无菌和环氧乙烷残留量分析检测方法.ppt

无菌及环氧乙烷残留量检测第一部分,提纲,1.常用灭菌方法,3.微生物检验基础知识,4.医疗器械无菌检查,2.环氧乙烷残留量,常用的灭菌方法,灭菌的方法：物理方法干热灭菌湿热灭菌射线灭菌滤过灭菌化学方法气体灭菌药液灭菌,干热灭菌法,干热灭菌法可用于能耐受较高温度，却不宜被蒸汽穿透、或者易被湿热破坏的物品的灭菌。分类：火焰灭菌法：是将待灭菌物品直接置于火焰中烧灼进行灭菌的方法，灭菌迅速、可靠、简便。适用于：耐火焰材质的物品如金属、玻璃用具或容器及瓷器等的灭菌 干热空气灭菌法：是将待灭菌物品置于高温干热空气中灭菌的方法，需要长时间高热环境才能达到灭菌效果。适用于：耐高温材质的物品（玻璃、金属制品等）及耐高温、不允许湿气穿透的油脂类和粉末化学药品。干热空气灭菌常用：135145灭菌35h；160170灭菌24h；180200灭菌0.51h。,湿热灭菌法,湿热灭菌法是通过热蒸汽或沸水使细菌蛋白质变性而杀灭微生物的方法。分类:煮沸灭菌流通蒸汽灭菌热压灭菌适用于：耐高温、耐高压蒸气的物品。金属或玻璃容器及用具、瓷器、橡胶塞、膜滤器等均能采用此法。常用条件（温度、蒸气表压与时间）为：115（67kPa），30min；121（97kPa），20min；126（139 kPa），15min。影响湿热灭菌的因素有：细菌的种类与数量器械（被灭菌物）性质灭菌温度、压力与时间,射线灭菌法,常用的有：辐射灭菌法：原理是射线可直接破坏细菌DNA，导致微生物死亡。辐射灭菌的特点是不升高灭菌产品的温度，穿透性强。适用于：羊肠线、高分子材料等医疗器械的灭菌。紫外线灭菌法：是利用紫外线作用于菌体核酸蛋白促使其变性，同时空气受紫外线照射后产生微量臭氧，从而起共同杀菌作用。紫外光波长190-350nm之间，其中波长为260nm左右，对微生物的生物效应最大。适用于：无菌室、某些工作区的空气灭菌、物体表面灭菌。微波灭菌法：采用频率300MHz300kMHz的电磁波照射产生热能杀灭微生物的方法。,紫外线照射灭菌时注意的问题,紫外线的杀菌力，随使用时间增加而减退，一般使用时间达到额定时间70时应更换紫外线灯管，以保证杀菌效果。紫外线灯平均寿命一般为2000h。紫外线的杀菌作用随菌种不同而不同，杀霉菌的照射量要比杀杆菌大40 50倍。紫外线照射通常按相对湿度为60的基础设计，室内湿度增加时，照射量应相应增加。紫外线灭菌效果与照射的时间长短有关，这需要通过验证来确定照射时间。紫外照射灯的安装形式及高度，应根据实际情况，参考使用说明决定,滤过除菌法,滤过除菌法：指用滤过方法除去活的或死的微生物的方法，是一种机械除菌方法，供除菌用的滤器，要求能有效地从溶液中除净微生物，溶液能顺畅地通过，容易清洗，操作简便。适用于：对热不稳定的药物溶液、气体、水等的除菌。常用除菌滤器（应在无菌操条件下进行）：0.22m或0.3m的微孔滤膜G6垂熔玻璃滤器,化学灭菌法,气体灭菌法：指用化学药品的气体或蒸气杀灭微生物的方法。常用气态杀菌剂：为环氧乙烷、甲醛、丙二醇、臭氧、乳酸、过氧 乙酸等。药液灭菌法:药液灭菌法利用药液杀灭微生物的方法。常用的有0.1%0.2%苯扎溴铵溶液，75%乙醇、2%煤酚皂溶液、1%聚维 酮碘溶液等。,小结,高压蒸汽灭菌:工作服、口罩、稀释液等，置高压杀菌锅内，一般采用121灭菌半小时,不同的培养基有不同的要求,应分别处理。火焰灭菌：接种针、接种环等可直接火焰灭菌。高温干燥灭菌：各种玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160灭菌2小时。一般消毒:无菌室内的凳、工作台、试管架、天平、待检物容器或包装均无法进行灭菌，必须用其他方法进行消毒处理，可采用适当的消毒液擦拭消毒，工作人员的手也用此法进行消毒。空气的消毒：开启紫外灯照射3060分钟即可。,提纲,1.常用灭菌方法,3.微生物检验基础知识,4.医疗器械无菌检查,2.环氧乙烷残留量,环氧乙烷灭菌相关知识,环氧乙烷灭菌利用环氧乙烷在常温下为气态，蒸汽压较大，对灭菌物品的穿透性强，可以穿透微孔而达到物品的深部，环氧乙烷是一种非常活泼的灭菌剂，杀菌能力强且广泛，有很强的穿透能力，适合于包装物品的灭菌，对物品损坏轻微，且费用较低。现大部分的医疗器械生产企业采用此种方法灭菌。环氧乙烷能够高效地对医疗产品进行灭菌，在杀灭微生物的同时医疗产品上的环氧乙烷残留也会对使用者和患者的身体带来一定的毒害。其毒性包括两个方面：一为环氧乙烷本身的毒性。通过呼吸器官吸入体内刺激呼吸道，引起恶心、呕吐、头昏、头痛、嗜睡等症状。严重者可引起肺水肿；通过皮肤、粘膜接触后，引起红肿、水泡及血泡，严重者可出现局部皮肤烧伤及粘膜组织灼伤，造成毛发脱落；超量进入人体血液内，可致红细胞溶解，补体灭活和凝血酶破坏引起全身性溶血。二是灭菌后生成物的毒性。环氧乙烷与氯元素接触产生毒性很大的氯醇，与水接触形成乙二醇，对环境和种植物的生产起到很大的破坏作用。,环氧乙烷灭菌相关知识,医疗器械产品如采用环氧乙烷灭菌，应由有资格的人员负责设备维护灭菌的确认和常规控制及产品放行工作。应不断提高各类人员对环氧乙烷残留量造成健康风险的意识，首先经环氧乙烷灭菌的医疗器械必须按规定进行解析，即纸塑包装灭菌后解析7天，全塑包装灭菌后解析14天，并经检测确定器械上的环氧乙烷残留量小于10g/g后出厂；其次经环氧乙烷灭菌的医疗器械应采用透气性好，有助于消除残留环氧乙烷的纸塑包装，以最大限度地降低环氧乙烷残留，降低器械使用的风险；第三体积越大，环氧乙烷含量绝对就越高；对于医用敷料、无纺布、合成医用乳胶手套等对环氧乙烷气体有很强的吸附性，吸附在这类产品上的残留量很难彻底解析，所以对此类产品，不应选用环氧乙烷灭菌。,环氧乙烷残留量测定方法,气相色谱法比色分析法原理：环氧乙烷在酸性条件下水解成乙二醇，乙二醇经高碘酸氧化生成甲醛，甲醛与品红-亚硫酸试液反应产生紫红色化合物，通过比色法分析可求得环氧乙烷含量。所用试剂：高碘酸，硫代硫酸钠，无水亚硫酸钠，碱性品红，盐酸，乙二醇等浸提方法：分模拟使用浸提法和极限浸提法。模拟使用浸提法：用0.1mol/L盐酸作为浸提介质,整个或部分与人体接触的器械在37(人体温度)浸提,不直接与人体接触的器械在25(室温)浸提.浸提时间应考虑在推荐或预期使用最为严格的时间条件下进行,但不短于1h.浸提表面为器械与药液或血液接触的表面.极限浸提法:取样品上有代表性的部位,截为5mm长碎块,称取2.0g置于容器中,加0.1mol/L盐酸10ml,室温放置1h,作为供试液;对于容器类样品,可加0.1mol/L盐酸至公称容量,在371下恒温1h.,环氧乙烷残留量,试验步骤 绘制标准曲线：取5支纳氏比色管，分别精确加入0.1mol/L盐酸2ml,再精确加入0.5m、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml乙二醇标准溶液。另取一支纳氏比色管，精确加入0.1mol/L盐酸2ml作为空白对照。于上述各管中分别加入高碘酸溶液（5g/L)0.4ml，摇匀，放1h，然后分别滴加硫代硫酸钠溶液（10g/L）至出现的黄色恰好消失。再分别加入品红-亚硫酸试液0.2ml，用蒸馏水稀释到10ml，摇匀，35 37 条件下放置1h,于560nm波长处以空白液作参比，测定吸光度。绘制吸光度-体积标准曲线。试验方法：精确量取供试液2.0ml于纳氏比色管中，按上面的步骤操作，以测得的吸光度从标准曲线上查得试液相应的体积。,、,提纲,1.常用灭菌方法,3.微生物检验基础知识,4.医疗器械无菌检查,2.环氧乙烷残留量,微生物检验基础知识,无菌技术：是指在微生物试验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施，其中包括无菌环境设施、无菌试验器材以及无菌操作。无菌环境设施 无菌室的使用与管理要求超净工作台的使用与管理要求生物安全柜无菌试验器材无菌操作：概念：是指在无菌环境条件下，在对无菌制品或无菌器械进行检验的过程中，能防止微生物污染与干扰的一种常规操作方法。注意事项。,提纲,1.常用灭菌方法,2.环氧乙烷残留量,4.医疗器械无菌检查,3.微生物检验基础知识,医疗器械无菌检查引用标准,中华人民共和国药典2005版/医用输液输血注射器具检验方法第部分：生物学试验方法,无菌检查法的定义,中华人民共和国药典2005版：无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品，医疗器具，原料，辅料及其他品种是否无菌的一种方法/：本试验系将医疗器械或其浸提液接种于培养基内，以检验供试品是否有细菌和真菌污染,无菌检查方式,直接接种法薄膜过滤法,主要设备,超净工作台恒温培养箱恒温水浴箱压力蒸汽灭菌器电热干燥箱光学显微镜,主要器具,试管及试管架酒精灯75乙醇棉灭菌刻度吸管(1ml)灭菌平皿（9cm）锥形瓶三角烧瓶灭菌剪刀、镊子等,主要培养基,流体硫乙醇酸盐培养基改良马丁培养基营养琼脂培养基,稀释液、冲洗液及其制备方法,无菌氯化钠溶液：质量浓度为9g/L的无菌氯化钠溶液 蛋白胨水溶液（0.1）制备方法：取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值至7.10.2，分装，灭菌。pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液制备方法：取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌,培养基要求,用于培养需（厌）气菌和真菌的培养基的制备、培养基灵敏度检查及其他各项要求应符合中国药典（二部）附录中无菌检查法的规定。培养基可按药典的处方制备，也可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。制备后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在225、避光的环境。培养基若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用;若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。,培养基,灵敏度试验的菌种,金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌生孢梭菌白色念珠菌黑曲霉:中国医学细菌保藏管理中心,器具灭菌,与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，通常置压力蒸气灭菌器内12130min，或置电热干燥箱内1602h。,无菌室菌落数要求,无菌室操作台或超净工作台局部应符合洁净度100级单向流空气区域要求。无菌室在消毒处理完毕后，应检查空气中的菌落数。方法：取直径约90mm培养皿，无菌操作注入融化的营养琼脂培养基约20mL，在3035培养48h证明无菌后，取3只培养皿在无菌室操作台或超净工作台平均位置打开上盖，暴露30min后盖好，置3035培养48h后取出检查，3只双碟上生长的菌落数平均不得超过1个.无菌试验过程中应检查空气中的菌落数，方法同上。在试验开始进行时打开平皿盖，至试验结束盖好照上法培养，应符合上述要求。,阳性对照,应根据供试品特性选择阳性对照菌：无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希氏菌为对照菌；抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。阳性对照试验的菌液制备同培养基灵敏度检查（大肠埃希氏的菌液制备同培养基的灵敏度检查中的金黄色葡萄球菌）加菌量小于100cfu，供试品用量同供试品无菌检查每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养4872小时应生长良好。,供试品数量,同一批号至少3个11个单位供试品。批出厂产品最少检验数量：个：或个（取较大者）：或件（取较少者）,上市抽验样品（液体制剂）的最少检验量,上市抽验样品（固体制剂）的最少检验量,M50mg 全量 2050mgM300mg 半量 10300mgM5g 150mg 10M5g 500mg 10外科用敷料棉花及纱布取100mg或1cm3cm 10缝合线、一次性医用材料整个材料 20带导管的一次性医疗器具（如输液袋）10其他医疗器具整个器具（切碎或拆散开）20,备注,每种培养基各接种10支供试品。如果医用器械体积过大，培养基用量可在2000ml以上，将其完全浸没。,供试液制备及接种,制备及接种优先采用将供试品或其有代表性的各部分直接投放入培养基内培养。如供试品不适宜直接投放，可按下列方法制备供试液，应使介质充分洗提供试品的浸提表面。管类器具：按管内表面积每10cm2流过管内腔1mL浸提介质，流量约为10ml/min;容器类器具：容器内已装有液体的或直接抽取容器内液体为供试液;空容器按容器内表面积每10cm2加入浸提介质1ml，振摇数次。实体类器具：实体类器具按表面积每10cm2加入加入浸提介质1ml，振摇数次。供试液制备应按无菌操作法进行，在制备后2h内使用。,接种后的培养基,培养基装量,直接接种法即每支供试品按规定量分别接种到各含硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基的容器中。除另有规定外，每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的10，同时，硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml，改良马丁培养基每管装量不少于10ml。每种培养基接种的管数同供试品的检验数量。,培养及观察,上述含培养基的容器按规定的温度培养14天。培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。如在加入供试品后、或在培养过程中培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或划线接种于斜面培养基上，细菌培养2天，真菌培养3天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊或斜面是否有菌生长;或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。,结果判断,若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定;若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。,有下列至少一个条件时，试验结果无效,无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求;回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素;阴性对照管有菌生长;供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。试验若经确认无效，应重试。重试时，重新取同量供试品，依法重试，若无菌生长，判供试品符合规定;若有菌生长，判供试品不符合规定。,谢 谢！,环氧乙烷残留量检测第二部分,环氧乙烷的综述,环氧乙烷（EO）为一种最简单的环醚。低温时为无色易流动液体，沸点10.4，在该温度以上为无色气体。EO液体在室温下易挥发，有醚味。,环氧乙烷对人体的危害（1）急、慢性毒性（2）三致作用及生殖毒性（3）急性中毒与局部刺激（4）神经系统损害与慢性毒性（5）致癌作用（6）生殖毒性,环氧乙烷的综述,医疗器械环氧乙烷的接触量限度,短期接触（24h；平均日剂量 20mg）长期接触（30d，24h；平均日剂量 2mg，此外最大剂量：前24h 20mg，前30d 60mg）持久接触（30d；平均日剂量0.1mg，此外最大剂量：前24h 20mg，前30d 60mg，一生 2.5g）,环氧乙烷残留量分析方法,一、比色分析法二、气相色谱法,一、比色分析法,1 比色法（紫外可见分光光度法）简述 1.1 紫外可见分光广度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内的吸光度，对该物质进行定性和定量的方法。1.2 一般情况下，紫外可见分光广度法遵循朗伯比尔（LambertBeer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法进行定量分,一、比色分析法,析的依据，其数学表达式如下：A=lot=ECL 式中：A为吸光度 T为透光率 E为吸收系数 C为溶液浓度 L为光度长度 如溶液的浓度（C）为1（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸光度即为吸收系数以 E 表示。,一、比色分析法,2 原理 环氧乙烷在酸性条件下水解生成乙二醇，乙二醇经高碘酸氧化生成甲醛，甲醛与品红亚硫酸试液反应生成产生紫红色化合物，通过比色分析法可求得环氧乙烷含量。,一、比色分析法,1 比色法（紫外可见分光光度法）简述 1.1 紫外可见分光广度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内的吸光度，对该物质进行定性和定量的方法。1.2 一般情况下，紫外可见分光广度法遵循朗伯比尔（LambertBeer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法进行定量分,一、比色分析法,析的依据，其数学表达式如下：A=lot=ECL 式中：A为吸光度 T为透光率 E为吸收系数 C为溶液浓度 L为光度长度 如溶液的浓度（C）为1（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸光度即为吸收系数以 E 表示。,一、比色分析法,2 原理 环氧乙烷在酸性条件下水解生成乙二醇，乙二醇经高碘酸氧化生成甲醛，甲醛与品红亚硫酸试液反应生成产生紫红色化合物，通过比色分析法可求得环氧乙烷含量。,一、比色分析法,3 测定方法 3.1 取乙二醇标准品适量，制成一定浓度的标准溶液。3.2 精密量取不同体积的乙二醇标准溶液配制成不同浓度的标准品供试液，测定吸光度。3.3 根据不同体积的标准溶液对应的吸光度值，绘制吸光度体积标准曲线。,一、比色分析法,3.4 取样品适量，配制成样品供试液，同法测定吸光度，以测得的吸光度从标准曲线上查得相应的标准溶液的体积。3.5 根据公式，计算出环氧乙烷残留量。,一、比色分析法,4 溶液配制 4.1 0.1mol/L盐酸：取9ml盐酸稀释至1000ml。4.2 0.5高碘酸溶液：取高碘酸0.5g，稀释至100ml。4.3 硫代硫酸钠溶液：取硫代硫酸钠1g，稀释至100ml。4.4 10亚硫酸钠溶液：称取10.0g无水硫酸钠，溶解后，稀释至100ml。,一、比色分析法,4.5 品红亚硫酸试液：称取0.1g品红，加入120ml，热水溶解，冷却后加入10亚硫酸钠溶液20ml，盐酸2ml置于暗处。试液应无色，若发现有微红色，应重新配制。4.6 乙二醇标准贮备液：取一外部干燥清洁的50ml容量瓶，加水约30ml，移取0.5ml乙二醇，迅速加入瓶中，摇匀，精确称重。两次称重之差即为溶液中所含的重量，加水至刻度，,一、比色分析法,混匀，按式（1）计算其浓度：C 式（1）式中：c乙二醇标准贮备液浓度，g/L；W溶液中乙二醇重量，g 4.7 乙二醇标准溶液（浓度C1=C10-3)：精密移取标准贮备液1.0ml，用水稀释至1000ml。,一、比色分析法,5 样品试液制备 5.1 试液制备应在取样后，立即进行，否则应将试样密封于容器中保存备用。5.2 将试样截为约5mm长碎块，称取2.0g置于容器中，加0.1mol/L盐酸10ml，室温放置1小时。,一、比色分析法,6.试验步骤 6.1 取五支纳氏比色管，分别加入0.1mol/L盐酸2ml，再精确加入0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml乙二醇标准溶液。另取一支纳氏比色管，精确加入0.1mol/L盐酸2ml作为空白对照。6.2 于上述各管中分别加入0.5高碘酸溶液0.4ml，放置1小时，再分别滴加硫代硫酸钠溶液至出现的黄色恰好消失（除去剩余的高碘酸）。再分别加入品红亚硫酸试液0.2ml，,一、比色分析法,用蒸馏水稀释至10ml，室温放置1小时，于560nm波长处以空白液作参比，测定吸光度。绘制吸光度体积标准曲线。6.3 精密移取样品试液2.0ml于纳氏比色管中，按6.2步骤操作，以测得的吸光度从标准曲线上查得试液相应的体积。,一、比色分析法,7 结果计算 环氧乙烷残留量用绝对含量或相对含量表示。,一、比色分析法,7.1 按式（2）计算样品中环氧乙烷绝对含量：WEO=1.775V1c1m.式（2）式中：WEO 单位产品中环氧乙烷绝对含量，mg；V1 标准曲线上找出的样品试液相应的体积，ml；c1 乙二醇标准溶液浓度，g/L；m 单位产品的质量，g。,一、比色分析法,7.2 按式（3）计算样品中环氧乙烷相对含量：WEO=1.775V1c1.式（3）中：WEO 单位产品中环氧乙烷绝对含量，mg/kg；V1 标准曲线上找出的样品试液相应的体积，ml；c1 乙二醇标准溶液浓度，g/L。,二、气相色谱法,1 气相色谱法简述 气相色谱法系采用气体为流动相（载气）流经装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。物质或其衍生物气化后，被载气带入色谱柱进行分离，各组分先后进入检测器，用记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。气相色谱仪由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。进样部分、色谱柱和检测器的温度均在控制状态。,二、气相色谱法,1.1 载气源 气相色谱法的流动相为气体，称为载气，氦、氮和氢可用作载气，可由高压瓶或高纯度气体发生器提供，经过适当的减压装置，以一定的流速经过进样器和色谱柱；根据供试品的性质和检测器种类选择载气，除另有规定外，常用载气为氮气。,二、气相色谱法,1.2 进样部分 进样方式一般可采用溶液直接进样或顶空进样。溶液直接进样采用微量注射器、微量进样阀或有分流装置的气化室进样。采用溶液直接进样时，进样口温度应高于柱温30 50；进样量一般不超过数微升；柱径越细，进样量应越少，采用毛细管柱时，一般应分流以免过载。,二、气相色谱法,顶空进样适用于固体和液体供试品中挥发性组分的分离和测定。将固态或液态的供试品制成供试液后，置于密闭小瓶中，在恒温控制的加热室中加热至供试品中挥发性组分在非气态和气态达至平衡后，由进样器自动吸取一定体积的顶空气注入色谱柱中。,二、气相色谱法,1.3 色谱柱 色谱柱为填充柱或毛细管柱。填充柱的材质为不锈钢或玻璃，内径为24mm，柱长为24m，内装吸附剂、高分子多孔小球或涂渍固定液的载体，粒径为0.250.18mm、0.180.15mm、或0.150.125mm。常用载体为经酸洗并硅烷化处理的硅藻土或高分子多孔小球，常用固定液有甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。,二、气相色谱法,毛细管柱的材质为玻璃或石英，内壁或载体经涂渍或交联固定液，内径一般为0.25mm、0.32mm或0.53mm，柱长560m，固定液膜厚0.15.0um，常用的固定液有甲基聚硅氧烷、不同比例组成的苯基甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。新填充柱和毛细管柱在使用前需老化以除去残留溶剂及低分子量的聚合物，色谱柱如长期未用，使用前应老化处理，使基线稳定。,二、气相色谱法,1.4 柱温箱 由于柱温箱稳定的波动会影响色谱 分析结果的重现性，因此柱温箱精度应在1，且温度波动小于每小时0.1。温度控制系统分为恒温和 程序升温两种。,二、气相色谱法,1.5 检测器 适合气相色谱法的检测器有火焰离子化检测器（FID）、热导检测器（TCD）、氮磷检测器（NPD）、火焰光度检测器（FPD）、电子捕获检测器（ECD）、质谱检测器（MS）等。火焰离子化检测器对碳氢化合物响应良好，适合检测大多数的药物。在使用火焰离子化检测器时，检测器的温度一般应高于柱温，并不得低于150，以免水汽凝结，通常为250350。,二、气相色谱法,1.6 数据处理系统 可分为记录仪、积分仪以及计算机工作站等。,二、气相色谱法,2 原理 在一定温度下，用萃取剂水萃取样品中所含环氧乙烷（EO），用顶空气相色谱法测定环氧乙烷含量。,二、气相色谱法,3.测定方法 3.1 取环氧乙烷标准品适量，制成六个浓度的标准溶液，各取10ml，制备六个浓度的标准品试样。3.2 当标准品试样达到气液平衡时，不同浓度的液体对应于不同浓度的气体，取平衡后的气体，注入进样器，记录环氧乙烷的峰高（或面积）。,二、气相色谱法,3.3 根据不同浓度的标准溶液对应的峰高（或面积），绘制峰高（或面积）浓度标准曲线。3.4 取样品适量，配制成样品试样，同法测定峰高（或面积），以测得的峰高（或面积）从标准曲线上查得相应的标准溶液的浓度。3.5 根据公式，计算出环氧乙烷残留量。,二、气相色谱法,4 气相色谱仪条件 4.1 氢焰鉴定器：灵敏度不小于21011g/s 苯，二硫化碳（CS2)4.2 色谱柱：所用色谱柱应能使试样中杂质和环氧乙烷完全分开，并有一定的耐水性。色谱柱可选用表1推荐的条件,二、气相色谱法,表2,二、气相色谱法,4.3 仪器各部位温度 a）气化室200 b）检测室250 4.4 气流量 a）N2 15ml/min 30 ml/min b）H2 30 ml/min c）空气 300 ml/min,二、气相色谱法,5 环氧乙烷标准贮备液的制备 取外部干燥的50ml容量瓶，加水约30ml，加瓶塞，称重，精确到0.1mg。用注射器注入约0.6ml环氧乙烷，不加瓶塞，轻轻摇匀，盖好瓶塞，称重，前后两次称重之差，即为溶液中所含环氧乙烷的重量。加水至刻度再将此溶液稀释成1 10-2g/L作为标准贮备液。,二、气相色谱法,6 样品试样制备 6.1 试验样制备应在取样后立即进行，否则应将供试样品封于由聚四氟乙烯密封的金属容器中保存。6.2 将样品截为5mm长碎块，取2.0g放入萃取容器中，加10ml水，顶端空间40m;，容器内压力为常压，在恒温水浴60 1 中放置20分钟。,二、气相色谱法,7 试验步骤 7.1 用储备液配制1 10-3g/L 1 10-2g/L六个系列浓度的标准溶液。各取10ml按6.2方法处理。用玻璃注射器依次从平衡后的标准样和试样中迅速取1ml上部气体，注入进样器，记录环氧乙烷的峰高（或面积）。,二、气相色谱法,注 1 在一个分析中尽量一人操作，并使用同一只1ml玻璃注射器；2 注射器预先恒温到样品相同温度；3 每次注意环氧乙烷保留时间的变化，以防进样气化垫漏气；4 每个样品（包括标样）在尽可能短的时间内分析三次，三次分析中必须有两次结果相差不大于5%，否则此样品应重新进行分析。,二、气相色谱法,7.2 用标准样所测数据，绘出标准曲线（X：EO浓度，g/L；Y：峰高或面积）。7.3 从标准曲线上找出样品相应的浓度。如果所测样品结果不在标准曲线范围内，应改变标准溶液的浓度重新作标准曲线。,二、气相色谱法,8 结果计算 环氧乙烷残留量用绝对含量或相对含量表示。8.1 按式（4）计算样品中环氧乙烷绝对含量：WEO=5c1m.式（4）式中：WEO 单位产品中环氧乙烷绝对含量，mg；c1 标准曲线上找出的样品试液相应的浓度，g/L；m 单位产品的质量，g。,二、气相色谱法,8.2 按式（5）计算样品中环氧乙烷相对含量：cEO=5c1.式（5）式中：cEO 产品中环氧乙烷绝对含量，mg/kg；c1 标准曲线上找出的样品试液相应的浓度，g/L。,谢谢大家！,