免疫组化结果判断及常见问题的分析.ppt

免疫组化结果判断及常见问题分析,肝脏：CK8理想着色，胆管上皮细胞强阳性，肝细胞呈不同层次阳性。,pan CK（AE1/AE3）在肝脏理想的染色，采用了热修复。肝细胞膜、胆管强而清晰的着色。背景干净。,一、特异性染色的判断,1.特定的定位 细胞阳性根据靶抗原不同而呈现胞膜型、胞浆型 或胞核型 间质阳性表现为细胞外着色，局限性或弥散性2.染色的不均一性 阳性细胞的染色分布不均，片状或点状散在分布 染色强弱不等，颜色深浅反映抗原量的多少 3.排除人为造成的非特异性染色 切片的折叠、刀痕，色素沉着，组织细胞坏死。4.颗粒性显色 DAB显色在高倍镜下呈颗粒状而非均匀着色。,免疫组化标准化照片,合格的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提不合格的免疫组化染色切片容易导致误判,C-erbB-2,优,良,中,差,4,3,2,1,ER,子宫内膜PR染色，修复不足 子宫内膜PR染色，修复良好,PR,二、染色结果的判断,PCNA,S-P400,S-P400,1-day CM,4-day CM,阳性强度2010视野下，随机选取5个视野，测100个阳性细胞的平均光密度即为此片的阳性强度。,三、结果分析,P53,阳性细胞百分比 计数100个瘤细胞，其中阳性细胞的比例：5%（）5%30%（）30%50%（）50%（）,PCNA,Barnes法A：瘤细胞显色有无及深浅 0（不着色）1（浅黄色）2（棕黄色）3（棕褐色）B：显色细胞的比例 1（1%10%）2（11%50%）3（51%80%）4（80%）评分=AB 0分：阴性 14分：弱阳性 4分：强阳性,胶原染色,阳性面积百分比4010视野，选取5个视野，计算阳性区域面积占整个参考面积的百分率。,CD34,Weidner法（MVD计数）孤立的棕黄色细胞族代表一条微血管。低倍镜下找到组织内密度最高区域。4010视野下计数微血管数目。,K-ras,VEGF,附：定量分析图象处理系统,1、图象处理：利用仪器按照不同的目的进行图象的修正、变换、特征提取和测量。1）“狭义”指消除图象的模糊不清部分，校正畸变。2）“广义”包括对图象的结构分析，提取特征进行测量。,2、图象处理系统组成 图象输入（显微镜、扫描仪）图象处理运算（病理图文分析软件）图象、数据输出,3、图象处理系统功能 几何形态学定量分析 细胞核、浆的大小、面积、核浆比；细胞分布密度、个数；血管、腺体的面积、密度；间质的面积 免疫组织化学分析 按着色灰度分类，计算阳性、阴性细胞的面积含量 DNA倍体分析 计算正常细胞及肿瘤细胞DNA 含量，给出倍体参数、DNA参数分布直方图 AgNOR分析 颗粒分析：数目、大小、面积、比例,四、免疫组化异常着色及对策,1.非特异性着色及其对策,内源性生物素肾小管,内源性生物素淋巴结转移性甲状腺腺癌,蜕膜组织部分胞核PR阳性，血管内红细胞过氧化物酶显色,嗜酸性粒细胞中细胞色素显色,吞噬细胞内 含铁血黄素,坏死组织着色：AE1/AE3,坏死组织着色,交叉反应：乳腺ki-67组织细胞胞浆着色,黑色素瘤，细胞内含黑色素，呈紫黑色，HE染色,灶状着色：机械原因着色,Cyclin D1 套细胞淋巴瘤,全片着色,全片着色,边缘着色,“阴阳脸”着色,气泡,非特异性着色及其对策,无信号片,CD30,2.染色的假阴性及其对策,无色或浅色片,MCL理想的 CD5着色。所有的瘤细胞都着色很强。散在的T细胞着色比瘤细胞深。,MCL的CD5染色不足(一抗浓度太低)。MCL瘤细胞几乎都没有着色。,3.染色过弱原因及其对策,