药物分析重点.doc

第一章药物分析：研究化学结构明确的合成药物或天然药物及其制剂的质量控制方法，也研究中药制剂和生物制品及其制剂有代表性的质量控制方法。药品非临床研究质量管理规定GLP；药品临床试验质量管理规范GCP药品生产质量管理规范GMP；药品经营质量管理规范GSP；中药材生产质量管理规范GAP人用药品注册技术要求国际协调委员会ICH药品标准的内涵包括：真伪鉴别、纯度检查和品质要求。决定了药品的安全性、有效性和质量可控性。、精确度 药典规定取样量的准确度和试验精密度。药典：记载药品质量标准的法典；国家监督、管理药品的技术标准；法律约束力。各国药典现行版本：ChO2010,EP7,USP34,JP16中国药典：1953,63,77,85,90,95,00,05,10。ChP2010由一部、二部、三部及其增补本组成。 （一部）药材和饮片、植物油脂和提取物、成方制剂和单味制剂（二部）化学药品、生化药品、抗生素、放射性药品、药用辅料；（三部）生物制品内容分为:凡例、正文、附录正文每一品种项含：品名（包括中文名，汉语拼音名与英文名） 有机药物的结构式；分子式与分子量； 来源或有机药物的化学名称；含量或效价规定 处方；制法；性状；鉴别；检查； 含量或效价测定；类别；规格；贮藏； 制剂质量标准术语：凡例：为正确使用中国药典进行药品质量检定的基本原则。是对中国药典正文、附录及与质量检定有关的共性问题的统一规定。正文:（药品标准）根据药物自身的理化与生物学特性，按照批准的来源、处方、生产工艺、贮藏运输条件等所制定的、用于检测药品质量是否达到用药要求并衡量其质量是否均一稳定的技术规定。附录：包括制剂通则、通用检测方法和指导原则。1药品名称：列入国家药品标准的药品名称-称为药品通用名称-不得作为药品商标使用。INN-国际非专利药名。药品中文名称：须按照中国药品通用名称(China Approved Drug Names，CADN)。2.制法：对药品生产制备的重要工艺和质量管理的要求。3性状：外观性状、溶解度、物理常数：熔点、旋光度、吸收系数等可反映药品纯度。4鉴别：根据药物的某些物理、化学或生物学特性进行的试验，以判定药物的真伪。区分药物类别-一般鉴别试验；证实具体药物-专属鉴别试验。5检查：是对药物的安全性、有效性、均一性和纯度四个方面的状态所进行的试验分析6含量测定：方法：化学原料药-首选容量分析法、制剂-首选色谱法7制剂规格：系指每一支、片或其他每一个制剂单位含有主药的重量（或效价）或含量（%）或装量，即制剂的标示量。8检查方法和限度：原料药的含量-按重量计，制剂的含量限度-指标示量的百分含量表示时，范围95.0%-105.0%9标准物质：标准品：用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质，按效价单位(或g)计，以国际标准品进行标定.对照品：化学药品标准物质，按干燥品计算后使用。对照药材对照提取物-中药检验。参考品-生物制品10精确度（1）称重和量取：由有效位数确定：0.1g可称取0.060.14g；2g1.52.5；2.01.952.05；2.001.9952.005。精密称定-准确至所取重量的千分之一；称定-百分之一；精密量取-移液管的精度要求；量取-量筒；约-不得超过规定量的10%；恒重-连续2次重量差小于0.3mg。空白试验-不加供试品或等量溶剂替代供试液药品标准制定的原则：科学性、先进性、规范性、权威性原料药的结构确证：1样品要求：纯度>99.0%，杂质<0.5%。2结构确证方案：一般项目：有机光谱分析法：原子发射光谱法（AES）、原子吸收分光光度法含金属药物中无机元素测定；质谱-多肽；单糖-纸、薄层、HPLC、色质连用；得意他办公-凝胶色谱；手性-单晶X射线四圆衍射仪；晶型-粉末X-衍射、IR、熔点、热分析稳定性试验：影响因素试验、加速试验、长期试验药品检验工作的基本程序：药品检验工作的基本程序一般分为取样、鉴别、检查、含量测定、写出检验报告药品取样的基本原则：均匀、合理第二章 药物的鉴别试验鉴别试验的内涵：1、根据药物分子结构、理化性质，采用化学、物理化学或生物化学方法来判断药物真伪.2、中国药典和世界各国药典所收载的药品项下的鉴别实验方法均为用来证实贮藏在标有标签容器中的药物是否为所标示的药物而不是对未知物进行定性分析.3、方法应为专属，每个品种一般23次一般鉴别试验1、有机氟化物：氧瓶燃烧法碱性溶液吸收无机FpH4.3茜素氟蓝、硫酸铈蓝紫色络合物2、有机酸盐：水杨酸杨：FeCl3，紫色酒石酸盐：氨制硝酸银水浴内壁银镜3、芳香胺类：NaNO萘酚 (重氮化-偶合)4、托烷生物碱类：发烟硝酸水浴蒸干残渣醇溶KOH一粒深紫色（Vitali）5、焰色反应：钠-鲜黄；钙砖红；钡黄绿，绿色玻璃中蓝色6、铵盐：NaOH加热氨臭7、硝酸盐：硫酸+铜丝加热红棕色气体药物鉴别方法：化学法：要求反应迅速，现象明显.包括显色、沉淀、荧光、气体生成、试剂褪色、熔点测定.光谱法：紫外光谱(测定max或同时测定min；规定一定浓度供试液在max处的A；规定和E；规定1/2；经化学处理后测定产物的吸收光谱特征)；红外光谱(专属性强，应用广)色谱：1.薄层色谱TLC：定性参数为RP值；不同类药物不能互相干扰；应确证TLC的专属性. 2.HPLC：要求供试品和对照品色谱峰保留时间一致.射线粉末衍射法生物学法：微生物或动物实验鉴别的方法.指纹图谱与特征图谱鉴别法显微鉴别法鉴别试验一般需要对方法的专属性和耐用性进行验证第三章 药物的杂质检查杂质：Chp将任何影响药品纯度的物质均称为杂质。来源：1生产过程引入；2贮藏过程中受外界条件影响，引起药物理化特性变化而产生。分类：按来源分类;1一般杂质(生产和贮藏过程中容易引入的杂质)2特殊杂质：特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质，也常称为有关物质，这类杂质随药物的不同而不同。杂质限量：药物中所含杂质的最大允许量。杂质限量=杂质最大允许量/供试品量×100%杂质控制方法：1限量检查法：通常不需要测定准确含量，只检查杂质是否超过限量。（1）对照法：杂志限量(%)=标液浓度*标液体积/供试品量*100%。（2）灵敏度法：在供试品溶液加入一定量试剂，在一定条件下不得有正反应出现（3）比较法：取一定量供试品依法检查，测定特定待检杂志参数与规定限量比较2杂质的检查方法：1化学方法：（1）显色反应检查法（2）沉淀反应检查法（3）生成气体检查法（4）滴定法2色谱方法：TLC、HPLC、GC，杂质对照品法、供试品自身稀释对照法。TLC,要求主斑点颜色不得更深。3光谱法：紫外-可见、红外、原子吸收分光光度法（用于金属杂质检查）4其他方法：（1）热分析法：热分析：是在程序控制温度下，精确记录物质的物理化学性质随温度变化的关系，研究物质在受热过程中所发生的晶形转化、熔融、蒸发、脱评价药品水等物理变化，或热分解、氧化、还原等化学变化，以及伴随发生的温度、能量、或重量改变的方法a.差热分析(DTA)：在程序控制温度下测量试样与参比物之间温度差T与温度关系的一种技术b.差示扫描量热法(DSC)：在程序控制温度下测量传输给待测物质和参比物的能量差与温度(或时间)关系的一种技术.c.热重分析法(TGA)：应用热天平在程序控制温度的条件下测量物质的质量随温度变化，纪录变化曲线(热重曲线)从而准确测量变化和变化速度.（2)酸碱度检查法（3）物理性状检查法：一般杂质检查：检查内容：氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、干燥失重、水分、易炭化物、残留溶剂、溶液颜色、溶液澄清度。检查无机杂质对评价药品生产工艺状况有重要意义。氯化物检查法：1.原理：药物中微量氯化物在硝酸酸性条件下与AgNO3反应，生成AgCl胶体微粒而显白色浑浊，与一定量标准NaCl溶液在相同条件下反应产生的AgCl浑浊程度比较不得更深。2方法：样品溶解/标准氯化钠溶液(10g Cl/ml)，50mL纳氏比色管，+稀HNO310mL +水至40mL +AgNO3试液1.0mL +水至50mL ,暗处放置5min，比较.(氯化物浓度以50mL中含5080g的 Cl为宜)加稀酸排除硝酸银盐干扰。注意事项：(1)比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察(2)平行操作原则(3)供试品溶液如带颜色，可采用内消色法(倍量法)；外消色法：如KMnO4中氧化物的检查，可先和乙醇适量还原后再依法检查硫酸盐检查方法：在稀盐酸酸性条件下与氯化钡反应，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件下产生的硫酸钡浑浊程度比较。铁盐检查法：铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸盐作用生成红色可溶性的硫氰酸铁配离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。重金属(铅)检查法：重金属概念：重金属是指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。以铅限量表示重金属的限度。第一法：硫代乙酰胺法。适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。原理：硫代乙酰胺在弱酸性条件下水解，产生硫化氢，与重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，判定供试品中重金属是否符合限量规定。第二法:炽灼后的硫代乙酰胺法含芳环、杂环以及难溶于水、稀酸及乙醇的有机药物第三法：硫化钠法适用于溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的药物砷盐检查法：古蔡氏法：原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，颜色不得更深。试验中醋酸铅棉花作用：用来吸收锌粒或供试品可能产生的硫化氢气体。注意事项：1.供试品为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等在酸性溶液中生成HS2或SO2，与溴化汞生成黑色硫化汞或金属汞，干扰砷斑检测。应先加硝酸使氧化成硫酸盐；2供试品为铁盐，消耗还原剂，先加酸性氯化亚锡试液使高铁离子还原为低铁离子；3环状结构的有机药物要先进行有机破坏(碱和酸)；4.含锑药物，锑化氢干扰砷盐的检出(SbH3 + HgBr2SbH2(HgBr) + HBr)，改用白田道夫(Betterdorff)法二乙基二硫代氨基甲酸银法：原理：金属锌与酸作用产生新生态氢，与微量砷盐反应生成具有挥发性的砷，还原二乙基二硫代氨基甲酸银，产生红色胶态银，同时在相同条件下使一定量标准砷溶液呈色，用目视比色法或在510nm波长处测定吸光度进行比较。干燥失重测定法：主要检查药物中的水分及其他挥发性成分。干燥失重的量应恒重。干燥至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1小时后进行.1常压恒温干燥法：适用于对热稳定的药物，如：乌苯美司，卡巴胆碱，尼莫地平.需在105下干燥至恒重.2(恒温)减压干燥法：适用于熔点低或受热易分解的供试品，常用干燥剂为：无水氯化钙、硅胶、五氧化二磷.3.干燥剂干燥法：适用于受热分解或生化的药物，常用硅胶、硫酸和五氧化二磷等炽灼残渣指有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后，高温炽灼所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。残留溶剂测定法分类：1有机溶媒毒性大，且具有致癌作用并对环境有害尽量避免使用；2有机溶媒对人有一定毒性应限量使用；3有机溶媒对人健康危险性小推荐使用；4对人或环境无足够数据证明有危害，应根据生产工艺特点制定相应限度，使其满足各种相应质量要求.；检查方法：GC常用火焰离子化检测器FID，含卤素的采用ECD检测器。测定1.系统适用性试验：填充柱法n>1000，毛细管柱>5000；R>1.5；内标法连续进样5次，A待测/A内的RSD5%；外标法连续进样5次，A待测的RSD10%；测定方法：法一、毛细管柱顶空进样等温法(品种少，极性差异小的溶剂)；法二：毛细管柱顶空进样程序升温法(溶剂品种多，极性差异大)；法三：溶液直接进样法(采用填充柱或适宜极性的毛细管柱)计算法：内标法溶液颜色检查方法;溶液颜色是否正常可反映药物的纯度。溶液澄清度检查方法澄清度：是检查药品溶液的浑浊程度，可以反映药物中微量不溶性杂质的存在情况，是控制注射用原料药纯度的重要指标。第四章 药物的含量测定方法与验证定量分析方法：容量分析法，光谱分析法，色谱分析容量分析法：即滴定法，是将已知浓度滴定液由滴定管加到北侧药物溶液中直至反应完全，然后根据滴定液浓度和被消耗的体积按化学计量关系计算出被测药物的含量.所用仪器简单，操作简便快速，方法耐用性高，测定结果准确(相对误差<0.2%)，但专属性差，只适用与含量较高试样的分析UV:本法灵敏度高，准确度高，操作简单应用广泛,专属性差.(用于药物制剂含量测定)对照品比较法吸收系数法.计算分光光度法比色法HPLC：检测器：UV（常用）、荧光、蒸发光散射、示差折光、电化学、质谱测定法：外标法、内标法系统适用性试验：色谱柱理论塔板数反映分离效率分离度R应>1.5重复性：连续5次进样，RSD2.0%拖尾因子T在 0.951.05.GC测定法：内、外、标准曲线法前处理的目的：满足所选用的分析方法对试样的要求。前处理方法分类：1不经有机破坏的分析方法：适用金属离子或待测元素易解离的药物.直接测定法：凡金属离子不直接与碳原子相连的含金属的有机药物或C-M键结合不牢的有机金属药物，在水溶液中客店里，因而不许有机破坏可直接测定.配位滴定法和氧化还原滴定法经水解后测定法：碱水解后测定法和酸水解后测定法经还原分解后测定法. 2经有机破坏分析方法：适用于金属原子与碳原子结合牢固的药物以及大量生物基质中药物的测定：湿法：适用于含氮有机物分析的前处理.主要方法：凯氏定氮法(样品分解铵盐分解氨的固定反滴定)；硫酸-硝酸法；硫酸高氯酸法；硝酸-高锰酸钾法干法：适用于不易湿法破坏完全的有机物及不能用硫酸破坏的有机物.a高温炽灼法(5001000.分解效果好于湿法)；b氧瓶燃烧法仪器：磨口、硬质玻璃锥形瓶；铂丝吸收液：F水；氯水-NaOH；溴、碘-水-NaOHSO2饱和溶液；SH2O2；磷水原理：将分子中含有待测元素的有机药物在充满氧气的密闭燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底分解为CO2和水，而待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，以供待测元素的检查和定量。药品分析方法的验证内容及内容表示方法：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围、耐用性.1准确度：用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，以回收率表示1.原料药回收率=测得量/加入量*100%，测定36次，西药在98102%，中药在95105%.2.制剂的回收率=(测得量-本底量)/加入量*100%.2精密度：规定的测试条件下同一个均匀供试品经多次取样测定所得结果之间的接近程度.表示方法：偏差d，标准差SD，相对标准差RSD，至少对6次结果进行评价.验证内容：重复性(较短时间间隔内相同操作条件下由同一分析人员测定所得结果的精密度，需对9个测定结果进行评价)；中间精密度(同一实验室，由于实验室内部条件的改变，所测得结果的精密度)；重现性(不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度)3专属性：在其他成分(如杂质，降解产物，辅料等)可能存在的条件下，采用的方法能准确测量出被测物的特性.4检测限(LOD)：试样中被测物能被检测出的最低浓度或量反应方法是否具备足够灵敏度，无须准确定量，只要指出高于或低于规定的浓度或量即可.一般以信噪比S/N=3时的相应浓度确定LOD值.5定量限(LOQ)：样品中被测物能被定量测定的最低量.以S/N=10时的相应浓度确定.6线性：在设计的范围内，测试结果与试样中被测物质的浓度或量有直接呈正比关系的程度.7范围：能达到一定精密度，准确度和线性，测试方法适用的高低浓度或量的区间.8耐用性： 测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度.(1)定量分析法：RSD0.2%，回收率99.7100.3%.(2)UV法：RSD1%，回收率98102%，线性，A在0.20.7之间， 需5份浓度数据r 0.999，截距接近于0. (3)HPLC法： RSD2%，n为57，r 0.999，b0，回收率98102%.非定量分析方法：如鉴别、杂质的限度检查，需专属性，检测限，耐用性定量分析方法含量测定、含量均匀度、溶出释放度测定，需准确度、精密度、专属性、线性、范围、耐用性微量定量分析方法：如杂质的定量测定，需准确度、精密度、专属性、定量限、线性、范围、耐用性。第五章体内药物分析血样中蛋白质的去除：加入与水混溶(1:13)的有机溶剂(乙腈、甲醇、丙酮、四氢呋喃等)加入中性盐(1:2)(饱和硫酸铵，硫酸钠，Mg2+，磷酸根，枸橼酸盐等)加入强酸(1:0.6)(10%三氯醋酸，65%高氯酸，5%偏磷酸)，可用煮沸分解或加碱中和沉淀法去除.加入含锌盐(1:2)及铜盐的沉淀剂酶解法(枯草菌溶霉素)尿样中缀合物的水解：常用酸水解，但酶水解选择性高，很少使用被测药物或共存物降解，故优先使用蛋白质分离，纯化与浓缩：液液萃取法(LLE)选择性高，乙醚，三氯甲烷选用溶剂要求a对被测组分溶解度大，沸点低，易于挥发浓缩；b与水不相混溶c无毒，化学稳定，不易乳化.液固萃取法(LSE)a较少引入杂质，b消除了LLE中的乳化现象，c萃取率高d在组后洗脱中多采用水为溶剂系统，大大增强了安全性e处理样品速度快，并可在室温下操作.体内药物分析的特点:1体内样品需经分离与浓集，或经化学衍生化处理后才能进行分析，2对分析方法的灵敏度及专属性要求较高，3分析工作量大，测定数据的处理和结果的阐明比较繁杂定量分析方法的验证：(注：与药物分析方法验证的不同点)特异性：必须证明所测定的物质是原形药物或特定的活性代谢物，内源性物质和相应的代谢物及同时服用的其他药物不得干扰样品的测定.标准曲线和线性范围：必须至少6个浓度建立标准曲线，不许外延.建立标准曲线时应随行空白生物样品，但标准曲线不包括零点.精密度与准确度：RSD<15%，准确度在85%115%.定量下限：是标准曲线的最低浓度点，要求至少能满足测定35个半衰期时样品中的药物浓度，或Cmax的1/101/20时的药物浓度.样品的稳定性：根据具体情况，对含药生物样品在室温、冰冻和冻融条件下以及不同存放时间进行稳定性考察，以确定生物样品的存放条件和时间.提取回收率：一般低于100，须稳定.应考察高、中、低三个浓度的提取回收率，其结果应一致、精密和可重现.质控样品：将已知量的待测药物加入到生物介质中配制的样品，用于质量控制.第六章 芳酸类药物 水杨酸类:水杨酸,阿司匹林,对氨基水杨酸,二氟尼柳 贝诺酯苯甲酸类:苯甲酸 甲芬那酸 丙磺舒其他芳酸类:氯贝丁酯 布洛芬 理化性质 (1)酸性：羧酸、与碱成盐，可溶于水；较强酸性，大多药物原料药可在中性乙醇或甲醇，丙酮等水溶性有机溶剂中，用氢氧化钠直接滴定法测定含量(2)水解性：酯键或酰胺键发生水解反应(3)吸收光谱特性：苯环和特征取代基 :UV、IR吸收(4)基团或元素特性：a对乙酰氨基酚的酚-OH和水杨酸的邻羟苯甲酸与三价铁显色，b 酮洛芬的二苯甲酮与苯肼显色；c美洛昔康硫元素热分解后产生的 硫化氢与醋酸铅生成PbS黑色 鉴别试验1. FeCl3反应(1)水杨酸反应：水杨酸的水溶液加三氯化铁试液，即生成紫堇色配位化合物。 中性或弱酸性(pH 46)条件下进行，强酸中配位化合物可分解；本反应极灵敏，宜在稀溶液中进行。阿司匹林加水煮沸使水解生成水杨酸后，可与三氯化铁试液反应显紫堇色；双水杨酯在氢氧化钠试液中煮沸后与三氯化铁试液反应呈紫色；二氟尼柳溶于乙醇后与三氯化铁试液反应呈深紫色。(2)酚羟基反应 对乙酰氨基酚的水溶液加三氯化铁试液即显蓝紫色。 吡罗昔康与美洛昔康噻嗪环上的烯醇式羟基具有酚羟基的性质，亦可在三氯甲烷溶液中与三氯化铁生成红色配位化合物，分别显玫瑰红色和淡紫红色。 2. 缩合反应酮洛芬具有二苯甲酮结构，在酸性条件下可与二硝基苯肼缩合生成橙色偶氮化合物。取本品，加乙醇溶解后，加二硝基苯肼试液，加热至沸，放冷即产生橙色沉淀。3.重氮化-偶合反应：对乙酰氨基酚具潜在的芳伯氨基，在稀盐酸中加热水解生成对氨基酚，具有游离芳伯氨基结构，在酸性溶液中与亚硝酸钠试液进行重氮化反应，生成的重氮盐再与碱性-萘酚偶合生成红色偶氮化合物。4.水解反应：阿司匹林与碳酸钠试液加热水解，得水杨酸钠及醋酸钠，加过量稀硫酸酸化后，则生成白色水杨酸沉淀，并发生醋酸的臭气。 2 CH3COONa + H2SO4 2 CH3COOH +Na2SO4 双水杨酯与氢氧化钠试液煮沸后，加稀盐酸，即生成白色水杨酸沉淀；沉淀在醋酸铵试液中可溶解。5.氧化反应甲芬那酸溶于硫酸后，与重铬酸钾反应显深蓝色，随即变为棕绿色。 吲哚美辛溶液在硫酸存在下，与重铬酸钾溶液共热，应显紫色；在盐酸溶液中与亚硝酸钠溶液反应显绿色，放置后渐变黄色。 6.特征元素的反应(1)氯元素的鉴别 含氯药物与碱共热分解产生氯化物，显氯化物的鉴别反应。如双氯芬酸钠，与碳酸钠炽灼灰化，加水煮沸、滤过后，滤液显氯化物鉴别反应 (2)硫元素的鉴别 美洛昔康中含二价硫高温分解产生硫化氢气体，遇醋酸铅生成硫化铅黑色沉淀。如美洛昔康于试管中炽灼，产生的气体使湿润的醋酸铅试纸显黑色。7光谱法：(1)紫外可见分光光度法：a最大吸收波长法双氯芬酸钠 萘普生 吡罗昔康 美洛昔康b最大与最小吸收波长法，布洛芬c吸光度法甲芬那酸，d吸光度比值法，二氟尼柳(2)红外分光光度法8.色谱法：(1)薄层色谱法：二氟尼柳，美洛昔康(2)HPLC：阿司匹林 甲芬那酸 双氯芬酸钠 布洛芬 萘普生 吲哚美辛 对乙酰氨基酚特殊杂质检查1阿司匹林：游离水杨酸 ：乙酰化不完全 + 水解（精制、制剂、贮藏）产生，有毒性，酚羟基易氧化成有色醌类化合物，变色 。ChP 2010前用水杨酸与Fe3+ 生成紫堇色配离子的原理, 用稀硫酸铁铵溶液显色法检查，供试品溶液制备过程中阿司匹林水解产生新的游离水杨酸。所以ChP2010 ：1%冰醋酸甲醇溶液（防阿司匹林水解）制备供试品溶液采HPLC检查，ODS为填充柱，乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水为流动相，检测波长303nm，按外标法以峰面积计算，游离水杨酸不得超过0.1% ，2双水杨酯中游离水杨酸：利用水杨酸与三价铁生成有色配离子的原理, 用硝酸铁溶液显色, 在530nm的波长处测定吸光度, 限度为0.5%; 双水杨酯片同法检查, 限度1.5% 3二氟尼柳：有关物质A和B的检查：自身对照法 a 有关物质A的检查TLC(正相): 极性较小的杂质-单1杂质的限量为0.5%。b有关物质B的检查HPLC(反相):极性较大的杂质峰面积和不得大于对照溶液主峰面积0.5%含量测定：基于游离羧基的酸性，和芳环紫外吸收特性，主要用酸碱滴定法，制剂的检查性定量测定，如溶出度（释放度）含量均匀度等，用紫外可见分光光度法，制剂含量测定用紫外可见分光光度法和高效液相色谱法。羧基：酸碱滴定、非水滴定，酯基：剩余酸碱滴定苯环：紫外分光光度法、HPLC。1.酸碱滴定法：a非水溶液滴定法-吡罗昔康-吡啶环显碱性, 可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定。b直接滴定法：（苯甲酸钠）原料药分析(采用中性乙醇防止阿司匹林水解)c水解后剩余量滴定法-阿司匹林-两步滴定法：（阿司匹林片和肠溶片含量）第一步中和制剂中酸性物质，消除干扰。二步水解与滴定，水解后剩余量滴定法。d剩余量滴定法-美洛昔康-水及与水混溶的有机溶剂中难溶,溶于氢氧化钠滴定液后盐酸回滴定，特点：简单，但专属性差，易受阿司匹林的降解产物水杨酸及醋酸的干扰，故不适用于水杨酸含量较高的样品测定2.高效液相色谱法 ：流动相中添加冰醋酸是为抑制阿司匹林的解离, 消除色谱峰拖尾; 同时, 流动相及供试液中的醋酸也可抑制阿司匹林的水解，增加溶液稳定性。D为稀释体积(ml,D=50´100/5=1000);标示量为栓剂规格(mg/支) 第七章 苯乙胺类拟肾上腺素药物 肾上腺素 盐酸克伦特罗 硫酸沙丁胺醇 盐酸麻黄碱 间羟胺 盐酸异丙肾上腺素 盐酸多巴胺 硫酸特布他林理化性质1，弱碱性：,烃胺基侧链，仲胺氮弱碱性，游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂；其盐可溶于水2，酚羟基特性：邻苯二酚（或苯酚）结构，与金属离子络合呈色；在空气中或遇光、热易氧化，色泽变深；在碱性溶液中更易变色3，光学活性：手性碳原子，具有旋光性,4紫外吸收特性紫外、红外吸收特性进行定性、定量分析。5苯环取代基特性：如盐酸克伦特罗芳伯氨基； 鉴别反应1、与三氯化铁的反应(邻苯二酚)：肾上腺素：+ 0.1mol/L盐酸液翠绿；+氨试液紫红色。盐酸异丙肾上腺素：深绿色，+加新制5NaHCO3蓝紫色，红色。重酒石酸去甲肾上腺素：翠绿色，+5NaHCO3蓝色，红色。盐酸去氧肾上腺素：紫色。2、与甲醛硫酸反应：肾上腺素-红色；盐酸异丙肾上腺素-棕色，暗紫色 ；重酒石酸去甲肾上腺素-淡红色；盐酸去氧肾上腺素-玫瑰红，橙红，深棕红。3氧化反应：临酚羟基O醌类结；a肾上腺素H2O2血红色放置棕色；b盐酸异丙肾上腺素I2 H+淡红色、c重酒石酸去甲肾上腺素在酸性条件下稳定，几乎不被氧化。4，氨基醇双缩脲：苯环侧链有氨基醇乙醚层水层5，Rimini：脂肪伯胺，亚硝酸铁氰化纳，丙酮，NaHCO3，紫外，IR特殊杂质1酮体检查：酮体在310nm处有紫外吸收而药物没有。（肾上腺素 盐酸异丙肾上腺素 重酒石酸去甲肾上腺素 盐酸去氧肾上腺素 盐酸甲氧明）2. 光学纯度检查：大多数苯乙胺类拟肾上腺素药物分子结构中存在手性碳原子，通过比旋度测定控制药物的质量。3有关物质：去O N：TLC;其他：HPLC （盐酸氨溴索-HPLC 盐酸苯乙双胍-纸色谱法 其他均为TLC）含量测定1原料药：多用非水滴定，也用溴量法，亚硝酸钠法和提取酸碱滴定法2，制剂：提取酸碱滴定法UV 比色HPLC法1非水溶液滴定法（原料药：肾上腺素 盐酸克伦特罗 硫酸沙丁胺醇 盐酸麻黄碱 间羟胺 盐酸异丙肾上腺素 盐酸多巴胺 硫酸特布他林 重酒石酸去甲肾上腺素 盐酸去氧肾上腺素 盐酸甲氧明 盐酸苯乙双胍 盐酸伪麻黄碱 盐酸多巴酚丁胺）原理：在冰醋酸中碱性加强；冰醋酸为溶剂，滴定液：高氯酸；指示剂结晶紫（盐酸甲氧明以萘酚苯甲醇指示终点）；加入醋酸汞冰醋酸消除氢卤酸的干扰，终点判定：指示剂法、电位滴定法。非水溶剂种类：酸性-冰醋酸，碱性-二甲基甲酰胺，两性-甲醇，惰性-甲苯，三氯甲烷，甲苯适用范围：PKb>8有机弱碱性药物及其盐类，PKb8-13用本法，PKb8-10时冰醋酸作溶剂PKb10-12冰醋酸与醋酐>12醋酐。也可在冰醋酸中加入甲酸使滴定突跃增大2,溴量法（原料药：盐酸去氧肾上腺素 重酒石酸间羟胺）：分子中的苯酚结构，在酸性溶液中酚羟基的邻、对位活泼氢能与过量的溴定量的发生溴代反应，再以碘量法测定剩余的溴，根据消耗的硫代硫酸钠滴定液的量，即可算供试品含量。3紫外分光光度法及比色法 ：（制剂）利用分子结构中的酚羟基与铁离子络合呈色，测定盐酸异丙肾上腺素和盐酸多巴胺注射液；利用重氮化-偶合反应呈色，测定盐酸克伦特罗栓剂。4，亚硝酸钠法 5提取酸碱滴定法：游离出原药6，HPLC第八章 对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类（芳胺类）对氨基苯甲酸酯类：苯佐卡因，盐酸普鲁卡因，盐酸氯普鲁卡因胺，盐酸丁卡因等局麻药酰苯胺类：（水解后显芳伯胺特性）盐酸利多卡因，盐酸布比卡因，盐酸罗哌卡因，对乙酰氨基酚，醋氨苯砜理化性质:芳伯胺基（除盐酸丁卡因外，仲胺基）特性：显重氮化偶合反应。1.芳伯氨基：重氮化偶合反应；用NaNO2滴定可测含量，与芳醛缩合成Schiff碱；易氧化变色等。2.水解：因分子中有酯键，故易水解.水解反应速度快慢受光、热或碱性条件影响；盐酸丁卡因BABA，其余药物PABA3.弱碱性：叔胺氮原子，生物碱沉淀剂发生沉淀反应，非水溶剂滴定4.溶解性：游离碱，油状液体或低熔点固体难溶于水，易溶于有机溶剂；盐酸盐白色结晶粉末，具一点的熔点，易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂5，重金属离子反应酰胺基上的N可在水溶液中与铜离子或钴离子络合，形成有色配位化合物沉淀，溶于氯仿呈色6，吸收光谱特性：苯环及相应取代基于脂烃胺侧链，有UV,IR行为。鉴别反应 1、重氮化-偶合反应Ar-NH2 -Hcl、/NaNO2重氮盐OH和-萘酚橙黄-猩红色沉淀.1直接法(苯佐卡因、盐酸普鲁卡因) 橙黄-猩红色沉淀。2间接法(盐酸丁卡因无芳伯胺基酸性条件乳白色沉淀)红色.2、三氯化铁反应（对乙酰氨基酚）：具酚羟基的芳胺类药物+FeCl3蓝紫色配合物3、与重金属离子的反应a盐酸利多卡因的鉴别(具有芳酰胺结构):硫酸铜/碳酸钠试液蓝紫色配合物显黄色(溶于氯仿)/氯化钴/酸性溶液亮绿色细小钴盐沉淀b.盐酸普鲁卡因胺的鉴别(具有芳酰胺结构):浓过氧化氢/加热至沸羟肟酸 三氯化铁羟肟酸铁变紫红色，随即变为暗棕色至棕黑色.c.与汞离子反应：芳酰胺类，如盐酸利多卡因 ，硝酸汞/硝酸煮沸变黄色；对氨基苯甲酸酯类，如苯佐卡因：硝酸汞/硝酸煮沸变红色或橙黄色.4、水解产物反应：a.盐酸普鲁卡因(的鉴别)10氢氧化钠溶液白色(普鲁卡因)加热变为油状物；继续加热 蒸气(二乙氨基乙醇)能使润湿的红色石蕊试纸变为蓝色；加热至油状物消失放冷、加盐酸酸化白色(对氨基苯甲酸)能溶于过量的盐酸.b.苯佐卡因(鉴别)氢氧化钠试液5ml 煮沸乙醇，加入碘试液/加热 黄色并发生碘仿臭气. 5、制备衍生物测熔点：a.盐酸利多卡因/盐酸布比卡因 三硝基苯酚 (滤过，用水洗涤沉淀后105干燥)三硝基苯酚利多卡因(mp. 228232)/ (80干燥)三硝基苯酚布比卡因(mp. 194).b.盐酸丁卡因 25硫氰酸铵溶液/5醋酸溶液 白色晶体，洗涤80干燥后得丁卡因硫氰酸盐( mp. 131 )。特殊杂质1盐酸普鲁卡因(对氨基苯甲酸) ：1杂质来源：水解产生对氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇 。结果导致注射液变黄、疗效下降、毒性增加。原料药及注射用灭菌粉末中杂质限量 ：£0.5%。注射液中杂质限量 ： £1.2% 2检查：（1）HPLC杂质对照品法。固定相：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：0.1%庚烷磺酸钠的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.0)-甲醇(6832)；检测波长：279；系统适用性试验：理论板数按对氨基苯甲酸峰计算不低于2000；盐酸普鲁卡因峰和对氨基苯甲酸峰的分离度应大于2.0 ；外标法以峰面积计算。（2）TLC法：硅胶H板，苯-HAc二甲氨基苯甲醛显色3有关物质和光解物检查：4-氨基-2-氯苯甲酸降解2，对乙酰氨基酚：1）乙醇溶液的澄清度与颜色2）有关物质：TLC，杂质斑点颜色，个数3 ）对氨基酚 与亚硝基铁氰化钠反应显蓝色，不得更深含量测定1亚硝酸钠滴定法：原理：芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反应，生成重氮盐，用永停法电位法或内指示剂法外指示剂法（KI-淀粉） 指示反应终点。 条件A.加入适量溴化钾加快反应速度，增加NO+浓度B.加入适量盐酸加快反应速度C.反应温度越高反应越快，但温度高时重氮盐分解加快，HNO2也会挥发D.滴定速度不宜太快，滴定管尖端插入液面下滴定。示例8-5 盐酸普鲁卡因的含量测定： 取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法，在1525，用亚硝酸钠滴定液滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于27.28mg的C13H20N2O2HCl。永停滴定法：铂铂电极系统。用亚硝酸钠液滴定，终点前，溶液中无亚硝酸，线路无电流，电流计指针零。终点时溶液中有微量亚硝酸存在，电极即起氧化还原反应，线路中有电流通过，此时电流计指针突然偏转，不再回复，即为终点。2非水滴定法(盐酸丁卡因、盐酸利多卡因、盐酸妥卡因：三者结晶紫显色蓝绿 盐酸布比卡因：萘酚苯甲醇显色绿色)滴定前滴加醋酸汞溶液，以除去氢卤酸的干扰非水滴定法中常见酸根的影响及其消除方法氢卤酸根：算性强，无法完全滴定，消除方法：加入氯化汞的冰醋酸溶液。硝酸根：滴定产生硝酸，会氧化显色剂影响显色剂显色，消除方法：改用电位法滴定。比较直接滴定法和两部滴定法测定阿司匹林含量优缺点：直接滴定法：阿司匹林中性乙醇溶解后其中的羧基和氢氧化钠反应，酚酞指示终点。快速简便，不能排除水杨酸干扰。两部滴定法：先中和酸性杂质和羧酸，然后定量加入过量的氢氧化钠，定量与酯键反应，剩余的用酸滴定至终点即可，可消除水杨酸干扰，但操作较麻烦。举例说明芳香胺类药物的含量测定方法芳香第一胺的重氮化偶合，硝酸银沉淀反应，生物碱沉淀剂的沉淀反应。亚硝酸钠滴定：酸性条件生成重氮盐，电位法指示终点，亚硝酸钠为滴定液。非水滴定：与高氯酸滴定液中的中和反应（先加氯化汞）高氯酸滴定液，电位法或结晶紫指示终点。第九章 二氢吡啶类药物二氢吡啶类理化性质：1二氢吡啶环的还原性，2硝基的氧化性，3二氢吡啶环氨基质子解离性，4稳定性，光化学反应5旋光性，6吸收光谱特性鉴别反应：1亚铁盐反应：硝基氧化性红棕色氢氧化铁沉淀2氢氧化钠试液：药物丙酮溶液橙红色 （鉴别硝苯地平、尼群地平、尼索地平）3沉淀反应;与金属盐形成沉淀HgCl白色 碘化铋甲 橙红色4重氮化偶合反应：苯环硝基在酸性下被锌粉还原为芳伯氨基，可用重氮化偶合反应鉴别5分光光度法：紫外红外有关物质检查：分子内部因发生光化学歧化作用，降解为硝苯吡啶衍生物及亚硝苯吡啶衍生物，大多采用HPLC法，亦分为对照品法和自身对照法.含量测定;铈量法：利用还原性，以Ce(SO4)2为标准溶液的滴定法，Ce4+变为Ce3+。邻二氮菲为指示液，强酸条件，橙红色消失第十章 巴比妥及苯并二氮杂坐类镇静催眠巴比妥类药物分析主要性质：环状酰胺类镇静催眠药基本母核：丙二酰脲基团决定共性.取代基决定个性.性质：酮式烯醇式互变.弱酸性，可用于该类药物的分离，鉴别，检查和含量测定与金属离子反应：专属性不强，用于鉴别和含量测定.A与银盐反应：在Na2CO3溶液中，最初生成白色沉淀，振摇后可溶解，之后生成白色沉淀，不再溶解.B与铜盐反应：在吡啶溶液中生成烯醇式异构体，并与铜形成稳定的配合物，巴比妥类呈紫色，含硫巴比妥呈绿色.C与汞盐呈白色沉淀(氨试液中溶解)D、与钴盐反应：无水条件下与钴盐在碱性溶液中生成紫堇色配合物.E与香草醛反应：丙二酰脲中的氨与香草醛在弄硫酸存在下缩合，生成棕红色产物.显微结晶：巴比妥为长方形结晶，苯巴比妥在开始结晶时呈现球形，后变为花瓣形.用于同类或不同类药物鉴别，或生物样品中微量药物的检验.水解反应：有酰亚胺结构，与碱液共沸即水解，释放出氨气（鉴别戊巴比妥和巴比妥）紫外吸收特征（巴比妥240nm、硫巴比妥287、238nm）薄层色谱 鉴别试验:一、丙二酰脲类鉴别试验：银盐反应（白色沉淀），铜盐反应（紫色或紫色沉淀）.二、测定熔点.三、特征基团反应.1、利用不饱和取代基的鉴别试验：a与碘试液反应：棕黄色应在5min内消失.b与高锰酸钾反应：生成棕色的二氧化锰.2、利用芳环取代基的鉴别试验：a硝化反应，生成黄色硝基化合物.b与硫酸亚硝酸钠反应，生成橙黄色产物并随即变为橙红色c、与甲醛硫酸反应生成玫瑰红色产物.3、硫元素反应：在NaOH中与铅离子反应生成白色沉淀，加热后生成黑色硫化铅.四、IR特殊杂质检查苯巴比妥.酸度检查，甲基橙不得显红色（控制苯基丙二酰脲）.乙醇溶液澄清.中性或碱性物质检查（2-苯基丁酰脲、2-苯基丁酰胺不溶于氢氧化钠但溶于乙醚），提取重量法测杂质含量.苯巴比妥含量测定：银量法、溴量法、酸碱滴定法、UV