校准品的溯源问题综述..ppt
检验结果的溯源性与标准化,检测方法的分类,分类有不同观点,大致上可分三类：确认方法（Definitive method）；参考方法（Reference method）；常规方法（Routine method）。,Definitive Method,能直接追溯到国际基本单位或基本常数，有坚实的理论基础和严格的数学表达的方法。它的精密度、准确度、测量范围和稳定性已经过严谨地研究与验证，具有最高水平。目前国际公认的化学测量权威方法有精密库仑法、同位素稀释质谱法、重量法、容量法、凝固点下降法,Reference Method,指具有较高的精密度和稳定性的方法，其准确度已用权威方法或不同原理的其它方法核验，证明不存在可察觉的方向性系统误差，可估计出其测量结果的总不确定度。,IFCC对方法分类的定义,确认方法：经过详尽的研究，没有发现具有已知的不准确度的方法。参考方法：经过详尽的研究，表明仅具有可以忽略不计的不准确度的方法。常规方法：具有系列书面的操作规程，说明检验人员为获得结果所必需的操作程序、材料和仪器等的方法。(1978年IFCC认可文件)。,葡萄糖测定方法的示例,确认方法为同位素稀释质谱法（ID-MS）参考方法为去蛋白的己糖激酶终点法常规方法为葡萄糖氧化酶-过氧化物酶-Trinder反应终点比色法。,标准品定义,标准品：在使用时，完全依据称量确定用量，配制成标准液或参考液。即内含已知加入量分析物的溶液，或者用参考的或确认的检验方法重复检验得到定值的溶液（美国HCFA法规Appendix C,Survey procedures,PC122 导则文件）,参考品定义,RM（Reference material）/（Reference preparation）:具有已知或设定的定量特性（如：浓度，活力，强度，反应性，应答性）的材料或装置。它的一个或多个特性值已被充分和完整地确定。用于设备的校准、测定方法的评估或对材料定值（VIM93-6.13）认证参考材料(CRM):某参考材料，由技术上证实的方法确认它的一个或多个值，并附有或可溯源于由公认团体签发的认可书或其它文件(NRSCL13),一级参考品,Certified Reference Materials（CRMs)是指用权威方法或用二种以上不同原理的标准方法以及其他准确可靠方法定值，不确定度具有国内最高水平，均匀性、稳定性良好的物质。它在溯源链中起着承上启下的作用，许多二级参考品就是通过一级参考品溯源至国家基准的。,二级参考品,Reference Materials：是用与一级参考品进行比较测量的方法或一级参考品的定值方法定值，其不稳定度和均匀性未达到一级参考品水平，但能满足一般测量的需要。其定值通常采用相对测量法，即用相应的一级参考品来校准仪器，采用多种不同的分析方法（如标准曲线法、标准加入法、内标法）进行比较测量而确定其量值不确定度的水平。,校准品(Calibrator),（三级）校准品：由各公司建立定值方案，确保准确度的传递而形成公司专用的校准品值的参考品。所以，校准品是公司专有的，它在日常分析检测中被大量采用。,参考品（标准品）,检验专用的参考品示例（一级）：部分美国国家标准和检测研究院（NIST）原国家标准局NBS提供的标准参考品（Stangdard Reference Material，SRM），如：SRM927B：牛血清白蛋白 SRM916：胆红素；SRM918：氯化钾；SRM912A：尿素。,二级参考品,目前国际上提供的公认的检验专用参考品有：美国NIST的SRM；欧洲共同体标准局（BCR）的CRM；世界卫生组织（WHO）的参考品；英国国立生物学及控制品研究院（NIBSC）参考品等。,参考实验室的要求,参考实验室必须得到医学会的认可并接受其监督参考实验室或他的主办者必须证实：愿意提供有资格和经验丰富的人员参与工作，具有必要的手段（场地、设备等）提供各种经费支持若参考实验室有主办者，她应是具法定资格的科学/医学协会，一个相应的研究所或是一个政府部门机构。但是，和实验室所在机构行使的行政职责无任何必然的关系和试剂、标准、控制品、仪器厂商/进口商无关条件不符，可撤销认可,参考实验室的要求,由医学会指定，任期2年。参考实验室履行本准则，应和具法定资格的医学或科技学会合作。若不符合先决条件，可在任何时候被取消。参考实验室是科技实验室，具有所有必须设备和技术，保证分析结果的可靠性。其负责人有专门知识和经验，具发展和试验新方法的能力，有有关参考方法的论著。不允许对建立参考方法值有关的工作做广告。,参考实验室,世界上被医学检验界认可的参考实验室，并不是可以对所有检验项目都可以使用参考方法对委托样品进行测定定值。他们只是在一个或几个项目上具有参考实验室的资格。,参考方法、参考品和参考实验室,如美国Dr.Doumas BT，在总蛋白、胆红素标准化中的贡献，获得全世界公认。他的实验室为专做样品总蛋白和总胆红素的参考实验室。完全为手工操作，人员要求高，效率低，收费昂贵。该实验室使用Doumas双缩脲法进行总蛋白测定时，使用美国SRM927B为蛋白标准。,参考实验室,所有确认方法和参考方法都是手工的操作方法。使用自动分析仪的方法，尽管在检测原理上和参考方法相同，但不属于参考方法。如：自动分析仪上葡萄糖的己糖激酶动态法。反应原理和参考方法相同，但是，没有去除蛋白，不是终点法；且是在自动分析仪上操作。即使完全按照参考方法检测，如果不是参考实验室的检测，亦无法确认结果的可靠性。,临床检验的目的与传统,目的：对病人新鲜标本检验报告可靠的结果。传统：对收集的患者标本只做一次检验，就发出报告。两个基本要求:精密度：重复性好；准确度：和参考方法具有可比性。,溯源性（Traceability）,通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。VIM：1993，定义6.10,溯源的困难性,临床检验公认：在参考实验室内，由具有认可资格的操作人员使用参考方法、或以参考品为标准，对新鲜标本进行的检测结果是参考值结果。参考实验室的所有参考方法是手工方法；或使用参考品校准的方法，在实现参考值的传递上非常烦琐。在日常检测中，无法使用这样的参考方法或参考品进行大量病人标本的检测，出报告。,现实的需求,让常规的检测系统，对病人标本的检测，在计量单位一致的前提下，得到和参考系列相同的检测量值。这就是通过一条不间断的比较链（方法学比较），使检测结果或检测标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准；或和参考方法检测值联系起来。为此，生产厂商必须对完成检测涉及的检测系统各组分（仪器、试剂、校准品、和操作程序）进行严格的标准化程序，实现溯源性。,临床检验的标准化,为了实现临床检验结果的溯源性，检测系统的生产厂商的所有努力，进行有秩序的特定活动所制定并实施各项规则的过程为标准化。,临床检验的特点,1检验的检测对象是病人标本，而且一定绝大多数是新鲜的标本。实验室使临床和病人满意的是检验结果的可靠性。实现结果可靠性的质量管理有许多内容在保证收集和处理的标本质量、在检验后不存在处理检测数据和发出报告的差错前提下，获得可靠结果的主要阶段是分析过程的质量。,2临床检验的习惯是对每份病人标本只做一次检测，就发出报告；而且，每个标本内究竟内含多少分析物无法知道。因此，度量检验的分析质量不能以工业上的多次采样、多次检测或测量、取均值和预定标准比较等方式来观察。,3病人结果可靠性的含义是准确度。定义：检测结果和被检测物/分析物真值间的一致性。a.作为结果，在真值和该值间的差异，通常表示为相同的计量单位；此时，表示差异的更确切的词为“不准确度”。b.可以使用“可接受的参考值”替代“真值”。c.特别是对每个标本只作一次测定时，差异不仅包括分析过程的不准确度，也包括了分析过程的不精密度。NCCLS,4检验质量的首要问题:分析过程（检测）精密度。定义：各个重复检测值间的一致性。度量精密度的指标是不精密度。也即：临床要求结果的重复性好。,自动化分析仪的优点,a.非常显著地改善了重复性,即精密度的水平。b.极大地提高了检验的效率和质量,实现溯源的前提,保持检验必需的自动化仪器、试剂、校准品、和操作程序的固定组合。要使检验结果的量值和参考系统结果一致，也就是对涉及检验的检测系统各组分的标准化。,检测系统,完成一个检验项目检测所涉及的仪器、试剂、校准品、操作程序、质量控制、保养计划等的组合，称为检测系统。若是手工操作，还必须包括具体的操作人员只有使检测系统的组合固定下来，才能使检验结果具有明确的性能。实现检验结果溯源性的重要前提，也只能在检测系统中予以体现。,检测系统的要素,检测系统的分析性能,衡量一个检测系统（检验方法）的基本分析性能有4点：不精密度、不准确度、病人结果可报告范围、分析灵敏度。,病人标本结果的溯源性,使用了自动化分析仪，日常检验的精密度得到了显著的提高优良试剂盒的病人结果的可报告范围也可以满足临床要求大多常规检验项目没有对极低浓度的临床要求结果的可靠性的关键是准确度，即对校准品值的调节。因此，实现新鲜病人标本结果的溯源性，成为使校准品值实现溯源性。,标准品(Standard),传统的临床检验，要使检验结果可靠或有依据，往往有一个标准品。标准品的定值由称量和容积计算确定。检定不合格即报废，决不可将实测值替代修正。,基质效应(Matrix effect),检测系统检测标本中的分析物时,处于分析物周围的所有非分析物质(基体)对分析物参与反应的影响.,基质效应的再认识(1),包括总的干扰，同一基体状态的ME随方法和检测条件而异ME是绝对的严格起来，不同批号试剂，其ME不一样度量有无ME，最佳样品是人新鲜标本明了单一标准液、校准品、控制品和新鲜标本间的区别,基质效应的再认识(2),不应再用单一标准液校准或标化结果不用控制品作校准品校准仪器不可将定值血清靶值或均值作为自己的均值仅以控制品测定值相似或等于定值，不足以说明方法的准确度校准品必须专用于某一检测系统同一校准品用于不同仪器时，应该有不同的校准值,校准品和定值,为了克服因纯标准液和病人样品间的基体差异，对检验结果的严重误差，20年前开始引用具有与病人样品基体相似的校准品替代标准品，用于日常工作。,校准品,尽管校准品的主要来源是人的血清，为了使校准品内的一些分析物水平达到某个程度，而且形成稳定的产品，所有的校准品、控制品、室间调查品等都是处理过的血清。和原来的天然血清间又产生了新的基体差异。,校准品,（1）校准值随方法而异 校准品中被检分析物的含量无法由称量法和容量法确定，只能依赖于分析方法。校准品的校准值必须取决于分析方法或检测体系。,最佳校准品,新鲜病人标本是最佳校准品原因：所有用于检验中的检测方法、仪器、试剂等都是用来检测病人新鲜标本的，不是用来检测校准品这样的处理过样品。,最佳校准品,如果先用公认的参考方法检测病人标本，再以具有参考值的病人标本去校准某检测系列（包括方法、试剂、仪器），此时该检测系列再检测其他新鲜病人标本时，被检测的病人标本结果的溯源性可上溯至公认的参考方法。也即新鲜病人标本是校准检测体系的最佳校准品。,校准品的矛盾,新鲜病人标本的局限性，加工的稳定血清将成为商品化的校准品材料。所有商业校准品都是处理过的样品，和新鲜病人标本有基体差异。,商业校准品的问题,若使用公认的参考方法去标化测定校准品，测定值是可靠的，但使用该测定值去校准常规的检测系列时，校准品中被检分析物参与反应时的表现明显不同于新鲜病人标本，校准品的测定值不能将参考方法系列的准确度通过校准品传递给病人标本。,理解校准品,使用校准品的目的，是使检测系统对病人标本检测结果，实现溯源性。(在计量单位一致的前提下，检验结果的量值和参考系统对病人标本检测的结果量值具有可比性。）校准品定值方案在系列标准化内容中，是一个最突出的课题。实现病人结果的溯源性，必须在校准品定值过程中，自始至终使用病人新鲜标本。坚持使用方法学比较实验，反复传递和验证结果的可靠性。,校准品定值的方法步骤,以具有参考值的新鲜病人标本去校准某检测系统（包括方法、试剂、仪器）后，检测系统再去检测候选的校准品（处理过样品），得到的检测值为初始校准值以初始校准值反过来再校准组合的检测系统后，该检测系统又去检测病人的新鲜标本。观察病人标本的检测值是否和参考方法的测定值具良好的可比性。,校准品定值的调整,不断地调整校准值，直至用该校准值校准指定的检测系统后，检测系统再检测病人标本，得到的测定值和病人标本的参考方法测定值具有满意的可比性，此时可以确认校准品的校准值。,公司校准品标准化的大致内容和步骤,1建立“公司一级参考品”,准备多个混和血清，经离心、过滤等处理后，各个混和血清分装成小包装。-70保存。试验说明，这样保存的血清复融后具有的性能和新鲜血清相似。这些血清组构成公司产品标准化的“公司一级参考品”。,2.公司“一级参考血清”的参考值定值,由公司选择国际上知名的参考实验室委托定值。这些参考实验室在国际上的数量很少，每个实验室只是对某一个或几个项目接受定值委托，费用昂贵。但是，这是公司校准品定值的依据。,由于参考系统或参考材料的使用常常是很有限的，因此，必须设立内部使用的参考系统（或材料）复制品即设立公司一级校准品（Master Calibrator）。,3.设立公司内部使用的“一级校准品”,除了有公司一级校准品外，还需要建立公司生产用的Working Calibrator、日常供应的Business Calibrator。所有各种校准品的原料要求和加工制备工艺一样。只是在定值方案上有区别。,4.建立应用校准品和商品校准品,自始至终以方法学比较实验为确定、验证或传递定值的手段除了上述混和血清组外，随时需要实际的新鲜病人标本，供方法学比较用,商业校准品实现溯源性的手段,(1).确定公司产品对病人标本检测结果可溯源的参考方法或参考品。（和什么参考系列比较？）(2).确定定值的实验室：选择合适的实验室是定值质量的先决条件。,实现溯源性的必备条件,校准品的溯源性依据（示例）,溯源的过程,选参考实验室以参考方法对公司一级参考品定值以一级校准品对检测系统校准测定一级参考品比较分析参考品结果和初步检测值结果的差异用方法学比较的回归线调整样品在该公司检测系统上的初步结果数值，向参考系统（或方法）的参考结果数值靠拢。,实现溯源性的实质,实质是调整校准品在公司组合的检测系统上的定值，将它调整到：公司组合的检测系统再次被该校准品校准后，对参考样品的检测结果尽可能和原有的相应参考方法的结果一致。新鲜病人标本核实：如果确实实现了参考样品的检测结果和原有的相应参考结果一致。说明：校准品定值可以使病人标本在检测系统上检测的结果，溯源至参考系统。,在参考标准化中为了避免未处理过的人样品稳定性问题，单个供体样品只使用一次。混合人血清的参考方法值最多被认可6个月（-70 保存）；需要重新用于参考标准化时，应重确定。,校准品定值过程,对公司一级参考血清定值的最高计量水平是国际认可的参考方法（如：ID-MS）。若没有参考方法可用，则选择合适的正式官方参考品（如：CRM 470）。若这个也没有，则可使用一级标准的水标准液（如：乳酸锂）为参考，或者某个确定的检测方法。,校准品定值过程,公司一级校准品的基体大致和各批市售校准品（常规校准品）相当；另外，这些一级校准品储存于-70，并定期检查稳定性。,校准品定值过程,用参考方法、或以参考品为校准品，对人血清（一级参考品）的检测公司一级校准品以这些参考方法值标准化市售校准品和控制品则以公司一级批号校准品（真实性控制）在相应分析系统上作校准保证该系统的患者结果值的溯源性每个分析仪平台对每个方法各自都以相同方式，按照该参考系统程序标准化。,溯源的过程,相对于参考方法的标准化（有公认的参考方法和/或参考品）相对于参考品的标准化（没有公认的参考方法，但是有公认的参考品）,校准品定值的两种方式,总胆固醇测定参考方法示例,确认方法为同位素稀释质谱（ID-MS）法参考方法为改良Abell-Kendall方法（皂化-抽提-浓硫酸、磷酸显色）常规方法为酶法（胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、Trinder显色终点法）美国NIST建立的标准参考品有：纯胆固醇SRM911；冻干人血清SRM909。,相对于参考品标准化示例,14种特定蛋白测定公认参考品为CRM470。可以适用的检测方法为：放射免疫扩散、免疫透射比浊、和免疫散射比浊。没有指定这些项目的参考方法。,校准品定值过程,溯源性要求对实际工作的几点启示,校准品必须专用于某一检测系统同一校准品用于不同检测体系时，应该有不同的校准值不应再用单一标准液校准或标化结果不能用定值质控品校准仪器不可将定值血清靶值或均值作为自己的均值质控品测定值相似或等于定值，不足以说明方法的准确度和结果绝对可靠性,
