云南红豆杉生长过程中10去乙酰巴卡亭ⅲ的含量变化.doc

云南红豆杉生长过程中10-去乙酰巴卡亭的含量变化云南红豆杉生长过程中10-去乙酰巴卡亭的含量变化作者：李海峰，赵志莲，刘光明 【摘要】目的研究云南红豆杉生长过程中不同部位10-去乙酰巴卡亭(10-deacetyl baccatin)的含量变化。方法采用色谱柱Agilent C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流动相为甲醇-乙腈-水(421345），流速1.0 ml·min-1，柱温32，检测波长234 nm，测定云南红豆杉生长过程中不同部位10-去乙酰巴卡亭的含量。结果回归方程 Y = 15.290 29X -4.059 76 (r = 0.999 0)，线性范围5.50550 g·ml-1；加样回收率（n=6）98.6%，RSD为2.4%。在云南红豆杉生长期树皮中10-去乙酰巴卡亭含量高于枝叶，是枝叶中最高含量的1.498倍；休眠芽分化期和休眠期是10-去乙酰巴卡亭积累的关键时期，在枝叶中的含量显着高于树皮，最高含量达0.115 0%是树皮中最高含量的1.769倍，二年生枝叶中含量略高于一年生枝叶。结论该方法简便、准确度高，可用于云南红豆杉枝叶的质量控制。 【关键词】 云南红豆杉 生长过程 10-去乙酰巴卡亭 高效液相色谱法Abstract：ObjectiveTo study the content change of 10-deacetyl baccatin of the different parts in the growing process of Taxus yunnanensis.MethodsHPLC was adopted.The mobile phase of Agilent C18 chromatogram column (4.6 mm×250 mm, 5 m) was MeOH-Acetonitrile-H2O(42:13:45), the flow speed was 1.0 ml·min-1, the column temperature was 30 and the detection wavelength was set at 234 nm. The content change of 10-deacetyl baccatin of the different parts in the growing process of Taxus yunnanensis was determined. ResultsThe regression equation of tenuifolin was Y = 15.290 29X -4.059 76 (r = 0.999 0) and the linear range was 5.50550 g·ml-1 . The recoveries of 10-deacetyl baccatin was 98.6% ( RSD = 2.4%).In the growing season of Taxus yunnanensis, the content of 10-deacetyl baccatin in bark was higher than that in branches and leaves, its 1.498 times of the highest content in branches and leaves.The differentiation period of dormant bud and the period of dormancy were the critical period of 10-deacetyl baccatin accumulation, the content in branches and leaves was notable higher than that in bark, the highest content was up to 0.115 0%, its 1.769 times of the highest content in bark. The content in biennial branches and leaves was higher than that in the annual.ConclusionThis method is convenient and has high accuracy. It can be used for quality control of Taxus yunnanensis branches and leaves.Key words： Taxus yunnanensis; Growth; 10-deacetyl baccatin; HPLC10-去乙酰巴卡亭(10-deacetyl baccatin,简称为10-DAB)1是从红豆杉属植物（Taxus）短枝叶中分离、提取得到的一种紫杉烷二萜类化合物，是目前和 科学 研究用紫杉醇和多烯紫杉醇化学半合成的重要前体化合物，在缓解紫杉醇资源短缺问题中起着不可替代的作用。云南红豆杉Taxus yunnanensis是我国现有几种红豆杉植物中紫杉醇和10-DAB含量较高、分布最广的树种2。从红豆杉枝叶中提取、分离10-DAB，再经过化学半合成生产紫杉醇和多烯紫杉醇，是一条不破坏红豆杉野生植物资源基础上能实现资源再生利用的有效途径。有关10-DAB的研究报道主要是从红豆杉植物中提取、分离、含量测定、半合成紫杉醇和多烯紫杉醇，而对云南红豆杉生长过程中不同部位10-DAB含量变化研究未见报道。因此，本文利用高效液相法对云南红豆杉生长过程中不同部位10-DAB的含量变化作了检测，为建立科学、合理的云南红豆杉枝叶采摘标准提供 参考 。 1 仪器与试剂 美国惠普公司Agilent1100高效液相色谱仪，包括溶剂箱、四元梯度泵、真空脱气机、微量自动进样器、恒温柱温箱、可变波长检测器。赛样台式 计算 机（Agilent ChemStation 色谱站）。BUCHI旋转蒸发仪，SY8200T超声波清洗器（上海声源超声波仪器设备有限公司），AB104 电子 天平（瑞士Mettletoledo公司），DZF-6021型真空干燥箱（上海一恒科技有限公司）。待添加的隐藏文字内容210-DAB标准品由SICMA提供（纯度99%）；样品处理用甲醇、醋酸乙酯为分析纯；高效液相专用去离子水，进行高效液相分析的流动相乙腈、甲醇均为色谱纯。 2 方法与结果 2.1 对照品储备液的制备精密称取10-DAB 1 100 g加入到10 ml容量瓶中，用CH3OH溶解并定容，得对照品储备液(110 g·ml-1)。2.2 供试品溶液的制备按 文献 3报道的方法，精密称取样品粉末（60目筛）0.5 g，置于100 ml容量瓶中，加甲醇20 ml，超声处理30 min，浸泡24 h，过滤，滤渣分别用15 ml CH3OH按此步骤重复处理2次，合并3次提取滤液，30水浴浓缩，加醋酸乙酯-5 %NaHCO3（11）40 ml萃取，收集醋酸乙酯层，水层分别用10 ml醋酸乙酯萃取两次，合并三次萃取的醋酸乙酯层，30水浴浓缩挥干溶剂，用5 ml甲醇定容，0.45 m滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液。2.3 色谱条件按文献3报道的方法，色谱柱为Agilent C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流动相为甲醇-乙腈-水（421345），检测波长234 nm，流速1.0 ml·min-1，柱温32，进样量10 l。2.4 方法专属性在“2.3”项色谱条件下，分别取对照品溶液和供试品溶液进样测定，得到特征峰，供试品溶液与杂质分离良好，无干扰（对照品与样品的色谱见12)。2.5 线性关系考察分别精密吸取适量的对照品储备液，用甲醇依次稀释成55.0 ，44.0 ，33.0 ，22.0 ，11.0 ，5.50 g·ml-1系列溶液。在“2.3”项色谱条件下，分别进样10 l，测定标准品峰面积Y，以进样浓度X（g·ml-1）对峰面积进行回归，得回归方程：Y = 15.290 29X -4.059 76，r= 0.999 0。结果表明10-DAB浓度在5.50550 g·ml-1范围内与峰面积呈良好的线性关系。