高效液相色谱法测定食品中山梨酸.docx

高效液相色谱法测定食品中山梨酸高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠样品前处理方法 探讨高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的样品前处理方法。方法 不同样品用不同前处理方法，用二极管阵列管检测品(HPLC-DAD）分析测定，外标法定量。结果 该前处理方法线性关系良好，相对标准偏差分别为山梨酸3.18%、苯甲酸2.74%、糖精钠2.15%，加标回收率均在90%100%之间。结论 该方法稳定性好、准确可靠、简单快速，适用于食品添加剂的测定。 高效液相色谱法可以同时测定山梨酸、苯甲酸、糖精钠，方便简单快捷。各类食品的前处理方法方面虽然有了新规定，但是还不够便捷。因此对部分不同种类的食品前处理方法进行摸索，主要改善是在各类样品处理之前加入适量氢氧化钠，在碱性条件下提取钾盐或者钠盐更为简单，其方法准确可靠，简便快速，便于推广。并对南充市内3区的市场、超市中部分产品中防腐剂和糖精钠进行检测。 1 材料与方法 1.1仪器与试剂 1.1.1 仪器 戴安U-3000高效液相色谱仪，水浴锅，超声清洗器。 1.1.2 试剂 色谱纯甲醇；超纯水；分析纯正己烷；分析纯乙醚；分析纯乙酸铵；0.1mol/L氢氧化钠；10.6亚铁氰化钾；22乙酸锌；pH7.2磷酸盐缓冲溶液。1.0 mg/m1山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准溶液 (国家标准物质中心)。 1.1.3 色谱条件 色谱柱：Agela-Cl8柱(250 mm×4.6mm×5um)；柱温：30；紫外检测波长：230 nm；流动相：甲醇：0.02 mol/L乙酸铵(5:95)；流速：1.0mL/min；进样体积：10L 。 1.2 前处理方法 汽水、果汁、风味饮料类液体样品取样10.0 g于50ml容量瓶中，加入2030ml纯水后超声脱气10 min，用1+1氨水调pH=7，稀释至刻度，经0.45m滤膜过滤后上机。1，2 配制酒、葡萄酒、果酒类称取10.00g样品，放入小烧杯中，水浴加热出去乙醇，用氨水调pH约7，加水定容至50.0ml，经0.45m滤膜过滤后上机。1，2 乳饮料、酱油、醋等基体复杂的液体样品和酱及酱制品类称取2.003.00 g样品于50ml容量瓶中，加入2030ml纯水混匀，加入氢氧化钠1.0 ml、亚铁氰化钾和乙酸锌各2.0 ml，加水至刻度混匀，静置15 min后用滤纸过滤，滤液再经0.45m滤膜过滤后上机。 氢化植物油、蚝油、虾油以及含油量较高的样品类称取1.002.00 g样品于100ml的分液漏斗中，加入24.0ml纯水，加入氢氧化钠1.0 ml，剧烈振摇2min，然后加入正己烷20ml，继续剧烈振摇2min，静置15 min后取下层清液经0.45m滤膜过滤后上机。 含胶基的果冻样品类和凝胶、胶基糖果类称取粉碎的样品1.002.00 g加1ml乙醚分散均匀，然后加氢氧化钠1.0 ml，用水定容至25.0ml，剧烈振摇后于6070水浴30min，冷却后上清液经0.45m滤膜过滤后上机。 乳脂糖果类称取粉碎的样品1.002.00 g、调味糖浆类称取2.003.00 g样品，加氢氧化钠1.0 ml、亚铁氰化钾和乙酸锌各2.0 ml，用水定容至25.0ml，剧烈振摇后于6070水浴30min，冷却后取上清液经0.45m滤膜过滤后上机。 风味冰、冰棍类直接自然融化后称取10.00g样品于50 ml容量瓶中，定容至刻度后振摇提取4h， 静置15 min后过滤取滤液经0.45m滤膜过滤后上机。 复合调味料类称取样品2.003.00 g于25ml容量瓶中，加10ml磷酸盐缓冲液振摇提取4h，再用磷酸盐缓冲液定容至刻度并混匀，静置15 min后过滤取滤液经0.45m滤膜过滤后上机。3 2 结果与分析 2.1 样品前处理 氢氧化钠有沉淀蛋白质的作用。而且不管样品中含的是不是苯甲酸、山梨酸的钠盐都可以先加氢氧化钠将溶液碱化，作用是将山梨酸、苯甲酸转化为水溶性的钠盐和糖精钠一起容易用水提取的方法处理4。一般油脂含量较高的样品都可以先用水提取后再用正己烷除去油脂。蛋白质含量高的样品都需要加入亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白质5。二氧化碳和乙醇含量高的液体样品都可以先加热除去。最终的提取液都为碱性，一般可在定容前用0.1mol/L硫酸溶液调pH为7左右6。最后的处理液都必须过0.45m的滤膜后上机，以免对仪器损害。 2.2 标准曲线 用1.0 mg/m1山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准储备液稀释成含量分别为0、0.010、0.020、0.050、0.100、0.200 mg/m1混合标准使用液。保留时间定性，峰面积定量。山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准曲线的线性良好，r值均在0.999以上。混标分离度好且互不干扰测定，结果见图1。样品干扰少，峰形好，结果见图2。 图1 混标的色谱图 图2 样品散装酱腌菜中的苯甲酸和糖精钠 2.3 方法检出限 根据仪器的4倍信噪比所对应浓度作为仪器的检出限，则称样量为10g液态食品，山梨酸、苯甲酸、糖精钠的检出限分别为1.2、1.0、1.5mg/kg；称样量为1.0g的半固体和固体食品，山梨酸、苯甲酸、糖精钠的检出限分别为6.0、5.0、7.5mg/kg。 3.4 方法的精密度 测定6个不同浓度且均含有3种成分的样品，每个浓度重复测定6次，得到3种成分测定的标准偏差分别为山梨酸3.18%、苯甲酸2.74%、糖精钠2.15%，测定结果的偏差均在允许范围内，说明该方法处理后测定的重现性较好。 3.5 方法的准确度 分别取不同种类的样品，并分别加入一定浓度的山梨酸、苯甲酸、糖精钠，然后各自进行加标回收试验，测得回收率为91.7%98.8%，结果见表1。 3.6 干扰实验 在模拟样品中加入常见的食品添加剂，如甜蜜素、柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄以及柠檬酸、酒石酸、草酸、咖啡因等不干扰测定7，结果见图3。 图3 干扰试验 3.7 样品测定结果 试验采集了覆盖南充3个城区的60份样品，其中密封包装的和散装的各占一半。山梨酸超标的样品有6份，均为散装样品；苯甲酸超标的样品有8份，散装的占7份；糖精钠超标的样品有5份，散装的占4份。结果显示散装食品样品中3种成分超标率远远高于密封包装的同类产品，因此必须重点监控小作坊生产的自制散装产品，以保护广大消费者的食品安全。