食品科学与工程毕业设计（论文）啤酒糟面膜的研制.doc

四川理工学院毕业论文啤酒糟面膜的研制学 生： 学 号：专 业：食品科学与工程班 级：2007级2班指导教师： 四川理工学院生物工程学院二O一O 年 六月四 川 理 工 学 院毕业设计（论文）任务书设计（论文）题目： 啤酒糟蛋白面膜 学院： 生物工程 专业： 食品科学与工程 班级： 2007级2班 学号： 07031060221 学生： 指导教师： 宗绪岩 接受任务时间 1 月 10 日 教研室主任 （签名）二级学院院长 （签名）1毕业设计（论文）的主要内容及基本要求（1）在常用面膜配方中添加不同比例的啤酒糟蛋白或其酶解产物；（2）测定样品的理化性质；（3）检测样品的微生物指标；（4）测定样品的功能性质；（5）根据测定结果初步确定啤酒糟蛋白或其酶解产物的添加比例。2指定查阅的主要参考文献及说明推荐参考文献资料：（1） 生物化学；（2） 微生物学；（3） 化妆品工艺学及有关专业期刊和网上资料。3进度安排设计（论文）各阶段名称起 止 日 期1查阅资料的准备工作1月113月25日2样品制备3月274月21日3理化、微生物及功能性质检测4月245月19日4数据整理及撰写论文5月226月4日5答辩准备和毕业答辩6月56月9日注：本表在学生接受任务时下达摘 要啤酒糟经粉碎、过筛、离心可得到啤酒糟蛋白。啤酒糟蛋白酶解150min得到啤酒糟多肽，将啤酒糟多肽与卵磷脂、VE、甘油、凡士林、去离子水等以适当的比例调配成组织形态均匀的膏体。分别测定理化指标和卫生指标，并检测其还原力和清除羟基自由基能力。结果表明，啤酒糟多肽制成的面膜理化和卫生指标合格，啤酒糟面膜浓度达到2.0mg/mL时，接近于VC 1.0mg/mL浓度时的还原力；0.1g的啤酒糟面膜相当于0.123mgVC的去羟基自由基能力。使用啤酒糟酶解多肽生产啤酒糟面膜具有可行性和功能性。关键词：啤酒糟蛋白，蛋白酶解，多肽，面膜ABSTRACT After crushing, screening, centrifugal ,Brewer's spent grains protein can be extracted from brewer's spent.Brewer's Peptide will be got when brewer's spent grains protein hydrolyzate 150min.Useing the Brewer's peptides together with lecithin, VE, glycerin, petrolatum, deionized water to deployment into a uniform paste in an appropriate proportion of Morphology.Physical and chemical indicators and health indicators were measured, and determine the reducing power and scavenging ability.The results show that,the physical and chemical and health indicators of Brewer's Peptide is qualified .When concentration of Brewer's mask is 2.0mg/mL,it's reducing power is equivalent to 1.0mg/mL VC.For hydroxyl radical capacity,0.1g of the brewer's grains mask is equivalent to 0.123mgVC. It is made feasibility and functional to use Polypeptide hydrolyzed from brewer's spent grains in mask. Keywords: Brewer's spent grains protein; Hydrolyzate; Polypeptide; Mask目录摘 要IABSTRACTII目录III第一章前言11.1啤酒糟的来源以及成分11.2啤酒糟的利用现状11.3蛋白质11.3.1蛋白质的定义11.3.2蛋白质的性质11.4多肽21.4.2多肽的保存21.4.3多肽的溶解性31.5面膜31.5.1面膜的定义以及原理31.5.2面膜的起源31.5.3面膜的功能31.5.4面膜的急救真相41.5.5面膜的成分41.5.7面膜的发展趋势71.5.8红酒面膜81.6立题依据和意义8第二章 材料与方法102.1实验原材料和主要试剂102.1.1 实验原材料102.2主要仪器设备112.3啤酒糟蛋白面膜的制作112.3.1啤酒糟蛋白提取的工艺流程以及制取啤酒糟多肽的方法112.3.1.1啤酒糟蛋白提取工艺112.3.1.2啤酒糟多肽制取方法112.3.2啤酒糟面膜的配制122.3.2.1啤酒糟面膜的配方122.3.2.2啤酒糟面膜的配制方法122.4.1菌落总数的检测122.4.1.1检测程序122.4.1.2操作步骤132.4.1.3菌落总数计算方法142.4.2还原力的检测152.4.3清除羟基自由基能力的检测15第三章 结果与讨论163.1啤酒糟面膜的配制163.2菌落数的检测163.3抗氧化能力的检测163.3.1还原力的测定163.3.2清除羟基自由基能力的测定17第四章结论19参考文献20致谢21第一章前言1.1啤酒糟的来源以及成分啤酒糟主要由麦芽的皮壳、叶芽、不溶性蛋白质、半纤维素、脂肪、灰分及少量未分解的淀粉和未洗出的可溶性浸出物组成，是一种低成本、食品级的废物1，占啤酒工业总副产物的85%1。啤酒生产所采用原料的差别以及发酵工艺的不同，使得啤酒糟的成分不同，因此在利用时要对其组成进行必要的分析。总的来说，啤酒糟含有丰富的粗蛋白和微量元素，具有较高的营养价值。谢幼梅等（1995）分析指出，啤酒糟干物质中含粗蛋白25.13%、粗脂肪7.13%、粗纤维13.81%、灰分3.64%、钙0.4%、磷0.57%；在氨基酸组成上，赖氨酸占0.95%、蛋氨酸0.51%、胱氨酸0.30%、精氨酸1.52%、异亮氨酸1.40%、亮氨酸1.67%、苯丙氨酸1.31%、酪氨酸1.15%；还含有丰富的锰、铁、铜等微量元素。1.2啤酒糟的利用现状从目前国内外研究动态来看，啤酒糟的利用途径主要有：直接生产蛋白制品，开发饲料，培植食用菌、配制肥料和建材等2。1.3蛋白质1.3.1蛋白质的定义蛋白质是生物体中广泛存在的一类生物大分子，由核酸编码的氨基酸之间通过氨基和羧基形成的肽键连接而成的肽链，经翻译后加工而生成的具有特定立体结构的、有活性的大分子。泛指某一类蛋白质，与前面的限定词组成复合词时，一律用“蛋白质”，如血浆蛋白质、纤维状蛋白质、酶蛋白质等，此时“质”字不得省略(习惯词除外，新命名者从此)。凡指具体蛋白质时，“质”字可省略，如血红蛋白、肌球蛋白等。1.3.2蛋白质的性质(1) 溶解性：蛋白质分子的直径很大，达到了胶体微粒的大小，所以，蛋白质溶液具有胶体的性质。(2) 水解：蛋白质在蛋白酶作用下，经水解反应，生成氨基酸。(3) 盐析：少量的盐（如硫酸铵、硫酸钠等）能促进蛋白质的溶解，但如向蛋白质溶液中加入浓的盐溶液，可使蛋白质的溶解度降低而从溶液中析出。这种作用叫做盐析。这样析出的蛋白质在继续加水时，仍能溶解，并不影响原来蛋白质的性质。(4) 变性：蛋白质受热、紫外线、X射线、强酸、强碱、重金属(如铅、铜、汞等)盐、一些有机物(甲醛、酒精、苯甲酸)等的作用会凝结，这种凝结是不可逆的，即凝结后不能在水中重新溶解，这种变化叫做变性。(5) 颜色反应：蛋白质可以跟许多试剂发生颜色反应。例如，有些蛋白质跟浓硝酸作用时呈黄色。(6) 蛋白质的灼烧：蛋白质被灼烧时，产生具有烧焦羽毛的气味3。1.4多肽1.4.1多肽的定义多肽是氨基酸以肽链连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物。由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二肽，同理类推还有三肽、四肽、五肽等。通常由10100氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫多肽。它们的分子量低于10，000Da（Dalton道尔顿），能透过半透膜，不被三氯乙酸及硫酸铵所沉淀。也有文献把由210个氨基酸组成的肽称为寡肽（小分子肽）；1050个氨基酸组成的肽称为多肽；由50个以上的氨基酸组成的肽就称为蛋白质。1.4.2多肽的保存多肽类保健食品只需置于阴凉干燥处即可。对于多肽试剂和多肽类药物则需要保存在干燥器中。在将它们暴露于空气之前， 冷冻干燥多肽可以放于室温。这将是湿度影响减少，当无法冷冻干燥时，最好的方法是以小的工作样量存放。对于含Cys，MetorTrP的多肽试剂，脱氧缓冲剂对其溶解必不可少，因为这种多肽试剂可易空气氧化，在封瓶前，慢慢流过多肽试剂的氮气或氩气也会降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽试剂也容易降解，所有这些肽与不含这些有问题解苷的那些肽相比，生命期有限。多肽具广泛的溶解性。多肽不溶的主要问题是形成二级结构。除了最太肽外，这点都会发生，在有多重疏水残基的肽中更显著。盐会促进二级结构形成。我们建议先在无菌蒸馏水或去离子中溶解多肽。如需要增加溶解率，可用声处理。溶解仍有问题，加少量稀乙酸（10%）或氨水，会便于溶解。要长期保存多肽试剂，最好冷冻干燥，冷干粉可在-20或更低存放几年而很少或无降解。溶液中的多肽远不稳定。多肽易受细菌降解，应用无菌纯化水溶解。含有Met，Cgs或Try残基的多肽溶液由于氧化，寿命有限。应溶于无氧溶剂，为防止重复冻融的破坏，建议溶解过量的肽的便实验，其余多肽以固体形成保存。1.4.3多肽的溶解性大多数肽的首选溶剂是超纯抽气水。稀乙酸或氨水分别对于碱性或酸性多肽的溶解很重要。这些方法不溶的多肽， 需要DMF、脲、guanidiniam chloride或acetonitrnle来溶解，这些溶剂可能某些实验有副作用。所以我们建议设计多肽时要加注意。1.5面膜1.5.1面膜的定义以及原理面膜是一种敷在脸上的美容护肤品，有的敷后经过2030分钟，便会形成一层紧绷在脸上的薄膜，所以称做面膜。但是，有的面膜干燥后不形成膜；不能整块地掀起来，只能用水把它洗掉，准确地说，这些面膜应该叫做敷面涂剂，但习惯上，因为操作和效果跟做面膜是一样的，也就笼统地归到一起叫面膜了。面膜的原理，就是利用覆盖在脸部的短暂时间，暂时隔离外界的空气与污染，提高肌肤温度，皮肤的毛孔扩张，促进汗腺分泌与新陈代谢，使肌肤的含氧量上升，有利于肌肤排除表皮细胞新陈代谢的产物和累积的油脂类物质，面膜中的水分渗入肌肤表皮的角质层，皮肤变得柔软，增加弹性。肌肤自然光亮有弹性，呈现好气色4。1.5.2面膜的起源面膜的历史起源：举世闻名的埃及艳后晚上常常在脸上涂抹鸡蛋清，蛋清干了便形成紧绷在脸上的一层膜，早上起来用清水洗掉，可令脸上的肌肤柔滑、娇嫩，保持青春的光彩。据说，这就是现代流行面膜的起源。中国唐代“回眸一笑百媚生”的杨贵妃，传言她美艳动人，除饮食起居等生活条件优越外，还得益于她常用的专门调制的面膜。杨贵妃的面膜并不难做：用珍珠、白玉、人参适量，研磨成细粉，用上等藕粉混合，调和成膏状敷于脸上，静待片刻，然后洗去。说是能去斑增白，去除皱纹，光泽皮肤。看来，简便易做、效果明显的美容面膜，很早以前便为爱美的女士争相采用，不断改进，沿用至今。在美容化妆品中，面膜属于最早出现的一种。1.5.3面膜的功能面膜不仅仅有滋养的作用。一个好的面膜，它具有很好的滋养效果，另一点，它还可以去掉你肌肤表面的老死角质层。因此，面膜的最大功效是在滋养的同时调整你的皮肤纹理，剥除表皮的老死细胞，使皮肤纹理光滑，毛孔更为细致；呈现清新，亮丽的容貌。各种功能的面膜会让肌肤得到很好的护理，如清洁，保湿，美白，去角质修复，营养等等，每个人都可针对自己的肌肤情况找到相应的面膜，拥有健康润泽的肌肤。而一张合适的面膜，可以帮助你改善面部的肌肤。经过测试，使用过面膜的脸颊会比没做过的脸颊更光泽，并且有弹性。1.5.4面膜的急救真相（1）把湿润的面膜敷在脸上，面膜里的物质就把皮肤紧紧地包裹起来，让皮肤与外界的空气阻隔开，一方面让水分缓缓地渗透入表皮的角质层，同时也防止膜内的水分很快丢失，让角质层的细胞在湿润的环境中“喝个够”，使深层细胞的胶原质吸足水分，这样皮肤便会柔软起来，增加弹性。与此同时，皮肤表面“铺上了被子”，会暖和起来，毛细血管慢慢扩张，于是加速了皮肤深层的血液微循环，增加了表皮各层细胞的活力，一除疲惫的老态。（2）在做面膜的过程中，皮肤与外界空气阻隔开，皮肤表面的温度有所升高，也会使毛孔扩张，促进汗腺的分泌，这样就有利于把毛孔里沾染的外界灰尘、化学污染物质和微生物清除个同样也有利于排除表皮细胞新陈代谢产生的废物和积累得过多的油脂类物质。紧跟着，面膜在形成膜时，它的胶黏性成分就会把皮肤表面和毛孔里的污垢、化学污染物、废物、油脂等有害于皮肤健康的“毒”物黏附在一起彻底清除。（3）面膜敷在脸上慢慢干燥后形成薄膜，在这过程中缓缓地把皮肤适度地收紧，增加张力，形成一种良好的刺激，让皮肤上的皱纹舒展开来。小的皱纹看不见了，大的深的皱纹显得小了、成了，整个面容也就显得年轻了。（4）湿润的面膜敷在脸上，并停留一段时间，这就方便了营养性或功效性的物质渗透进入皮肤的深层。与此同时，毛细血管的扩张，血液微循环的增加，会大大促进细胞对面膜中营养性或功效性物质的吸收和利用。正是考虑到这种优异的效果，人们便把这样那样的营养性或功效性物质添加进面膜里，以期取得更好的效果。这么一来，面膜除了上面讲到的基本功效外，按照添加进来的物质。还可以增强或增加各种各样的功效，如弹力保湿、紧致提拉、保湿润肤、美白去斑、防皱抗衰老、消炎排毒、防治暗疮等。1.5.5面膜的成分面膜中一般成分有封闭剂、吸湿剂、亲水基质、防光剂、乳化剂、防腐剂、香料、脂质体（1） 封闭剂：可以在皮肤表面形成封闭薄膜，用以减少TEWL，成分主要为油脂类。一般护肤品保湿剂中常用的封闭剂成分：石蜡油、矿物油、石蜡、角鲨烷、硅油脂肪醇、蜡脂、多元醇：丙二醇等。其中石蜡油是最有效的封闭剂之一；而羊毛脂因为价格较贵、气味特殊以及有潜在致接触性皮炎作用而应用较少；硅油是一种较新的制剂，不油腻、基本无味、较少引发过敏及痤疮，故市售保湿剂中应用较多。（2）吸湿剂：吸湿剂的作用机制是从真皮及外界环境中吸收水分，保存于角质层中。如果让吸湿剂从外界环境中吸收水分，皮肤周围相对湿度至少达到70%，而在实际中相对湿度是不能达到这一水平的，故局部外用的吸湿剂大多是从真皮而非环境中吸收水分。吸湿剂主要包括:甘油、蜂蜜、乳酸钠、尿素、丙二醇、山梨糖醇、吡咯烷酮羧酸、动物胶、透明质酸、维生素及蛋白质等。（3）亲水基质：亲水基质特指的是吸湿剂中一些能与水结合的大分子，能保持水分及封阻作用，包括透明质酸、硫酸软骨素、胶原、弹力蛋白及DNA等。富含这些亲水基质的保湿剂可以从真皮中吸取大量水分并与之结合，无论在低湿度还是在高湿度条件下，都具有相同的高吸湿性。（4）防光剂：防光剂能防止细胞损伤及脱水。与光老化有关的紫外线主要是中波紫外线(UVB)和长波紫外线(UVA)，皮肤被照射后可产生自由基，科婷保湿这些自由基经氧化或交联作用损伤DNA，造成皮肤干燥、脱屑、脆性增加以及修复功能减退。防光剂分物理性与化学性两种。科婷舒敏健肤修复乳液物理性防光剂成分包括氧化锌、二氧化钛，化学性防光剂又称吸收性防光剂，成分有对氨基苯甲酸酯、水杨酸酯及二苯酮等。市售防光产品成分多以化学性防光剂为主。（5）乳化剂：乳化剂是保湿剂中的主要辅助成分，用于使原本不相溶的几种液体乳化形成均一的混合物，如油和水，常用的乳化剂有甘油单酯、甘油双酯、磷脂等。 科婷新活奇迹神仙水乳化剂目前仍是外用剂型中应用最多的基质。（6）防腐剂：羟苯甲酸酯类、能释放甲醛的化合物、一些络合剂如依地酸(EDTA)、KathonCG(Methylisothiazolinone和methylchloroisothiazolinone的混合物)、以及酒精等，这些物质虽有良好的防腐作用但常常成为接触性皮炎的原因。（7）香料：香料用于掩饰原有成分味道或还可产生宜人味道，但某些香料会产生皮肤刺激症状。（8）脂质体：脂质体呈双壳球状，直径小于5微米，双壳含与皮肤细胞膜类似成分，球芯为水溶性保湿剂、维生素或其他药物。脂质体作为药物载体能较好的包裹亲水或亲油性药物，提高药物的渗透性增加药物在皮肤中的滞留量，降低药物对皮肤的刺激性。近20年来，皮肤局部用脂质体制剂日益引起关注，脂质体在保湿剂中的应用是皮肤护理产品中的一个较新的进展。1.5.6面膜的分类从使用过程中按是否成膜分为，凝结性面膜、胶原面膜、非凝性面膜。（1） 凝结性面膜包括硬膜、软膜、啫哩和蜜腊面膜：这类面膜涂敷一段时间后，面膜凝结，可整体剥离。其功能A、使面膜中的有效成分充分渗透。B、将皮肤分泌物阻隔于膜体内，达到使皮肤保湿的目的。C、促进血液循环，增强皮肤弹性。（2） 原面膜：面膜似一张弹性，伸缩性较强的软纸，吸湿后会缩水并将有效成分释放。其功能1、补充皮肤的胶原与弹力素等营养成分，使皮肤光滑细腻，恢复弹性。2、收缩毛孔，舒展软纹。3、漂白皮肤，减少色斑。4、补充皮肤水份使皮肤滋润。（3） 非凝性面膜：非凝性面膜包括矿物面膜，果蔬面膜，海藻颗粒面膜，取材广泛，使用方便，操作简捷，但消除面膜时要反复用清水漂洁。其功能1、软化角质果细胞，给角质层补充水份及营养使皮肤滋润。2、增强皮肤张力，舒展细碎皱纹。3、可充分利用纯天然物质，使皮肤透气性强。（4） 从产品的物理性状上可分为，膏状面膜、液状面膜、绢(纸)质面膜、粉状面膏状面膜（非成面膜）：使用效果虽然不错，而且不用调和，敷用也简单，在家庭中有一定的市场。但因制作技术含量低，产品真假难辨，加上卸膜时非常麻烦(要用去离子水洗)，在美容院不太受欢迎，已经逐渐被市场淘汰。（5） 液状面膜（挥发成膜型）：主要成分是聚乙烯醇和羧甲基纤维素钠，靠溶剂的挥发成膜，具有良好的成膜性，前两年曾大行其道，但保湿效果差和用时感觉不舒服，使用者越来越少。（6） 绢（纸）质面膜：是近年市场上出现的新宠，源于日本sK-II。该产品是将精华素或其他有效成分浸透到以特殊材料制成的基质上，敷到所需部位即可。基质可以裁成各种形状，以适应不同部位。绢膜具有使用方便、卫生的特点，其市场份额愈来愈大，但不能深度洁肤的缺陷，又使得该产品的应用受到很大限制。（7） 粉状（自凝成膜型）面膜：可以说是目前市场上最完美的面膜产品，他可以与许多功能性原料、天然提取物等有效成分配伍，达到美容和治疗同步的目的，其本身的海藻多糖，胶原质，AG因子等，就有着强烈的美白效果使用时只要按一定比例加入清水或牛奶，调和后敷到所需部位，几分钟后即可自动凝结成一张带弹性的膜，品质优良的面膜可以完整的揭取下来其良好的保湿性，渗透性，使其他的面膜望尘莫及。在作面膜的过程中，不仅可以起到美白的作用，还可以在揭膜酌同时将毛孔里的污垢带出来，达到深度洁肤的效果，好的面膜揭取后面部几乎没有残留物，受到美容师的极大欢迎。1.5.7面膜的发展趋势（1） 材质升级越来越薄、越来越贴众所周知，贴式面膜精华载体已无纺布为主。无纺布的选择成为能否发挥面膜效果的重要手段。当前，市场上流行的面膜多已30g-70g厚度的混纺无纺布为主。但近年来流行的纯棉无纺布、天丝无纺布，以其更贴肤的完美效果，大大改善了贴式面膜“贴合度”不够的软肋，成为市场面膜新宠。（2） 配方升级 从植物萃取到汉草名方护肤品的技术研发，主要表现在配方中功效添剂的改进，更纯萃、更天然、更安全、更有效是研发人员追求无止境的目标。随着中国经济对世界影响的扩大，中国文化正在被世界更广泛的接纳，中医药文化就是其中之一，在化妆品行业也不例外，甚至于韩国和日本在这一领域的研发更超前。传统中药配方护肤品正在逐步流行，面膜产品也紧随其后。（3） 安全升级 更多天然、更少刺激、护肤接近零负担面膜产品使用越来越广泛，正由原来深层滋养护理品成为日常保养品。由面膜产品能即时补充营养、改善肌肤状况的特点，对于肌肤易敏感的人来说总是或有担心。面膜安全升级也成为面膜流行趋势。面膜配方的安全除了成份尽量使用天然植物萃取成份、活性成份、天然矿物成份等之外，由于面膜精华的基础配方以水为基质，水成份选择也越来越被重视，温泉、矿泉、海泉等成份都已在面膜中广泛应用。更重要的是，面膜产品的无刺激实验是保证产品安全的重要手段，目前，人体血红蛋白刺激实验是全球公认的护肤品无刺激实验主要方法。小身材大智慧，面膜设计趣味变身。面膜的高效护理能力，相信谁都不会否认，但你想敷得不太一样又效果出众，那就快来试试我们为你优选的这几款智慧面膜吧，它们将满足你的所有想象，让你在护肤的亲密接触中享受趣味带来的快感。（4） T+U的美妙组合怎么看都有趣T区油光，U区松弛也能一并解决？对，这个你可没听错，它的神奇之处可就在这儿，组合面膜充分考虑T位、U位不同区域的肌肤需求，上片面膜以T区为中心，既调节T位的油光，紧致毛孔，赋予肌肤水嫩滋润：又增加U位的亮白保湿，面膜提拉面部轮廓，恢复易松弛的U区肌肤弹力，为脸部带来前所未有的惊喜效果。（5）3D分体式设计营养一滴也不落调查显示，颧骨区、鼻唇线及嘴角这三个面部关键区域的肌肤最易松弛，同时对女性外表年龄的影响也最大。所以这款综合素质很高的面膜就派上了用场，针对这三个区域，它突破性地采用了3D式的分体设计，能包裹并紧贴面部轮廓，颈部凹凸位置，连鼻翼，法令纹等细微部分都能充分照顾，让上下两片中的面膜成分一滴不落地完全渗入到肌肤中，用完后你会发现，不仅对松弛有立竿见影的效果，皮肤都特别光滑莹润了。（6） 针对下眼睑的SOS神奇护理如果你既想护理脸部，又急待解决娇嫩的眼部问题，那么这款面膜可是极佳的选择。可别小看这分布于下眼周的两小片面膜，里面含有超多的精纯维A抗衰老精华，可以即刻解决眼部疲劳问题，连纹路都即刻感到平展，果冻感质地的柔胶式设计，让肌肤拥有更加柔滑的触感，就像剥了壳的水煮蛋般嫩滑有光泽。（7） 双耳挂设计苹果脸也能小一圈普通面膜没有拉提设计，无法兼顾下巴部位，而且更易滑落。如果想要迅速改变这种窘境，那就赶紧试试这款提拉效果超赞的神奇面膜吧，独特的双耳挂设计，可以将脸部边缘及下巴完全包覆，瞬间就会感到提拉的效果，脸也感觉小了一圈，长期使用会有提升脸部轮廓，瘦脸以及呵护颈部细纹的作用。1.5.8红酒面膜近年来红酒面膜以其神奇的美容护肤效果被广大女性推崇，各大品牌也纷纷推出了红酒面膜产品。葡萄带有天然的红色色泽，其含有丰富的抗氧化多酚，能够增强肌肤抵抗力，并促进肌肤血液循环，使肌肤看上去白皙红润5。红酒多酚对皮肤的好处有：对抗活性氧放入侵犯，维持细胞膜及皮肤构造的完整；抑制原蛋白分解酶及其他各类分解酶，抗肌肤老化；降低皮肤受刺激所引起的发炎反应；抑制酪氨酸酶活性，减少黑色素生成，让肌肤美白；维持血管张力，防止微血管曲张，促进脂肪与糖类的代谢，消除橘皮组织现象3。1.6立题依据和意义啤酒糟是啤酒工业的主要副产品，是以大麦为原料，经发酵提取籽实中可溶性碳水化合物后的残渣。每生产1t啤酒大约产生1/4t的啤酒糟，我国啤酒糟年产量已达1000多万t，并且还在不断增加。我国是世界第二大啤酒生产国，有近千家啤酒厂，年产啤酒50M他，其全部副产物约可达9.2Mt；通常这些副产物如废酵母等均伴以大量的废水排出，如处理利用不当，将会造成严重的环境污染4，5。近年来，我国啤酒工业迅速发展，年产啤酒超过3500万t，产生了约1800万t的啤酒糟，并且还在不断增加。啤酒糟中固形物含量一般为15-20，水分含量高，极易腐败变质，给处理和综合利用带来很大问题。长期以来，大多数厂家主要是将湿糟作为粗饲料直接低价出售，其收益甚微；有少数厂家则是将湿糟直接排放，不仅造成严重的环境污染，还导致资源的浪费。随着啤酒规模的日益增大发酵废渣的处理已成为啤酒工业的重大课题，在发达国家由于受环境保护法的严格制约，啤酒糟的利用得到了高度重视。我国除少数厂家将其烘干作饲料外，大部分厂家以低价直接出售给农户作饲料，这既是对蛋白质资源的极大浪费，又严重地污染了环境，所以啤酒糟的综合利用是急待开发的顿域。目前，国内外与啤酒糟相关的文章只有一少部分是关于啤酒糟中蛋白类物质的研究。根据宗绪岩（啤酒糟蛋白抗氧化肽的酶法制备及其体外抗氧化活力）可知，啤酒糟蛋白酶解150min时具有最强的还原力1。本论文根据这一结论，研制啤酒糟蛋白面膜，将啤酒糟蛋白酶解150min酶解150min后得到啤酒糟多肽，与卵磷脂、VE、甘油、凡士林、去离子水以适当的比例调配成组织形态均匀的膏体。检测其卫生指标和抗氧化能力。第二章 材料与方法2.1实验原材料和主要试剂2.1.1 实验原材料啤酒糟：取自月华啤酒厂主要试剂试剂名称 纯度 生产厂家中性蛋白酶AR北京奥博星生物技术有限责任公司卵磷脂BR成都市科龙化工试剂厂甘油AR成都市科龙化工试剂厂维生素EAR成都市科龙化工试剂厂维生素E药品厦门星鲨制药有限公司凡士林AR成都市科龙化工试剂厂氢氧化钠CP郑州化学试剂二厂磷酸氢二钠AR成都市科龙化工试剂厂磷酸二氢钠 AR 成都市科龙化工试剂厂抗坏血酸AR成都市科龙化工试剂厂铁氰化钾 AR成都市科龙化工试剂厂三氯乙酸AR成都市科龙化工试剂厂氯化铁AR成都市科龙化工试剂厂磷酸三钠AR成都市科龙化工试剂厂硫酸AR成都市科龙化工试剂厂钼酸铵AR金堆城钼业科技有限责任公司钼化学事业部亮绿AR成都市科龙化工试剂厂硫酸亚铁AR成都市科龙化工试剂厂双氧水AR成都市科龙化工试剂厂2.2主要仪器设备仪器名称型号生产厂家多功能磨浆机JL-100G重庆良明机械厂离心机DL-5-B上海安亭科学仪器厂恒温水浴箱DZKW-4北京中兴伟业仪器有限公司电子天平单人单面净化工作台SW-CJ-1FD苏州净化设备有限公司生化培养箱LRH-250上海齐欣科学有限公司全自动高压灭菌锅MLS-3020紫外分光光度计仪UV-2000尤尼柯（上海）仪器有限公司2.3啤酒糟蛋白面膜的制作2.3.1啤酒糟蛋白提取的工艺流程以及制取啤酒糟多肽的方法2.3.1.1啤酒糟蛋白提取工艺啤酒糟预处理湿磨筛分液浆干燥粉碎保存备用离心上清液沉淀废渣图2-1 啤酒糟蛋白提取工艺流程图Fig. 2-1 Flow chart of extraction brewer's spent grains protein2.3.1.2啤酒糟多肽制取方法用中性蛋白酶将啤酒糟蛋白酶解150min，得到啤酒糟多肽。2.3.2啤酒糟面膜的配制2.3.2.1啤酒糟面膜的配方经试验，表2-1中的配方为最优配方：表2-1 面膜的最优配方Table2-1 The best formula of the mask水卵磷脂甘油啤酒糟多肽凡士林VE2.00mL0.0200g2.4754g5.000g0.3500g一粒注：一粒VE胶丸含0.1g。2.3.2.2啤酒糟面膜的配制方法（1） 将称量好的卵磷脂置于烧杯中，用移液管加去离子水2.00mL，放置在60水浴箱里，用玻棒搅拌至完全溶解。（2） 加入VE，搅拌至完全溶解。（3） 加入称量好的凡士林、甘油，搅拌至均匀状态。（4） 将啤酒糟多肽加入（3）所得的组织中，搅拌均匀。（5） 搅拌均匀后，将所得面膜放在室温下冷却至室温，保存备用。2.4啤酒糟面膜的各项指标检测2.4.1菌落总数的检测2.4.1.1检测程序菌落总数的检验程序见图2-2。检 样 1 g(mL)样品+99 mL 稀释液，均质 10倍系列稀释 选择2个3个适宜稀释度的样品匀液，各取1 mL分别加入无菌培养皿内 每皿中加入15 mL20 mL 平板计数琼脂培养基，混匀 培 养 计数各平板菌落数 计算菌落总数 报告图 2-2 菌落总数的检验程序 Fig. 2-2 The testing procedure of the total number of colony2.4.1.2操作步骤1、无菌水培养基的制备将99mL0.85%Nacl溶液装入锥形瓶加棉塞，包扎好，与培养基仪器放入灭菌锅12120min。2、样品的稀释 （1）制备面膜悬液 称取 1 g 样品置盛有 99 mL 无菌水的锥形瓶内，振荡510min，是面膜充分打散，即成为10-2的面膜悬液。（2）稀释 用无菌移液管吸 10-2的样品悬液1 mL ，吹入 9 mL 无菌水中即为10-3稀释液，如此重复，可依次制成10-310-7的稀释液。注意：操作时管尖不能接触液面，每一个稀释度换一支试管，每次吸入样品液后，要将移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的高度要高于前一次，以减少稀释中的误差。3、倒平板，接种（1） 及时将 15 mL20 mL 冷却至 46 的平板计数琼脂培养基（可放置于 46 ±1 恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。（2） 分别取10-310-7的稀释液各0.2mL，分别接入培养基平板中，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取 1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 4、培养 （1）待琼脂凝固后，将平板翻转，36±1培养48 h±2 h。（2）菌落计数:可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。 （3）选取菌落数在 30 CFU300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30 CFU的平板记录具体菌落数，大于 300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 （4） 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。 （5）当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。2.4.1.3菌落总数计算方法（1）若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每 g（mL）样品中菌落总数结果。 （2）若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算： （1） 式中： N样品中菌落数； C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； n1第一稀释度（低稀释倍数）平板个数； n2第二稀释度（高稀释倍数）平板个数； d稀释因子（第一稀释度）2.4.2还原力的检测参照Nichole等所用方法略有改动，进行还原力的测定。在2.5mLpH6.6磷酸盐缓冲液中加入啤酒糟蛋白面膜1g、1%铁氰化钾2.5mL，混匀后50恒温20min，再加2.5mL10%三氯乙酸，然后3000r/min离心分离10min，取上层清液，稀释10倍和0.1%氯化铁0.5mL，在700nm测定吸光值。以维生素C作为标准对照，制作标准曲线，样品的抗氧化能力表现为等值的维生素C6。2.4.3清除羟基自由基能力的检测采用 Smirnoff等的方法进行测定。取2mL4.5mmol/LFeSO4，加2mL4.5 mmolL水杨酸-乙醇溶液，再加不同浓度的待测溶液0.2mL，最后加入2mL4.4 mmolLH2O2启动整个反应。37水浴中反应0.5h，以蒸馏水作参比，在510nm下测定吸光值。考虑到待测溶液本身的吸光值不同，以蒸馏水代替H202作为待测溶液的本底吸收值。并与抗坏血酸的清除羟基自由基能力进行比较。清除率()=A0-(AX-AXo)Ao×l00%，其中A0：2mLFeSO4 + 2 mL水杨酸-乙醇溶液+0.2 mL 蒸馏水+2mL H2O2，AX：2mLFeSO4+2mL杨酸-乙醇溶液+0.2mL不同浓度样品+2 mLH2 O2 ；AX0：2mLFeSO4+2mL水杨酸-乙醇溶液+0.2mL不同浓度样品+2mL蒸馏水7。第三章 结果与讨论3.1啤酒糟面膜的配制综合以上实验，微粒不溶于面膜各物质，采用乙醇作为溶剂、超声波促溶的方式溶解性仍不好，在药店购买药品级的维生素E胶丸进行试验。3.2菌落数的检测检测结果如表3-1所示表31 检测结果Table3-1 Test results检验指标标准要求检测结果外观膏体细腻，均匀一致膏体细腻，均匀一致pH4.554.6细菌总数CFU/g100010003.3抗氧化能力的检测3.3.1还原力的测定还原力是表征物质抗氧化能力的一个重要指标。具有还原力的物质能够同铁离子/铁氰化钾复合物反应，并还原成能够用分光光度计进行测量的亚铁形式（Yi等，2008）。图3-1啤酒糟面膜还原能力Fig. 3-1 Reducing power of the brewer's spent grains mask分别取配置好的啤酒糟面膜样品和VC用去离子水分别配置成