临床微生物学检验(1).docx

临床微生物学检验1、潜伏感染：若宿主与病原体在相互作用过程中暂时处于平衡状态，病原体潜伏在病灶内或某些特殊组织内，一般不排出体外，称为潜伏感染。 2、抗生素相关性腹泻，严重时引起伪膜性肠炎、真菌性肠炎、葡萄球菌肠炎等，如果肠道正常菌群破坏后艰难梭菌异常增长并分泌肠毒素，则可损伤肠粘膜引起伪膜性肠炎。 3、病原菌的毒力包括侵袭力和毒素。病原菌在宿主间传播、侵袭、定植并逃逸免疫的能力，称为侵袭力。 4、细菌的大小以微米为测量单位。 5、球菌呈圆球形、近圆球形、矛头状或肾形。 6、观察细菌动力可用悬滴法或压滴法在显微镜下直接观察其运动，也可将细菌穿刺接种半固体培养基观察动力。鞭毛染色 7、鞭毛可鉴别细菌，糖萼可作为细菌的鉴定和分型。 8、芽孢的功能： 热力、干燥、辐射、化学消毒剂等具有强大的毒抗力。 以是否杀死芽孢作为物品消毒灭菌判断效果的指标。 芽孢在菌体的位置和直径大小随菌种的不同，这种形态特点有助于细菌鉴别。 9、生长曲线：细菌接种到液体培养基后以二分裂法进行繁殖。以倾注平板法计数孵育后的菌落数可换算出菌落形成单位，连续检测细菌不同培养时间的CFU，以CFU为纵坐标，培养时间为横坐标可以作出一条反映细菌生长数的变化规律曲线，称生长曲线。 10、生长曲线分为四期： 迟缓期：是细菌适应环境的过程，为细菌的分裂繁殖做好准备。 对数生长期：细菌以最大的速率生长和分裂，细菌数量对数增加。此期细菌代谢活跃而稳定，其大小、形态、染色性和生化反应典型，对外界因素反应敏感，是检测细菌生物学性状和进行药物敏感性试验的适宜阶段。 稳定期：生长繁殖菌数和死亡数处于动态平衡，此期细菌合成较多的代谢产物。 衰亡期：细菌死亡速率逐步增加，死亡数大于增加数，一般不用该期的细菌做鉴定和研究工作。 11、细菌的遗传物质包括染色体、质粒。 12、病毒的基本结构包括核心、衣壳。辅助结构是包膜，包膜对乙醚是敏感的，若呈阳性，则说明有乙醚存在。 13、营养体呈单细胞类型的真菌又称酵母菌。营养体呈多细胞类型的真菌是由菌丝和孢子交织组成，称为丝状菌或霉菌。 14、细菌的科学名称的生物双名式，有一个属名和一个种名构成，属名在前，是名词，首字母大写；种名在后，是形容词。例如Mycobecterium tuberculosis 15、病原学检测： 尽早采集：一旦怀疑细菌感染，应及时采集标本进行细菌学检验。 选择不同采集时机和标本种类：根据临床症状和流行病学资料可预测感染性疾病的病原体，根据病程和感染部位的不同，选择合适时机采集不同种类标本。 在抗生素应用前采集：应尽可能在抗生素留取前标本。 遵守无菌操作：应严格注意无菌操作，不得被其他部位细菌污染。盛放标本的容器应无菌。 正确保存和运送：采集的标本及时运送，如路途遥远，一般应冷藏。 16、革兰染色的影响因素：涂片厚薄酒精脱色时间染液贮存时间细菌生长时期 17、抗酸染色法主要用于结核分枝杆菌和麻风分支杆菌的检查。 18、倾注平板接种法：常用于牛乳、饮水和尿液标本的菌数的测定。 19、氧化发酵试验：为发酵型，此类细菌无论在有氧或无氧的环境中都能分解葡萄糖，通常为兼性厌氧型。 20、IMVIC试验：I代表吲哚试验，M代表MR试验，V代表VP试验，C代表枸橼酸盐试验；IMVIC试验用于肠杆菌和细菌的鉴定。 21、氧化酶试验：本试验肠杆菌科阴性，弧菌科、非发酵菌阳性、奈瑟菌属均阳性。 22、凝固酶试验用于致病性葡萄菌的鉴定。 23、玻片法凝集试验 原理：取已知型别的抗血清1滴滴在玻片的一端，用接种环取细菌混匀成悬滴。另取生理盐水1滴滴在载玻片的另一端，用接种环混匀成悬滴，轻轻摇晃玻片，如果加入血清出现凝集颗粒，而对照侧仍然均匀浑浊，则凝集阳性。 用途：用于细菌菌种鉴定和分型。 特点：方便简单、快速、特异性强。 24、荚膜肿胀试验原理：有荚膜的细菌如肺炎链球菌等，当与相应的抗血清反应时荚膜将明显增宽，在显微镜下可见在蓝色细菌周围有边界清晰的环状物，厚薄不等，而对照侧无，则为荚膜肿胀试验阳性。 用途：常用于肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等的检测。 25、制动试验：用已知鞭毛抗体与未知细菌鞭毛抗原结合，使鞭毛强制相互粘着失去动力，细菌停止运动，从而特异性的鉴定。常用于运动活跃的细菌鉴定，如霍乱弧菌。 26、病毒的分离培养方法：动物接种 鸡胚培养 组织培养 27、二倍体细胞培养：广泛用于病毒分离和疫苗制备。 28、纸片扩散法：培养基：pH为7.27.4，琼脂厚度为4mm。对营养要求较高的细菌如链球菌、肠球菌属、流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌等需加入相应的营养添加剂。细菌接种：用0.5麦氏管校正菌液浓度，在琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60°以保证接种菌的均匀分布，各纸片中心相距>24mm，纸片距平板內缘>15m，苛养菌应孵育在含CO2的环境中，肠球菌检测对苯咗西林和万古霉素的耐药性须孵育24h。 29、最低抑菌浓度：稀释法所测得的某抗菌药物能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度称为最低抑菌浓度。 用途：是体外药敏试验衡量细菌对抗菌药物的敏感指标。 30、K-B法影响因素：1.培养基：培养基的质量 如pH、硬度、湿度、深度。2.药敏纸片：药敏纸片的含药量、药敏纸片的保存和厚薄。 3.接种菌量4.试验操作质量：孵育条件和温度、时间，抑菌圈测量工具等。 31、E-试验：是一种结合稀释法和扩散法的原理和特点测定微生物对抗菌药物的敏感度的定量技术，E试条是一种宽5mm，长50mm的商品化塑料试条。 32、联合药物敏感试验：体外联合药物敏感试验的意义：1.治疗混合性感染2.预防或延迟细菌抗生素耐药性的发生3.联合用药可以减少剂量以避免达到病毒性剂量4.联合用药比单一用药时常常效果更好。抗菌药物联合用药可以出现4种结果：1.拮抗作用2.无关作用3.累加作用4.协同作用。判断标准：FIC指数<0.5协同作用；0.51为相加作用；12为无关作用；>2为拮抗作用。 33、培养基的一般质量控制：1.外观：每种培养基均应标注清楚、无浑浊，固体培养基应无菌落生长。2.无菌试验：培养基制作完成后，应检测每批培养基的灭菌效果，无菌生长为合格。3.培养基的量：斜面培养基的长度为试管长度的2/3，MH平板的厚度为4mm，其他平板厚度一般为3mm。4.培养基pH：配制好的培养基pH应与规定的pH相差±0.2以内。5.性能试验：每一批新配制的、新购入的培养基，均应用已知性质的标准菌株进行预测，合格方可使用。 34、灭菌器：用生物指示剂嗜热脂肪芽孢杆菌ATCC7953和ATCC12980的培养基或菌片。 35、生物安全水平及适用范围： 一级生物安全防护实验室BSL-1：是微生物基础实验室，进行试验用的都是最低等级的污染物或安全的微生物，并且完全符合标准实验室操作，如枯草芽孢杆菌等。 二级生物安全防护实验室BSL-2：适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物，属于第 三类病原微生物的如：沙门菌属、乙型肝炎病毒等的试验操作。 三级生物安全防护实验室BSL-3：操作对象一般是可以经呼吸道传播的危险微生物，如：结核分枝杆菌。 四生物安全防护实验室级BSL-4：进行试验研究的物质是一些非常高危险性并且可以致命的有毒物质，可以通过空气传播并且现今并没有有效的疫苗或者治疗方法来处理，如:出血热病毒。 36、医院感染：又称医院获得性感染，包括在医院获得而出院后才发生感染，但不包括入院前已存在的感染或入院时已处于潜伏期的感染。探视者在医疗机构中获得的感染、工作人员的职业性感染也属于医院感染，入院48h后发生的感染通常认为是医院感染。 37、医院感染病原体特点：1.病原体以细菌最多见，真菌感染明显增多2.大多数为条件治病微生物3.多数病原菌对抗菌药物具有耐药性或多重耐药4.免疫功能低下患者可以感染多种病原体 常见的医院感染：泌尿道感染 38、血培养的指征：1.当患者发热38或低体温36 2.外周血白细胞计数超过10×10/L，或绝对粒细胞减少 3.合并有明显感染症状体征、伴有感染病灶存在时，就应该采血进行血液细菌培养 39、血液标本采集：.采血时机：理想的血液细菌培养应该是患者接受抗生素治疗之前进行，故采集血培养应尽可能在患者寒战或发热前。 采血部位：应行径皮外周静脉穿刺采血，应严格无菌操作。采血份数：对每名患者应至少从不同部位采集至少23份，对怀疑亚急性感染性心内膜炎的患者，应间隔1h，连续采集3份血进行培养 采血量：通常采血量应是培养基的1/5或1/10，成人患者每次最好采集1015ml；对于儿童患者，每瓶至少注入15ml。 40、全自动血培养仪的检测原理：微生物在生长过程中消耗培养基内的营养物质产生CO2，通过CO2感应器反映瓶内CO2浓度变化，以此来判断瓶内有无微生物生长。检测方法：放射性14C标记技术，特殊CO2感受器均质荧光等检测培养基中PH值，氧化还原电势以判断血液或其他无菌体液中有无细菌。 41、用于常规细菌检测的脑脊液应为1ml或大于1ml；用于检测抗酸菌的脑脊液量应为5ml或大于5ml。 42、皮肤和软组织感染的细菌学检查：封闭性 A、封闭性脓肿：局部消毒后，用注射器抽取脓液和脓肿标本置于厌氧运送培养基内送检。 B、放线菌感染标本：选取流出脓液中的额“硫磺样颗粒”置于无菌试管内送检。 43、急性呼吸道感染约有70%80%由病毒引起。 44、痰液标本的采集法中的气管采集法：通过支气管镜用保护性导管支气管刷采取呼吸道标本，最适合进行细菌培养。 45、痰液标本的检查方法：确定标本是否适合做细菌培养，在低倍视野中鳞状上皮细胞<10个，或白细胞>25个。 46、常规粪便培养，同时选用肠道强选择性培养基和弱选择性培养基 47、金黄色葡萄球菌感染为黄绿色水样粪便 48、膀胱穿刺法：常采用耻骨上膀胱穿刺抽取尿液法，该方法是目前判断膀胱内有无细菌感染的金标准，常在怀疑厌氧菌感染时采用。 49、尿液中一般细菌及假丝酵母菌培养菌落计数>105CFU/ml提示可能为泌尿系统感染。 50、淋病奈瑟菌、衣原体、生殖道支原体、杜克嗜血杆菌的分离培养是淋病、生殖道沙眼衣原体感染、生殖道支原体感染、软下疳实验室诊断的“金标准”，阳性者可确诊。 51、葡萄球菌属：多数菌株耐盐性强；凝固酶阴性葡萄球菌近年来成为医院感染的主要病原菌。 52、链球菌属：A群链球菌也称化脓性链球菌，可致急性肾小球肾炎、风湿热等变态反应性疾病；草绿色链球菌偶可引起亚急性细菌性心内膜炎。 53、脑膜炎奈瑟菌引起化脓性脑脊髓膜炎；淋病奈瑟菌引起急性淋病性尿道炎。 54、淋病奈瑟菌的培养：标本应接种于预温的巧克力平板，5%10%CO2培养，3537，2448h。 55、奈瑟菌的特征：革兰阴性球菌，肾形或咖啡状，成双排列，凹面相对。氧化酶和触酶阳性，淋病奈瑟菌只分解葡萄糖，产酸不产气。 56、肠杆菌科生物学特性：革兰阴性杆菌，无芽孢，有菌毛，多数有周身鞭毛。 需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，血平板生长为灰白、湿润、光滑的菌落，在肠道选择性培养上，因乳糖分解或不分解，生长为不同特征的菌落。生化反应活跃，发酵葡萄糖，氧化酶阴性，触酶阳性，能还原硝酸盐为亚硝酸盐。 肠杆菌科抗原构成主要的有菌体抗原、鞭毛抗原、表面抗原和菌毛抗原等；表面抗原可阻断O抗原与相应抗体之间的反应，加热去除表面抗原能消除这种阻断作用。 肠杆菌科细菌抵抗力不强，大多数肠道致病菌不分解乳糖，在Mac平板出呈无色菌落。 57、大肠埃希菌对青霉素、第1、2、3代头孢菌素及单环菌素耐药，其耐药性主要由该菌产生超广谱内酰胺酶所致。 58、副伤寒可于第1周采取血液，第2、3周取粪便，第3周取尿液，全病程取骨髓做培养。 59、肥达试验：用来辅助诊断伤寒和副伤寒。 60、志贺菌属的微生物学检验： 标本采集 分离培养：将标本接种于MAC/EMB、SS，35培养1824h观察结果，有无色半透明菌落生长，应作进一步检查。鉴定：氧化酶阴性，KIA：KA，不产生脲酶，动力阴性，IMViC为/+ + 。血清学鉴定：首先志贺菌属4种多价血清做玻片凝集试验，如凝集，再进一步做血清定型鉴定。 61、变形杆菌属的鉴定：迅速分解尿素。 鼠疫是我国甲类传染病。 小肠结肠炎耶尔森菌为兼性厌氧菌，在440均能生长。 62、非发酵革兰阴性杆菌是一群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽孢的革兰阴性杆菌；多为需氧菌，菌体直而细长，绝大多数动力阳性，最适生长温度一般为3037，多为条件致病菌；在医院感染中铜绿假单胞菌、不动杆菌为主要。 63、铜绿假单胞菌可导致肺囊性纤维化患者的潜在感染，烧伤病人。 64、铜绿假单胞菌的微生物学检验：标本采集：不同的标本，如痰、伤口分泌物、尿液、脓及穿刺液、血液、脑脊液、胸腹水、关节液。直接显微镜检查：分泌物直接涂片革兰染色镜为革兰阴性杆菌。分离培养：将标本接种血平板，3537，1824h，典型的铜绿假单胞菌落，中等大小，表面菌属光泽。鉴定：产生水溶性蓝绿色、特殊的气味、氧化酶试验阳性，作非发酵菌微量生化鉴定。 65、不动杆菌属为一群不发酵糖类、氧化酶阴性、硝酸盐还原阴性、不能运动的革兰阴性杆菌。 66、霍乱弧菌的生物学特性：菌体一端有单鞭毛，采患者“米泔水”样粪便或培养物做悬滴观察，细菌运动非常活泼，呈穿梭样或流星状，革兰染色镜检，可见大量革兰阴性弧菌，呈鱼群样排列。霍乱弧菌现分为155个血清群，其中仅O1群霍乱弧菌和O139群霍乱弧菌引起霍乱。初次分离常选用PH8.5的碱性蛋白胨水进行选择性增菌，在TCBS选择基上，发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色，在含亚碲酸钾的选择性培养基上如4号琼脂和庆大霉素琼脂平板，可将碲离子还原成元素碲，形成灰褐色菌落中心。 67、霍乱弧菌的微生物学检验：标本采集：粪便。直接显微镜检查：涂片染色镜检 镜检有“鱼群”样排列的革兰阴性弧菌。动力和制动试验 直接取“米泔水”样便制成悬滴标本，用暗视野或相差显微镜直接观察呈穿梭样运动的细菌。分离培养：将标本直接接种于碱性胨水，35，68h后，接种至TCBS平板或4号琼脂平板或庆大霉素琼脂平板，35、1218h观察菌落形态。应使用O1群和O139群霍乱弧菌的多价和单价抗血清进行凝集，结合菌落特征和菌体形态，作出初步判断。鉴定 生化鉴定、血清学分型、生物学分型。 68、副溶血弧菌：菌体一端有单鞭毛。 神奈川现象是鉴定副溶血弧菌致病菌株的一项重要指标。 69、幽默螺旋杆菌是人类胃炎、十二指肠溃疡和胃溃疡的重要病原菌。 70、卫星现象：将流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌共同培养时，因金黄色葡萄球菌能合成较多的V因子，靠近金黄色葡萄球菌周围的流感嗜血杆菌菌落较大，距离越远的菌落越小，这种现象称为卫星现象。 71、流感嗜血杆菌根据荚膜多糖抗原的不同分为a，b，c，d，e，f六个血清型，其中b型的致病性最强，f型次之。 72、百日咳鲍特菌常用的培养基为鲍金培养基。 军团菌属常用的培养基是BCYEa培养基，不能在血平板上生长。 73、串珠试验 将待检菌种于含0.050.5U/ml青霉素的培养基中35培养6h后，炭疽杆菌形态发生变化，菌体成为大而均匀的圆球状成串排列，为炭疽芽孢杆菌特有的现象。 74、蜡样芽孢杆菌主要的致病物质是肠毒素，引起食物中毒。 75、加特纳菌属的镜检，阴道分泌物直接涂片，革兰染色可见上皮细胞被大量革兰阳性或染色不定小杆菌覆盖，导致细胞边缘不清，称为线索细胞。 76、白喉棒状杆菌在粘膜局部定殖并产生外毒素，引起局部炎症和毒血症，粘膜上皮细胞渗出的纤维蛋白和局部细菌、炎症细胞、坏死组织凝结在一起形成灰白色膜，称为假膜。 77、白喉棒状杆菌的生物学检验：标本采集：从疑似假膜的边缘采集分泌物。直接显微镜检查，将标本直接涂片，分别做革兰染色和异染颗料染色，镜检发现革兰阳性棒状杆菌，形态典型且有明显异染颗料。分离培养：标本分离可用亚碲酸钾血平板、血平板，纯培养用吕氏血清斜面，3537,1824h，呈黑色菌落。鉴定 毒力试验 78、结核分枝杆菌在液体培养基上生长迅速，有毒力的菌株在液体培养基中呈束状生长。结核分枝杆菌对理化因素有较强的抵抗力，故实验室常用酸或碱处理标本以消化标本中的粘稠物质并杀死杂菌。 79、结核菌素是结核分枝杆菌的菌体成分，有两种：一种是旧结核菌素，另一种是纯蛋白衍生物，目前都有PPD。PPD有二种：结核分枝杆菌制成的PPDC和卡介苗制成的BBCPPD，每0.1ml含5个单位。 80、试验时，取0.1ml PPD注射两前臂皮内，4872h后，红肿硬结超过5mm者为阳性，表明感染过结核分枝杆菌或接种过卡介苗或细胞免疫正常。 81、麻风分支杆菌的人工培养迄今为止尚未成功。 82、厌氧菌分为：芽孢厌氧菌和无芽孢厌氧菌。 83、厌氧菌感染的临床及细菌学特征：感染局有其他产生 发生在粘膜附近的感染 深部外伤 有特殊的分泌物 某些抗生素治疗无效感染 细菌学特征 84、厌氧菌的常用培养方法：厌氧罐培养法、厌氧气袋法和厌氧手套箱培养法。 85、产气荚膜梭菌在厌氧血平板上培养，多数菌株有双层溶血环，可作为产气荚膜梭菌的鉴定之一。 86、艰难梭菌在CCFA平板上，形成较大的表面粗糙、边缘不齐的黄色菌落，在紫外线照射下，可见黄绿色荧光。 87、脆弱类杆菌群，临床标本中为最多见。 88、钩端螺旋体属在血清学诊断中，目前常用显微镜凝集试验。 89、密螺旋体属血清学诊断：非密螺旋体抗原试验：国际上常用性病研究实验室，国内常用不加热血清反应素试验和快速血浆反应素环状卡片试验（RPR，TRUST试验。密螺旋体抗原试验 90、肺炎、支气管炎：肺炎支原体 泌尿生殖道感染：解脲脲原体、人型支原体、生殖道支原体 多见于艾滋病：穿透质支原体 91、细菌L型在无抗生素等诱导因素作用下，可返祖为原菌，染色后易褪色。 92、凝集试验是检测患者血清中冷凝集素的一种非特异性试验。 93、衣原体是一类能通过滤菌器、严格细胞内寄生、有独特生活周期的原核细胞型生物。 94、沙眼衣原体是引起生殖道感染最常见的性传播疾病之一。 95、立克次体大多在专性活细胞内寄生，血液为最常用的分离标本。 96、皮肤廯菌的微生物学检验：标本采集：采集患者的皮屑、甲屑、病发、脓痂等标本，采集标本放于清洁纸袋。直接显微镜检查：皮屑标本用10% KOH或25%含5%甘油处理后制成涂片。皮屑、甲屑镜检可见有隔菌丝或成串孢子，病发可见内孢子或发外孢子。皮屑、甲屑和病发用70%酒精或在青、链霉素混合液内浸泡5min，取出用生理盐水洗3次，然后接种沙氏培养基，25培养，每周观察菌落生长情况，直至第四周。鉴定：皮肤廯菌的鉴定主要依据菌落特征，镜检特点，尤其是大分子孢子形状及特殊形状菌丝，必要时辅以鉴别试验。 97、白假丝酵母菌也称白色念珠菌，革兰染色阳性，以出芽方式繁殖，形成的芽孢子可伸长成芽管，不与母细胞脱离而发育成假菌丝。可形成表面光滑、灰白色或奶油色的典型酵母样菌落，在玉米粉培养基上可形成假菌丝和厚膜孢子。 98、HSV2与子宫颈癌有密切关系。 99、巨细胞病毒在培养基上培养，核内出现周围饶有一轮“空晕”的大型包涵体，形似“猫头鹰眼”状。 100、EBV抗原分为2类：病毒潜伏感染时的抗原；病毒增殖性感染相关的抗原 101、RTPCR检测标本中SARSCoV RNA是目前最理想的快速诊断方法。 102、细菌学检查与病毒学检查的比较： 形态学检查的不同：细菌用普通光学显微镜，病毒用电镜或免疫电镜，普通光学显微镜可观察病毒的包涵体成少数大型病毒颗粒。 分离培养：细菌用人工培养基分离，病毒用动物接种、鸡胚接种、组织培养。 鉴定：细菌依据形态学检查，分离培养，生化鉴定，血清学试验和动物实验进行鉴定；病毒主要依据动物、鸡胚和组织培养中的表现，以及血清学试验进行试验。