大鼠冰冻切片操作方法.docx

大鼠冰冻切片操作方法大鼠冰冻切片操作方法 1 小鼠的灌注固定：动物经麻醉后开胸暴露心脏，经左心室先快速灌注生理盐水(50mL左右)至流出液变清亮，然后换4多聚甲醛继续灌注大约100ml至组织变硬。 2 取材：小心剥离脑组织，置广口瓶中用4多聚甲醛后固定1224h。 3 脱水：将标本移入30%蔗糖溶液，4放置至组织块沉底 4 将少量包埋剂OCT滴加到标本台，放入恒冷箱切片机内至变白，然后取出快速将表面用单面刀片修平。 5 用安全刀片将标本底部修平后迅速粘附于标本台，然后置入-24恒冷箱切片机的冷冻台。待组织略微发白时用OCT在标本表面涂一薄层，继续冷冻20min。 6 调好切片厚度后开始切片。如果是采用漂片，切片厚度一般2030m，切好的片子可以连续收集也可以每隔56片收集一片，移入含4多聚甲醛的6孔板、24孔板或别的容器。如果是准备做贴片，片厚一般10m；可以连续裱片，也可以每隔5片或10片裱一片，贴好后放切片盒，50度左右烤片1小时使其贴牢. 7 将切好的片子放4保存备用。 注意事项： 1.做室旁核的话可以将脑袋反过来，在腹侧面，大概切掉视交叉前和下丘脑之后的部分、只保留中间部分然后连续切片就可以了。如果是漂片，室旁核的部分切不了很多；如果贴片那切出来的要多一点。做免疫组化的话漂片就可以了。 2.液氮或低温冰箱里的冻存必须要有防冻液，否则必然切片会碎掉。