金免疫技术课件.ppt

免疫学检验,第二十章 金免疫技术,胶体金免疫渗滤技术的检测原理、方法类型和关键技术。胶体金免疫层析技术的检测原理、方法类型和关键技术。金免疫技术的方法学评价及临床意义。,本章要点,目录,金免疫技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原/抗体检测的一种免疫标记技术。该类试验的最大特点是不需要大型设备，对检测人员稍加培训即能掌握操作要求和判定标准。,前 言,胶体金也称金溶胶，是由金盐被还原成原金后形成的金颗粒悬液。胶体金颗粒大小多在1nm100nm，微小金颗粒稳定、均匀、呈单一分散状态悬浮在液体中，成为胶体金溶液。,胶 体 金,优 质,劣 质,第一节 胶体金免疫渗滤技术,免疫渗滤试验始创于1985年，最初以酶作为标记物。20世纪90年代初金免疫渗滤技术得到了快速发展，用于检测各种传染病的抗体和肿瘤标志物等。目前临床中用于检测尿液HCG的“金标”早孕诊断试剂就是应用这种方法。,将抗原或抗体点加在固相载体硝酸纤维素膜上，制成抗原或抗体包被的微孔滤膜并贴置于吸水材料上，依次在膜上滴加标本、免疫金及洗涤液等，液体很快渗入吸水材料中，阳性反应即在膜上呈现红色斑点。,一、检测原理,二、方法类型,双抗体夹心法测抗原 间接法测抗体,胶体金反应板胶体金标记物洗涤液抗原参照品或抗体阳性对照品,三、关键技术,（一）试剂盒组成,1 将反应板平放于实验台面上，于小孔内滴加含待测抗原的标本12滴，待完全渗入，待测抗原与膜上的抗体反应而结合在膜上。2 于小孔内滴加胶体金标记抗体试剂12滴，待完全渗入，使胶体金标记抗体与结合在膜上的待测抗原反应。,（二）技术要点,3 于小孔内滴加洗涤液23滴，待完全渗入，洗去未结合的胶体金标记抗体。4 在膜中央有清晰的淡红色或红色斑点显示者判定为阳性反应；反之则为阴性反应。斑点呈色的深浅相应地提示阳性强度。,双抗体夹心法测抗原,金标抗体,待测标本,。,第二节 胶体金免疫层析技术,免疫层析技术的原理与渗滤技术相同，不同点在于液体的移动是基于层析作用的横流，而不是通过直向的穿流。该方法的试剂为试纸条形式，结构简单。测定项目包括HCG等激素、肿瘤标志物、心血管病标志物、传染病的抗原和抗体等。,将各种反应试剂分点固定在试纸条上，检测标本滴加在试纸条的一端，通过层析作用使样品在层析材料上泳动，样本中的待测物与试纸条上的试剂发生特异性结合反应，形成的复合物被富集或固定在层析条上的特定区域（检测线），无关物则越过该区域而被分离，通过胶体金的呈色条带判读实验结果。,一、检测原理,双抗体夹心法测抗原,二、方法类型,竞争法测抗原,A、B两端分别粘贴吸水材料，G处为干燥固定在玻璃纤维膜等材料上的胶体金结合物，T处粘附有已知的抗体或抗原，C处为粘附的质控品（抗免疫金抗体），T、C点物质往往以直线的形式包被在膜上。,三、关键技术,（一）试剂盒组成,以双抗体夹心法为例：1 将试纸条标记线一端浸入待测标本中2秒5秒或在标本加样处加一定量的待检标本，平放于水平桌面。2 5min20min内观察结果。3 结果判断。,（二）技术要点,吸水垫,结合物垫,NC膜观察窗,吸水垫,金标抗体,包被抗体,包被抗金标抗体,双抗体夹心法测抗原,结果观察,阳性,阴性,无效,T,C,金免疫技术具有操作简便、快速以及操作人员不需技术培训，除试剂外无需特殊仪器设备，且试剂稳定，便于保存等优点，因此特别适用于急诊检验。目前临床检验中已开展的项目有：HCG、HBV等。新项目正在不断发展中。,小 结,金免疫技术是以胶体金作为标记物的免疫标记技术。胶体金免疫渗滤试验是将硝酸纤维素膜上包被抗原或抗体，将其置于渗滤装置中，进行免疫结合试验，抗原抗体反应后，形成大分子胶体金复合物，从而使阳性结果在膜上呈现红色斑点。,胶体金免疫层析试验是以硝酸纤维素膜为载体将胶体金标记技术和蛋白质层析技术相结合的免疫分析技术。原理与渗滤试验相同，不同的是液体的移动不是通过直向的穿流作用，而是基于层析作用的横流。方法学评价 金免疫技术简便、快捷，应用广泛，适合“床边检验”。,