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临床基础检验学,血液一般检验,Whole Blood,V:45LPH:7.357.45SG:1.0501.060,第三章 血液一般检验,血液的生理功能,运输功能,免疫功能,酸碱平衡电解质平衡,新陈代谢内环境平衡,第三章 血液一般检验,红细胞Red Blood Cell/Erythrocyte,白细胞White Blood Cell/Leucocyte,血小板Platelet,第三章 血液一般检验,Section 1:红细胞检查,第三章 血液一般检验,Hematopoiesis,Hematopoietic stem cell,第一节 红细胞检查,红细胞是血液中数量最多的血细胞；红细胞平均寿命是120天,衰老和退化红细胞经脾脏破坏；膜的通透性、可塑变形性、悬浮稳定性。,第一节 红细胞检查,红细胞生理学,红细胞形态特征：双凹圆盘形，平均直径7.2m，厚约2m，无核。红细胞主要成分：血红蛋白占34%-能结合多种气体，主要是O2和CO2,并协同维持酸碱平衡。,红细胞生理学,第一节 红细胞检查,血液分析仪法：利用电阻抗和(或)光散射原理。手工显微镜法：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数后，滴入血细胞计数盘，然后于显微镜下，计数一定体积范围内的红细胞数，经换算求得每升血液的红细胞数目，即红细胞计数结果（浓度）。,红细胞计数,一、红细胞计数,红细胞计数,一、红细胞计数,器材：生物显微镜微量吸液管Neubauer板专用盖玻片试剂：Hayem稀释液氯化钠-调节渗透浓度；硫酸钠-调节渗透浓度，防止红细胞聚集；氯化汞-防腐剂，有毒。,红细胞计数：手工显微镜法,一、红细胞计数,红细胞计数：手工显微镜法,一、红细胞计数,改良Neubauer计数板,红细胞计数：手工显微镜法,一、红细胞计数,两个计数室,计数室高。计数室各边长,被分为9个大方格。中央大方格用双线划分为，位于正中和四角的5格中方格是红细胞和血小板计数区，每个中方格又被分为。四角的大方格是白细胞计数区，每个大方格被划分为。,0.1mm,3.0mm,25个中方格,16个小方格,16个中方格,红细胞计数：手工显微镜法,第一节 红细胞检查,第一节 红细胞检查,准备：取试管1支，加入红细胞稀释液2.0ml。采血：以毛细血管采血法，采取外周血10l。稀释：将采血加入红细胞稀释液，稀释200倍。充池：充池以前务必充分混匀稀释计数血液。计数：静置2min后以低倍镜计数中间大方格的四角和中央5个中方格内的红细胞。,红细胞计数：手工显微镜法,一、红细胞计数,压线细胞：数上不数下 数左不数右,3 2 32 2 1 2 1 2 1 24 3 1 3,红细胞计数：手工显微镜法,一、红细胞计数,红细胞/L=5个中方格内红细胞,报告方式 RBC（/L）=*.*1012/L,106/L,5,10,200,红细胞计数：手工显微镜法,一、红细胞计数,红细胞计数,质量保证,技术误差：由于操作不规范和技术不熟练所造成的误差仪器误差计数域误差,一、红细胞计数,正常参考值男 性:（4.005.50）1012/L 女 性:（3.505.00）1012/L新生儿:（6.007.00）1012/L,高于6.81012/L应采取相应的治疗措施！低于3.51012/L可以诊断贫血！低于1.51012/L应考虑输血！,红细胞计数,一、红细胞计数,红细胞计数的临床意义,1.年龄与性别差异2.神经与精神因素3.剧烈的体力运动4.气压氧含量影响5.妊娠中后期变化,(一).生理性变化,红细胞计数,一、红细胞计数,1.急慢性失血丢失2.红细胞寿命缩短3.造血原料的不足4.骨髓造血的减退,(二).病理性变化,降 低,升 高,1.原发性红细胞增多2.继发性红细胞增多3.相对性红细胞增多,红细胞计数的临床意义,红细胞计数,一、红细胞计数,血红蛋白是微红色的胶体物质，分子量64458，呼吸载体，每克血红蛋白可携带氧1.34ml。血红蛋白的形成发生在人体有核红细胞及网织红细胞内。,二、血红蛋白测定,血红蛋白测定,血红蛋白由四个亚基构成，血红蛋白的每个亚基由一条肽链和一个血红素分子构成，肽链在生理条件下会盘绕折叠成球形，把血红素分子抱在里面，这条肽链盘绕成的球形结构又被称为珠蛋白。血红素是由原卟啉和铁原子组成的一种结合物。99%Hb铁原子呈Fe2+状态还原Hb，1%Hb铁原子呈Fe3+状态高铁Hb。,血红蛋白测定,二、血红蛋白测定,RBC and Hemoglobin,Globin protein consisting of 4 polypeptide chainsOne heme pigment attached to each polypeptide chaineach heme contains an iron ion(Fe+2)that can combine reversibly with one oxygen molecule,二、血红蛋白测定,血红蛋白分子结构,二、血红蛋白测定,血红蛋白合成的调节红细胞生成素(EPO)：促进血红素和Hb合成.雄激素(睾酮)：促进Hb的合成.高铁血红素：减少血红素的合成.,血红蛋白测定,二、血红蛋白测定,在正常人中各种血红蛋白的含量为：成人主要血红蛋白：HbA(22)占95%以上成人次要血红蛋白：HbA2(22)占2%-3%胎儿主要血红蛋白：HbF(22)占1%以下,血红蛋白测定,二、血红蛋白测定,氧合血红蛋白：oxyhemoglobin,HbO2还原血红蛋白：reduced hemoglobin,Hbred碳氧血红蛋白：carboxyhemoglobin,HbCO高铁血红蛋白：hemiglobin,Hi其他类衍生物：SHb,血红蛋白存在形式,血红蛋白测定,二、血红蛋白测定,红细胞衰老破坏以后，血红蛋白分子降解为珠蛋白和血红素。血红素中的铁由单核-吞噬细胞系统细胞加工处理，回到血液循环，与运铁蛋白结合进入铁代谢库。珠蛋白经酶分解成氨基酸，可再参与合成蛋白质和多肽。,血红蛋白测定,二、血红蛋白测定,氰化高铁血红蛋白法 十二烷基硫酸钠（SDS）测定法 碱羟血红蛋白法（575）叠氮高铁血红蛋白法 沙利血红蛋白法（淘汰）,血红蛋白测定,二、血红蛋白测定,除SHb外，Hb被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与 CN-结合，生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白HiCN，吸收峰为540nm。毫摩尔消光系数为44Lmmol-1 cm-1。因此根据标本的吸光度，即可求得血红蛋白总量(不含SHb)。,氰化高铁血红蛋白法,血红蛋白测定,二、血红蛋白测定,Hb(Fe2+)+Fe3+(CN)3-,Hi(Fe3+)+Fe2+(CN)4-,Hi(Fe3+)+CN-,Hi(Fe3+)CN,氰化高铁血红蛋白法,血红蛋白测定,二、血红蛋白测定,二、血红蛋白测定,HiCN法操作简单、显色快、结果稳定可靠，是国际血液学标准化委员会(International Council for Standardization in Haematology，ICSH）、国际临床化学联合会和国际病理学会推荐的血红蛋白测定国际标准参考方法。注意：KCN剧毒，使用管理不当可造成公害。高白细胞和高球蛋白血症可致试剂混浊，HbCO转化慢。,血红蛋白测定,二、血红蛋白测定,除SHb外，血液中Hb可与低浓度SDS作用，生成SDS-Hb棕红色化合物。其吸收曲线波峰在538nm。操作简单，呈色稳定，准确性和精确性符合要求。无公害，在全国临床检验方法学学术会议上，被推荐为次选方法。SDS本身质量差异较大且SDS破坏白细胞，不适于同时有计数白细胞和Hb定量的血细胞分析仪使用。,十二烷基硫酸钠法,血红蛋白测定,二、血红蛋白测定,正常参考值：成年男性：120-160 g/L 成年女性：110-150 g/L 新 生 儿：170-200 g/L 70岁以上老年男性：94-122 g/L 70岁以上老年女性：87-112 g/L,血红蛋白测定,二、血红蛋白测定,红细胞计数和血红蛋白测定的临床意义,血细胞比容：是指在一定条件下经离心沉淀压紧的红细胞在全血标本中所占体积的比值。有的又称为红细胞压积或者红细胞体积分数。,三、血细胞比容测定,hematocrit,Hct、Ht;packed cell volume,PCV,测 定 方 法手工离心法：Wintrobe法：管长110mm，内径3mm，离心力2264g 微量法：管长75mm，内径0.81.0mm，离心力10000g（WHO首选的常规方法）仪器分析法：红细胞计数 x 红细胞平均体积。其它方法：折射计法、粘度法、放射性核素法等 其中放射性核素法曾被ICSH定为参考方法,三、血细胞比容测定,血细胞比容结果判断,三、血细胞比容测定,方法学评价手工离心法：不能完全排除红细胞间残留的血浆，易受离心力、抗凝剂量等影响，红细胞形态异常时应注明。仪器分析法：任何影响红细胞计数和平均红细胞体积测定的因素都可影响Hct的测定。,三、血细胞比容测定,参考值 男性：0.40.5；女性：0.370.48；儿童：0.33.042临床意义,作为诊断贫血的指标临床补液量的参考真性红细胞增多症的指标红细胞平均指数计算的基础数据血液流变学指标,三、血细胞比容测定,三、血细胞比容测定,四、红细胞平均指数,红细胞平均指数 通过红细胞计数、红细胞比容、红细胞血红蛋白量这三组检测数据，计算红细胞平均体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)。红细胞平均指数可以分析病人红细胞形态特征，有助于贫血的分类与鉴定。,(一)红细胞平均体积 Mean corpuscular volume(MCV)红细胞的平均大小,四、红细胞平均指数,某男，35岁，红细胞计数为3.501012/L，红细胞比积0.36，计算其红细胞平均容积。,MCV=红细胞比积/每升血液中的红细胞数目,=0.36/（3.501012）=1.03 10-13(L),=103(fl),1L=1015fL,四、红细胞平均指数,(二)红细胞平均血红蛋白量 Mean corpuscular hemoglobin(MCH)MCH反映的是单个红细胞血红蛋白含量的平均值,四、红细胞平均指数,某女，18岁，红细胞计数为3.501012/L，血红蛋白为100g/L，计算其红细胞平均血红蛋白含量。,MCH=每升血液中血红蛋白含量/每升血液中红细胞个数,=100/（3.501012）=2.8510-11(g),=28.5(pg),1g=1012pg,四、红细胞平均指数,(三)红细胞平均血红蛋白浓度 Mean corpuscular hemoglobin concentration(MCHC)MCHC反映的是每升红细胞血红蛋白的平均值,四、红细胞平均指数,某女，33岁，红细胞比积为0.36，血红蛋白为120g/L，计算其红细胞平均血红蛋白浓度。,MCHC=每升血液中血红蛋白含量/每升血液中红细胞比积,=120/0.36=333,（g/L）,注意MCH和MCHC的区别,四、红细胞平均指数,血液分析仪直接导出MCV的值，再结合仪器测定的RBC和Hb，计算出MCH和MCHC,MCH=Hb/RBCMCHC=Hb/（RBC*MCV）,四、红细胞平均指数,红细胞平均容积（MCV）红细胞平均血红蛋白含量（MCH）红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）,每个红细胞平均体积的大小,每个红细胞平均所含血红蛋白的量,每升红细胞所含血红蛋白的浓度,80100 fl,2634 pg,320360 g/L,四、红细胞平均指数,四、红细胞平均指数,四、红细胞平均指数,红细胞体积分布宽度（red blood cell width distribution，RDW）是反映外周血红细胞间体积差异的参数，通过变异系数定量的表示红细胞体积分布的离散程度。,MCV反应红细胞的平均大小，RDW反应红细胞大小的离散程度。,正常参考值：成人：11.6%14.6%,五、红细胞体积分布宽度,与MCV联合应用于贫血的形态学分类 小细胞均一性 小细胞不均一性 正常体积均一性 正常体积不均一性 大细胞均一性 大细胞不均一性用于缺铁性贫血的筛选诊断和疗效观察用于缺铁性贫血与珠蛋白生成障碍性贫血鉴别诊断,五、红细胞体积分布宽度,网织红细胞(reticulocyte,RET)是指介于晚幼红细胞与成熟红细胞之间的一类过渡型未完全成熟的红细胞。胞浆内残存多少不等的嗜碱性物质，经活体染色法染色，嗜碱物质凝集成颗粒，其颗粒又联缀成线，而构成浅蓝或深蓝的网织状结构，故名网织红细胞。,六、网织红细胞计数,染色原理 网织红细胞内RNA的磷酸基（带负电荷）能与灿烂甲酚蓝、新亚甲蓝等碱性染料的有色反应基（带正电荷）结合，形成核酸与碱性染料复合物的多聚体，凝成颗粒，其颗粒又联缀成线，而构成浅蓝或深蓝的网织状结构，凡含有两个以上深染颗粒（后具有线网状结构）的无核红细胞，即为网织红细胞。,六、网织红细胞计数,Heilmyer根据发育阶段分型,O型：花冠型 I型：丝球型型：网 型,III型：破网形IV型：点粒型,六、网织红细胞计数,a:丝球形 b：网形 c：破网形 d：点粒型,a,b,c,d,六、网织红细胞计数,显微镜法：（Miller窥盘）网织红细胞计数仪：用荧光染料将红细胞染色后使含 RNA网织红细胞可被计数，进而得出网织红细胞的百分比和绝对值。血液分析仪：网织红细胞绝对值、网织红细胞百分比、网织红细胞平均体积、网织红细胞血红蛋白分布宽度、网织红细胞平均血红蛋白浓度、网织红细胞成熟指数,六、网织红细胞计数,Miller窥盘,血液经新亚甲蓝染色，制备血涂片，将Miller窥盘放入目镜，选择合适部位计数，Miller窥盘的小格A内计数所有无核红细胞，大格B(含小格面积)内计数网织红细胞。,显微镜法网织红细胞计数,六、网织红细胞计数,六、网织红细胞计数,六、网织红细胞计数,六、网织红细胞计数,六、网织红细胞计数,六、网织红细胞计数,网织红细胞须在活体染色条件下才能显示。,涂片制备要薄而均匀，红细胞无重叠。,注意网织红细胞与HbH包涵体的区别，前者为蓝绿色网状或点粒状结构，后者为蓝绿色圆形小体,均匀分布在红细胞内。,瑞氏染液复染可使网织红细胞数值偏低。,六、网织红细胞计数,网织红细胞百分率：成人 0.51.5%;新生儿 2.06.0%网织红细胞绝对值：(2484)*109/L网织红细胞成熟指数(reticulocyte maturity index,RMI）RMI=（MFR+HFR)/LFR*100网织红细胞生成指数:(reticulocyte production index,RPI）代表网织红细胞的生成相当于正常人的多少倍,RPI=（被测Hct/正常人Hct）*（Ret%/Ret成熟天数）,六、网织红细胞计数,六、网织红细胞计数,网织红细胞计数可以用来反映骨髓红系造血状态，用于贫血的鉴别诊断和疗效判定，以及化疗和放疗所致骨髓抑制及其恢复情况的监测。网织红细胞增加：骨髓红细胞生成旺盛，如溶血性贫血。网织红细胞减少：骨髓造血机能减弱，如再障。临床将贫血病人网织红细胞绝对值低于15109/L，作为急性再障的诊断指标之一。,六、网织红细胞计数,七、红细胞沉降率测定,红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate,ESR）：是指离体抗凝血静置后，红细胞在单位时间内沉降的速度，又称血沉。,红细胞沉降过程：缗钱状红细胞形成期；快速沉降期；细胞堆积期。,测定方法：手工法：Westergren法血沉仪法：H-t 曲线方法学评价：手工法：简便适用。血沉仪法：动态曲线。,七、红细胞沉降率测定,血浆中各种蛋白质的比例：小分子蛋白质（白蛋白）使红细胞沉降速度减慢，大分子蛋白质（纤维蛋白原、急性反应蛋白、免疫球蛋白）加快红细胞沉降速率。,影响红细胞沉降率的因素,红细胞数量和形态,血沉管与血沉架、血标本、温度等,七、红细胞沉降率测定,临床意义 是判定疾病进展是否活动的监测指标之一，但缺乏特异性。1.血沉增快：生理性：月经、妊娠、老年人 病理性：各种炎症、组织损伤及坏死、恶性肿瘤、高球蛋白血症、贫血、高胆固醇血症 2.血沉减慢：红细胞增多、纤维蛋白原含量严重减低,七、红细胞沉降率测定,八、嗜碱性点彩红细胞计数,嗜碱性点彩红细胞是不完全成熟的红细胞，胞质内残存的核酸变性、聚集形成颗粒，经碱性染料染色后，细胞内可见到深染的颗粒，称为嗜碱性点彩红细胞。,嗜碱性点彩红细胞计数增高主要见于铅、汞、银等重金属及硝基苯、苯胺中毒，对慢性重金属中毒有辅助诊断价值。溶血性贫血、巨幼细胞性贫血、白血病、恶性肿瘤时也可见嗜碱性点彩红细胞增高。,七、红细胞沉降率测定,红细胞red blood cell（RBC）erythrocyte（ERY）红细胞计数red blood cell count血红蛋白Hemoglobin（Hb，HGB）血细胞比容Hematocrit（Hct），Packed cell volume（PCV）,本部分常用专业词汇,第一节 红细胞检查,红细胞平均容积Mean corpuscular volume（MCV）红细胞平均血红蛋白含量Mean corpuscular hemoglobin（MCH）红细胞平均血红蛋白浓度Mean corpuscular hemoglobin concentration（MCHC）网织红细胞reticulocyte（RET）红细胞沉降率Erythrocyte sedimentation rate(ESR),第一节 红细胞检查,THANKS,