，分别做好标记。再按确定组数查随机数字表分组，使各组平均体重及体重分布尽可能一致。 3、本实验为定量实验，注射药量必须准确。给药后要仔细观察药物反应，但不可过多地翻动小鼠，以免影响实验结果。 思考题ED50的定义，治疗指数的定义、意义。 实验四 戊巴比妥钠半数致死量的测定 目的和原理 测定戊巴比妥钠腹腔注射对小鼠的半数致死量。LD50测定的方法和原理与ED50测定基本相同，区别在于测定LD50的观察指标是死亡和生存。 实验材料 戊巴比妥钠溶液9.38mg/ml、7.50mg/ml、6.00mg/ml、4.80mg/ml、3.80mg/ml。 实验步骤 用孙氏改进Kaerber氏法。取小鼠50只，随机分为5组，每组10只，分别腹腔注射不同浓度的戊巴比妥钠20ml/kg，观察记录给药后24h内各组死亡鼠数。 结果整理及分析 1. 将实验结果列入表5-1 表5-1 戊巴比妥钠的LD50计算用表 分组 1 2 3 4 5 剂量 187.5 150.0 120.0 96.0. 76.0 2. 计算： LD50=log-1Xm-i(P-0.5) 187.5式中Xm=log187.5=2.273；i=log 150.0 =0.0969 实验鼠数 死亡鼠数 死亡百分率 P P2 LD50的95%可信限=log-1 åP-åPS=in-12思考题LD50的定义，化疗指数的定义、意义。