以没食子酸为对照品 总酚的含量测定方法.docx

以没食子酸为对照品 总酚的含量测定方法Folin Cioealteu 比色法( FC酚法） 一、仪器 UV- 2401 PC 型紫外分光光度计; 超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司KQ- 2508型) ; 恒温水浴锅 二、 试剂 没食子酸标准品; 钨酸钠,磷钼酸, 85%磷酸, Na2 CO3, 以上试剂均为分析纯; 水为蒸馏水。 1.3 福林试剂的配制 在250mL的圆底烧瓶内加入20g 钨酸钠、5g 钼酸钠、140mL 蒸馏水，85%的浓磷酸10mL 及浓盐酸20mL，充分混匀，以小火回流10h，再加入3g 硫酸锂及15mL 双氧水，开口继续煮沸15min，待双氧水完全挥发，呈亮黄色。冷却后移入250mL 容量瓶中，定容置于棕色试剂瓶中，放入冰箱中备用。 1.4 溶液的配制 溶称取40gNa CO3, 溶于200mL 蒸馏水中, 即为20%的液。 二、方法与结果 1.对照品溶液的制备并绘标准曲线 精密称取没食子酸标准品0.0110g，用蒸馏水溶解并定容至100mL，得浓度为0.11mg /mL 的标准液。准确吸取0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mL 置于25mL 的棕色容量瓶中，加蒸馏水至6.0mL，然后分别加入FC 试剂0.5mL，混匀，在0.58min内加入1.5mL20% 的Na2CO3溶液，充分混合后定容，30 避光放置0.5h，以不加标准液的6.0mL 蒸馏水为空白对照，760nm 下测定吸光值，每个样品平行测定三次。 2、供试品溶液的制备 样品溶液总酚含量的测定: 准确量取制备好的乙醇粗提液0.5mL 于50mL 容量瓶中，加入9.5mL 蒸馏水，摇匀，再加入0.5mL 福林试剂，混匀，在0.5 8min 内加入1.5mL 20%的Na2CO3溶液，充分混合后定容， 30避光放置0.5h，以没食子酸标准液为空白对照， 760nm 下测定吸光值，每个样品平行测定6 次(A为6次平行测得的吸光度）。 以没食子酸为标准品的总酚的标准曲线：Co=0.0110mg/ml 次数 浓度 1 2 3 4 5 6 7 8 样品X V(ml0 ) A 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 4、以没食子酸在反应体系中的质量浓度C为横坐标，吸光度值A为纵坐标，绘制标准曲线。