显微镜的使用以及细胞、细胞器的观察.ppt.ppt
医学细胞生物学实验,第一次实验内容,实验一 显微镜的结构及使用方法实验二 动物细胞形态结构观察实验三 细胞器切片观察,实验一 显微镜的结构及使用方法,普通光学显微镜结构机械部分光学部分,机械部分主要结构,镜座、镜柱粗调节螺旋和细调节螺旋载物台、推进器和玻片夹物镜转换器,光学部分主要构件,光学部分包括照明系统和成像系统,光学部分主要构件,物镜 低倍镜（1 6，常用的4、10）高倍镜（25 63，常用的40）油 镜（90、95、100）目镜（5、6、8、10、12、15）物镜侧面符号的含义10/0.30 表示放大10倍，数值口径为0.3040/0.65 表示放大40倍，数值口径为0.65100/1.25 oil 表示放大100倍，数值口径为1.25，为油镜160/0.17 表示镜筒长度和所需盖玻片的厚度（mm）WD 表示工作距离,不同物镜的数值孔径与工作距离（10倍目镜）,光学显微镜成像原理,光学显微镜是利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像的。AB和眼睛的距离为显微镜的明视距离，标本AB的向经过物镜（L1）后到AB处称谓一个放大倒立的实像，F1为L1的后焦点，当光线传到目镜（L2）时，在AB处AB被放大成一个直立的虚像，然后传递到视网膜上，标本AB就被放大了。人眼看到的是AB被放大后的虚像，其与原样品的方向相反。,数值孔径（NA，镜口率）：光线投射到物镜上的最大开口角度一半的正弦乘上标本与物镜间介质的折射率的乘积。NA=nsin/2 n为介质的折射率，为镜口角。分辨率：能分辨被检物体细微结构最小间隔的能力。D=0.61/NA 为波长。数值孔径越高，分辨率越高。放大率：最终成像大小与原物体大小的比值。总放大倍数物镜的放大倍数目镜的放大倍数,物镜的镜口角=AOB,光学显微镜成像原理,其它光学显微镜,倒置显微镜(invertcd m1Lfoscope)是普通光学显微镜的一个类型，倒置显微镜有几个特点不同于普通生物显微镜。1）透射光倒置显微镜的光源和聚光器位于载物台的上方，照明光源自上方向下照射；2）物镜安装在载物台的下方，向上对焦；3）物镜、聚光镜以及其他光学具组均适用于长焦距观察；4）在医学、生物学领域中适合于观察培养瓶中贴壁生长的细胞或浮游于培养液中的细胞。,XDS倒置生物显微镜,其它光学显微镜,体视显微镜又称实体显微镜。它在观察物体时能产生正立的三维空间影像。立体感强，成像清晰和宽阔，又具有长工作距离，并可根据观察物的特点选用不同的反射和透射光照明，是适用范围非常广泛的常规显镜。不仅可作生物解，作观察分析，由于本显微镜具有较高的分辨率及大视场范围的清晰，因此还可作电子工业和精密机械工业零件装配和检验，农业上的种子检查等。,MODELZ45E体视显微镜,其它光学显微镜,荧光显微镜是荧光显微术的基本装置。荧光显微术是利用一定波长的光（通常是波长短的紫外光和蓝紫光）照射被检样品，激发荧光物质发出可见的荧光。通过物镜和目镜的成像、放大，以供检视和拍摄。荧光显微镜具特殊光源，提供足够强度和波长的激发光，诱发荧光物质发出荧光。视场中所见的像，主要是样品的荧光映像。根据光线对标本照射方式不同，荧光显微镜可分为透射式和落射式两种。,OLYMPUS1X51荧光显微镜,暗视场显微镜,暗视场显微镜又叫暗视野显微镜。它与普通的显微镜的主要区别是照明方式不同。它用强而窄的斜射光束照射标本，而又不让光束进入物镜。在没有光进入物镜时，视场是黑暗的，故叫暗视场显微镜。暗视场显微镜能够观察到 0.004 m以上的微粒存在。普通显微镜看不见的微粒，它可以看见。但它只能看到物体的外表轮廓和运动状态，而不能辨认其内部结构。,相差显微镜,相差显微镜是一种将光线通过透明标本细节时所产生的光程差（即相位差）转化为光强差的特种显微镜。相差显微镜与普通光学显微镜的基本结构是相同的，所不同的是它具有四部分特殊结构：即环状光阑、相板、合轴调节望远镜及绿色滤光片。,多媒体互动教学系统的使用,学生端的功能 学生端主要具备菜单显示、电子举手、作业提交、学生交流、屏幕录制、屏幕回放、图象采集、系统设置八大功能。,多媒体互动教学系统的使用,一、菜单显示 菜单显示功能主要列出一些多媒体互动教学系统其他软件的快捷启动方式，可以让学生在使用本互动系统是同时可以快捷的打开其他要用到的软件。二、电子举手 当学生有问题要向教师反映时，可以点击“电子举手”。三、作业提交 学生通过作业提交功能可以向教师提交作业，作业提交至教师端由教师设置的目录下。点击“作业提交”会出现一个选择提交文件的窗口。在上面点击“浏览”选择要提交的作业后再点击“确认”即可提交。,多媒体互动教学系统的使用,四、学生交流 学生交流功能用于学生之间的交流。点击“学生交流”会出现一个下拉窗口，窗口中列出了其他所有学生端的IP地址，选择想要观摩的学生端的IP地址后点击“确定”，此时被请求方会收到一个观摩请求的窗口，窗口中显示请求方的 IP地址及窗口关闭倒计时秒数，被请求方同意后即可观看到其屏幕画面了。五、图象采集 在显微镜下找到最佳影像后，点击“图象采集”即可以启动此学生端的采集程序，从而可以采集图象。,光学显微镜的使用规程,一、实验时要把显微镜放在座前桌面上稍偏左的位置，镜座应距桌沿 5 cm左右。二、打开光源开关，调节光强到合适大小。三、转动物镜转换器，使低倍镜头正对载物台上的通光孔。先把镜头调节至距载物台12 cm左右处，然后用左眼注视目镜内，接着调节聚光器的高度，把孔径光阑调至最大，使光线通过聚光器入射到镜筒内，这时视野内呈明亮的状态。四、将所要观察的玻片放在载物台上，使玻片中被观察的部分位于通光孔的正中央，然后用标本夹夹好载玻片。,光学显微镜的使用规程,五、先用低倍镜观察（物镜4X、10X、目镜10 x）。观察之前，先转动粗动调焦手轮，使载物台上升，物镜逐渐接近玻片。需要注意，不能使物镜触及玻片，以防镜头将玻片压碎。然后，左眼注视目镜内，同时右眼不要闭合（要养成睁开双眼用显微镜进行观察的习惯，以便在观察的同时能用右眼看着绘图），并转动粗动调焦手轮，使载物台慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像。六、如果在视野内看到的物像不符合实验要求（物像偏离视野），可慢慢调节载物台移动手柄。调节时应注意玻片移动的方向与视野中看到的物像移动的方向正好相反。如果物像不甚清晰，可以调节微动调焦手轮，直至物像清晰为止。,光学显微镜的使用规程,七、如果进一步使用高倍物镜观察，应在转换高倍物镜之前，把物像中需要放大观察的部分移至视野中央（将低倍物镜转换成高倍物镜观察时，视野中的物像范围缩小了很多）。八、在转换高倍物镜并且看清物像之后，可以根据需要调节孔径光阑的大小或聚光器的高低，使光线符合要求（一般将低倍物镜换成高倍物镜观察时，视野要稍变暗一些，所以需要调节光线强弱）。九、观察完毕，应先将物镜镜头从通光孔处移开，然后将孔径光阑调至最大，再将载物台缓缓落下，并检查零件有无损伤（特别要注意检查物镜是否沾水沾油，如沾了水或油要用镜头纸擦净），检查处理完毕后即可装箱。,油镜的使用,100物镜是油浸物镜。使用前必需在镜头与盖玻片间加浸油。油镜的透镜很小，光线通过玻片与油镜头之间的空气时，因介质密度不同，发生折射或全反射，使射入透镜的光线减少，物象显现不清。若在油镜与载玻片之间加入和玻璃折射率（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515），则可减少光线折射，使进入透镜的光线增多，视野亮度增强，提高分辨率，使物象明亮清晰。在油镜观察结束后，切记将镜头和其他沾有油污的部件清擦净。,光学显微镜的维护,一、必须熟练掌握并严格执行使用规程。二、取送显微镜时一定要一手握住弯臂，另一手托住底座。显微镜不能倾斜，以免目镜从镜筒上端滑出。取送显微镜时要轻拿轻放。三、观察时，不能随便移动显微镜的位置。四、凡是显微镜的光学部分，只能用特殊的擦镜头纸擦拭，不能乱用他物擦拭，更不能用手指触摸透镜，以免汗液玷污透镜。五、保持显微镜的干燥、清洁，避免灰尘、水及化学试剂的玷污。六、转换物镜镜头时，不要搬动物镜镜头，只能转动转换器。,光学显微镜的维护,七、切勿随意转动调焦手轮。使用微动调焦旋钮时，用力要轻，转动要慢，转不动时不要硬转。八、不得任意拆卸显微镜上的零件，严禁随意拆卸物镜镜头，以免损伤转换器螺口，或螺口松动后使低高倍物镜转换时不齐焦。九、使用高倍物镜时，勿用粗动调焦手轮调节焦距，以免移动距离过大，损伤物镜和玻片。十、用毕送还前，必须检查物镜镜头上是否沾有水或试剂，如有则要擦拭干净，并且要把载物台擦拭干净。,显微镜的使用练习,羊毛交叉标本2.字玻片,实验二 动物细胞形态结构观察,鸡血细胞动物神经细胞动物平滑肌细胞,鸡血细胞,重点在高倍镜下和油镜下观察红细胞、嗜中性白细胞和血栓细胞（血小板）的形态结构特点。红细胞为卵圆形细胞，有胞核，呈椭圆形，内有染色质块，胞质染成淡红色。嗜中性白细胞由于颗粒具有多种嗜色性，故又称为异嗜性粒细胞，细胞较大，胞质内含棒状或纺锤形的红色颗粒。胞质色淡，胞核分叶情况因成熟程度而有不同，有的不分叶，有的分叶，染成淡紫色。血栓细胞是鸡血液内最小的细胞，成纺锤形。两端钝圆，常集聚成群，胞质染成浅蓝色，核呈卵圆形。注意血栓细胞与红细胞的区别，主要是体积较小，核较大，染成玫瑰紫色。,鸡血细胞,鸡血细胞低倍镜下观察,鸡血细胞高倍镜下观察,鸡血细胞油镜下观察,动物神经细胞脊髓涂片,先用低倍镜观察,再用高倍镜和油镜观察脊髓涂片中的神经元（即神经细胞），可找到染色深且具有多个突起的脊髓前角运动神经元。在其胞体内有染色较浅的圆形的细胞核，核的中央有一个染成深色的核仁。,神经细胞,动物平滑肌细胞分离片,先用低倍镜再用高倍镜和油镜下观察平滑肌分离片，可见染成紫红色呈纺锤形的肌细胞，细胞核为椭圆形，位于细胞的中央，着色很深，在细胞质中有淡红的肌原纤维。略旋动细调焦螺旋，仔细观察。,平滑肌与组织块,实验三 细胞器切片观察,1.线粒体的观察 线粒体有双层膜结构，蛋白、磷脂含量很高，有大量羧基和磷酸基等阴离子基团，含阳离子的铁苏木精易与其结合，使线粒体显示兰色反应。,观察方法,1）低倍镜观察：可见许多被染成深兰色的细胞，选择颜色清晰，密集程度较低的区域；2）转换高倍镜：细胞核为12 圆形的不着色的区域（有深兰色的核仁），核周围分布有许多深兰色颗粒或杆状小体，即线粒体。,线粒体,油镜下观察到的线粒体（深蓝色颗粒状或杆状）,线粒体（红色）,2.高尔基复合体的观察 高尔基复合体具有还原能力，与硝酸银作用后，使硝酸银还原，并呈现棕黑色沉淀反应。因而可显示高尔基复合体的形态和位置。,观察方法,1）低倍镜观察：寻找圆形或椭圆形的被染成黄色或淡黄色的细胞；2）转换高倍镜：中央透亮区为核所在位置，核周围棕褐色扭曲呈线状、颗粒状结构即为高尔基复合体。,棕褐色或黑褐色、扭曲线状或颗粒状（低倍镜）,高尔基体,棕褐色或黑褐色、扭曲线状或颗粒状（高倍镜）,高尔基体（绿色）,细胞生物学实验绘图方法与要求,一、在仔细观察的基础上，选择典型结构进行描绘，要求真实、准确(注意各部结构的比例关系)。二、用铅笔绘图，线条要明确清晰，图的深浅明暗一律以点的疏密来表示，点要圆而一致，不得涂暗影或进行其它美术加工。三、各部结构名称要在一侧引直线注明。各引线要平行不得交叉。四、每幅图的大小、位置在纸面上必须安排得当并注意纸面的整洁。,作 业,一、思考题 为什么使用高倍镜或油镜必须从低倍镜到高倍镜或从低倍镜到油镜的顺序进行?如果高倍镜下找不到物像，应从哪些方面找原因，如何解决?二、绘图 1.绘制在显微镜下观察到的鸡血红细胞（100）、平滑肌细胞图（100）、神经细胞（40）的形态结构图并加以标注。2.绘制在显微镜下观察到的线粒体、高尔基体的形态结构图并加以标注。,
