loading buffer 及其配制.docx

loading buffer 及其配制 6XLoading Buffer是琼脂糖/聚丙烯酰胺凝胶电泳用的6倍浓度的核酸样品用Loading Buffer。向电泳样品溶液中加入1/6量即可进行凝胶电泳。 10XLoading Buffer是用于琼脂糖凝胶电泳的10倍浓度的核酸样品用Loading Buffer。制品中含有SDS，可即刻停止各种酶促反应。向酶促反应液中加入1/10量的本制品，即可停止反应，此溶液可直接用于琼脂糖凝胶电泳。 此外，10 X loading buffer 中仅有色素溴酚蓝；6 X loading buffer 中含色素溴酚蓝，溴酚蓝在琼脂糖凝胶中约与300 bp的双链线状DNA的迁移速度相同，而二甲苯腈蓝FF则与4 kbp的双链线状DNA的迁移速度相等 6×Loading buffer: 30mM EDTA 36%(v/v) Glycerol 0.05%(w/v) Xylene Cyanol FF 0.05%(w/v) Bromophenol Blue(w/v的单位为kg/L) 主要用于DNA电泳 10×Loading buffer: 30mM EDTA 50%(v/v) Glycerol 0.25%(w/v) Xylene Cyanol FF 0.25%(w/v) Bromophenol Blue 主要用于RNA电泳 500ml6×Loading buffer配制： 1.称取EDT 4.4g、溴酚蓝250mg、二甲苯青FF(xylene Cyanol FF)250mg ,加入500ml烧杯中，加入约200ml去离子水，加热搅拌至充分溶解。 2.加入180ml甘油，使用2mol/L NaOH调节pH=7.0 3.用去离子水定容至500ml，常温保存。