《生物化学实验》教学大纲.docx

生物化学实验教学大纲生物化学实验教学大纲 一实验目的 二实验内容 三实验学时安排 四考试方法 五参考教材 一实验目的 生物化学是一门实验性学科，其所有知识均来自于实验。本课程着眼于学生学习和掌握生物化学课程的基本理论、基本知识以及实验技能，培养学生具有初步分析问题和解决问题的能力。 生物化学实验课通过学习滴定、比色、纸层析、电泳、生化制备等基本实验技术，分析研究糖、脂、蛋白质、核酸、酶、维生素等生化物质及某些代谢过程，培养学生具有初步的科学实验能力及严格的科学作风，同时验证生物化学的某些基本理论知识，加深感性认识，并锻炼初步的综合实验能力。 返回顶部 二实验内容 · 实验一 糖的呈色反应及还原糖的检验 一实验目的 学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法；了解鉴定还原糖的方法及其原理。 二实验内容 Molish反应、蒽酮反应、Seliwanoff反应、Bial反应、Fehling反应。 三.实验过程 1. 呈色反应 Molish 反应 蒽酮反应 Seliwanoff反应 Bial反应 2. 还原糖的检验 Fehling反应 Benedict反应 Barfoed反应 四.作业与思考 1. 列表总结和比较本实验7种颜色反应的原理及其应用. 2. 应用Molish反应和Seliwanoff反应分析未知样品时，应注意些什么问题？ 3. 举例说明那些糖属于还原糖. · 实验二 脂类组成对脂类单分子层通透性的影响 一、实验目的 学习制作脂类单分子层和鉴定它的原理及方法，比较不同脂类所形成的脂类单分子层通透性的差异。 二、实验内容 以脂类单分子层作为模式膜，用甲烯蓝为指示剂，观察不同脂类单分子层通透性的影响。 三.实验过程 1. 溶液准备 2. 分光光度计测样 四.作业与思考 1. 试述生物膜的基本结构与功能 2. 解释下列名词：双亲媒性分子、脂类单分子层、磷脂双分子层、膜的内在蛋白质和外在蛋白质. · 实验三 蛋白质浓度的测定Folin-酚法 一、 实验目的 学习Folin-酚法的原理及方法，制备标准曲线，测定未知样品中蛋白质含量。 二、实验内容 制备Folin-酚法标准曲线，测定未知样品蛋白质浓度。 三.实验过程 1. 制备Folin-酚法标准曲线 2. 测定未知样品蛋白质浓度 3. 计算 四.作业与思考 1. Folin-酚法测定蛋白的原理是什么？ 2. 有哪些因素可以干扰Folin-酚测定蛋白含量？ 3. 作为标准蛋白的牛血清清蛋白或酪蛋白在应用时有何要求？ · 实验四 蛋白质浓度测定紫外线吸收法 一、 实验目的 学习紫外线吸收法测定蛋白质含量的原理，了解紫外分光光度计的构造原理，掌握它的使用方法。 二、实验内容 标准曲线的绘制及未知浓度蛋白质溶液的测定。 三.实验过程 1. 标准曲线的绘制 2. 样品测定 四.作业与思考 1. 本法与其它测定蛋白质含量法相比，有哪些优点？ 2. 若样品中含有干扰测定的杂质，应如何校正实验结果？ · 实验五 氨基酸的分离与鉴定滤纸层析法 一、 实验目的 了解氨基酸滤纸层析的原理及操作方法。 二、实验内容 进行氨基酸的纸层析及定性鉴定。 三.实验过程 1. 滤纸的剪裁 2. 点样 3. 展层 4. 定性鉴定 5.定量测定 四.作业与思考 1. 做好本实验的关键是什么？ 2. 实验操作过程，为何不能用手接触滤纸？ 3. 影响Rf 制的因素有哪些？ · 实验六 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 一、 实验目的 了解电泳的一般原理，掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术，测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。 二、实验内容 进行血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳并进行结果判断。 三.实验过程 1. 仪器与薄膜的准备 2. 点样 3. 电泳 4. 染色与漂洗 5. 透明 6. 结果判断与定量 四.作业与思考 1.根据人血清中血清蛋白各组分等电点，如何估计它们在pH8.6的巴比妥巴比妥钠电解缓冲液中移动的相对位置 2.简述醋酸纤维素薄膜电泳原理及优点 · 实验七 蛋白质和氨基酸的呈色反应 一、 实验目的 学习常用的鉴定蛋白质氨基酸的方法及其原理；学习几种特定氨基酸的特殊颜色反应及其原理。 二、实验内容 双缩脲反应、茚三酮反应、黄色反应、茚三酮反应。 三.实验过程 1. 加样 2. 观察 四.作业与思考 1. 综合分析、对比蛋白质和氨基酸各种鉴定方法的特点和用途？ 2. 如果蛋白质水解作用一直进行到双缩脲反应呈阴性结果，能对此作何结论？ 3. 茚三酮反应的阳性结果是否是同一色调？若不是，为什么？ · 实验八 蛋白质的沉淀、变性反应 一、 实验目的 了解蛋白质的沉淀反应、变性作用和凝固作用的原理及它们的相互关系；学习盐析和透析等生物化学的操作技术。 二、实验内容 可逆沉淀反应，不可逆沉淀反应。 三.实验过程 1. 蛋白质的可逆沉淀反应蛋白质的盐析作用 2. 蛋白质的不可逆沉淀反应 重金属沉淀蛋白质 有机酸沉淀蛋白质 无机酸沉淀蛋白质 加热沉淀蛋白质 3.蛋白质可逆沉淀与不可逆沉淀的比较 四.作业与思考 1. 为什么鸡蛋清蛋白可用作铅中毒或汞中毒的解毒剂？ 2. 蛋白质分子中的那些集团可以与 重金属离子作用而使蛋白质沉淀？ 有机酸、无机酸作用而使蛋白质沉淀？ 3. 高浓度的硫酸铵对蛋白质溶解度有何影响，为什么？ 4. 在蛋白质可逆沉淀反应的实验中，为何要用蛋白质氯化钠溶液？ · 实验九 酵母RNA的提取与地衣酚显色测定法 一、 实验目的 了解并掌握稀碱法提取RNA及地衣酚显色法测定RNA含量的基本原理及具体方法。 二、实验内容 用稀碱法提取酵母细胞RNA，并用地衣酚显色法测定。 三.实验过程 1. 酵母RNA提取 2. RNA地衣酚显色测定 标准曲线的制作 样品的测定 RNA含量的计算 四.作业与思考 1.用你所学过的化学知识，分析三种催化剂：FeCl3·6H2O,CuCl2·H2O 和CuO,哪种催化剂的催化效果更好？ 2.地衣酚反应中，干扰RNA测定的因素有哪些？如何能减少它们的影响？ · 实验十 动物组织DNA的制备 一、 实验目的 学习盐溶液法从动物组织中提取脱氧核糖核酸的原理及操作方法。 二、实验内容 以猪肝为原料用不同浓度的盐溶液提取其中的脱氧核糖核酸。 三.实验过程 1. DNA的提取 2. DNA含量的测定 标准曲线的制定 样品的测定 DNA含量的测定 四.作业与思考 1. 结合本人实验操作的体会，试述在提取过程中应如何避免大分子DNA的降解和断裂。 2. DNA制品都可以用哪几种方法测定其含量？试从它们的原理、准确性等方面加以比较。 · 实验十一 核酸浓度测定定磷法 一、 实验目的 掌握利用核酸定磷测定法测定核酸的含量。 二、实验内容 通过对总磷、无机磷的测定，计算未知样品中的核酸浓度。 三.实验过程 1. 定磷标准曲线的制定 2. 测定总磷量 配制RNA样品溶液 样品的消化、总磷量和回收率测定 无机磷的测定 3.核酸含量计算 四.作业与思考 1. 测定磷的回收率有何意义？ 2. 为什么所用水的质量、钼酸铵的质量和显色时酸的浓度对测定结果影响较大？ · 实验十二 核酸浓度测定紫外线吸收法 一、 实验目的 了解紫外线吸收法测定核酸浓度的原理，并进一步了解紫外分光光度计的使用方法。 二、实验内容 用紫外线吸收法测定核酸浓度。 三.实验过程 1.标准曲线的绘制 2.样品蛋白质浓度的测定 四.作业与思考 1. 干扰本实验的物质有哪些？ 2. 设计排除这些干扰物的实验。 · 实验十三 维生素A、B1、B2的定性鉴定 一、实验目的 了解维生素A、B1、B2定性鉴定的原理及方法。 二、实验内容 维生素A的定性鉴定以及维生素B1、B2的定性鉴定。 三.实验过程 1. 维生素A 2. 维生素B1 3. 维生素B1 4. 维生素B2 四.作业与思考 1. 举出含有维生素A、B1和B2最丰富的天然食物。 2. 说明4种定性鉴定维生素A、B1和B2的基本原理。 3. SbCl3呈色反应检测维生素A实验的重要环节是什么？ 4. 试把上述4种鉴定方法之一改编为定量检测方法。 · 实验十四 维生素C的定量测定 一、实验目的 了解用2，6二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量的原理及方法。 二、实验内容 用2，6二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C的含量。 三.实验过程 1. 提取 2. 标准液的滴定 3. 样品滴定 4. 计算 四.作业与思考 1.为了测定准确的维生素C含量，实验过程中都应注意哪些操作步骤？ 为什么？ 2.试简述维生素C的生理意义。 · 实验十五 酶的激活剂、抑制剂及温度对酶的活性的影响 一、实验目的 了解酶反应的激活剂、抑制剂，了解温度对酶活性的影响。 二、实验内容 了解酶的激活剂、抑制剂、酶的最适反应温度。 三.实验过程 四.作业与思考 1. 激活剂可分哪几类？本实验中的氯化钠、硫酸铜属于哪种类型？ 2. 抑制剂与变性剂有何不同？试举例说明。 3.酶反应的最适温度是酶反应的物理常数吗？它与哪些因素有关？ · 实验十六 血清谷丙转氨酶的测定 一、 实验目的 掌握血清谷丙转氨酶活力测定的方法，学习绘制标准曲线，并学习如何设计实验。 二、实验内容 用King氏法测定血清谷丙转氨酶的活性。 三.实验过程 1. 制备标准曲线 2. 绘制标准曲线 3. 样品及回收率测定 4. 结果计算 标准曲线测定法 标准管测定法 计算回收率 四.作业与思考 1. 什么叫做转氨基作用？根据所学理论阐明转氨基作用在蛋白质的合成与分解及糖、脂肪代谢中有何重要作用？ 2. 回收率测定在实际工作中有何用途？ · 实验十七 乳酸脱氢酶活力测定 一、实验目的 学习LDH活力测定原理，测定猪肉提取液LDH活力 二、实验内容 利用动物肌肉制备乳酸脱氢酶的组织提取液，用紫外分光光度法测定LDH的活力。 三.实验过程 1. 制备肌肉匀浆 2. LDH活力测定 3. 蛋白质含量测定 4. 数据处理 四.作业与思考 1.简述用紫外分光光度法测定以NAD+为辅酶的各种脱氢酶测定原理。 · 实验十八 聚合酶链式反应 掌握基本PCR技术的原理，学会PCR扩增过程中各步骤的操作，了解PCR扩增仪的使用方法，学会扩增结果的判读。 二、实验内容 以大肠杆菌23SRNA的DNA中106476bp的特异性区域为扩增目的片段，通过PCR技术的基本要求，扩增得到370bp的扩增产物，并通过琼脂糖凝胶电泳的方法对结果进行分析。 返回顶部 三实验学时安排： 第一学期实验 序 号 实 验 名 称 周 次 实验1 糖的呈色反应及还原糖的检验 3-4 脂类组成对脂类单分子层通透性的影实验2 5-6 响 实验3 蛋白质浓度测定Folin酚法 7-8 蛋白质浓度测定紫外线吸收实验4 9-10 法 实验5 氨基酸的分离与鉴定滤纸层析法 11-12 实验6 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 13-14 实验7 蛋白质和氨基酸的呈色反应 15-16 实验8 蛋白质的沉淀、变性反应 15-16 实验9 酵母RNA的提取与地衣酚显色测定法 17-18 第二学期实验 学 时 3 3 3 3 4 4 2 2 4 类 型 验 证 验 证 综 合 综 合 综 合 综 合 验 证 验 证 验 证 序 号 实 验 名 称 周 次 实验10 动物组织DNA的制备 3-4 实验11 核酸浓度测定定磷法 5-6 实验12 核酸浓度测定紫外线吸收法 7-8 实验13 维生素A、B1、B2的定性鉴定 9-10 实验14 维生素C的定量测定 9-10 酶的激活剂、抑制剂及温度对酶的活实验15 11-12 性的影响 实验16 血清谷丙转氨酶的测定 13-14 实验17 乳酸脱氢酶活力测定 15-16 实验18 聚合酶链式反应 17-18 备注：根据实际情况选做十六至十八个实验。 四考试方法 每次实验上交实验报告，学期末汇总平均分数。 学 时 3 3 3 3 4 4 2 2 4 类 型 综 合 综 合 综 合 验 证 综 合 验 证 综 合 综 合 创 新 返回顶部 返回顶部 五参考教材 生物化学实验原理和方法李建武等编. 北京大学出版社。 返回顶部