BCA法测定蛋白质浓度的方法.docx

BCA法测定蛋白质浓度的方法1. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。 2. 完全溶解蛋白标准品，取10微升稀释至100微升 ，使终浓度为0.5mg/ml。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。 3. 将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20微升加到96孔板的标准品孔中，加标准品稀释液补足到20微升。 4. 加适当体积样品到96孔板的样品空中，加标准品稀释液到20微升。 5. 各孔加入200微升BCA工作液，37放置30分钟。 注：也可以在室温放置2小时，或60放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间。 6. 测定A562，540-595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出蛋白浓度。 混匀的问题，可以在参数中选择快速震荡，30s就可以了做的好的话可以达到4个九 事先配好各个浓度的bsa标准品， step 1 A液和B液按 50：1混合， step2 每孔加200ul混合液，然后标准曲线孔加入25ul标准品 ，样品稀释到合适的比例，也加入25ul step3 37度孵育30min step4 测 od 565，附近也行