水栀子与栀子高效液相色谱指纹图谱比较研究.doc

水栀子与栀子高效液相色谱指纹图谱比较研究LISHIZHENMED1CINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.11时珍国医国药2010年第2l卷第11期国药鉴别水栀子与栀子高效液相色谱指纹图谱比较研究侯志飞,王刚.,孙国祥(1.河北化工医药职业技术学院,河北石家庄050026;2.沈阳药科大学药学院,辽宁沈阳110016)摘要:目的建立栀子和水栀子的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱并进行比较研究.方法采用反相高效液相色谱法,使用CenturySILCBDS柱(20em×4.6mm.5m),以1%醋酸水一l%醋酸乙腈为流动相,低压线性梯度洗脱,检测波长265nm.枉温(30.0±0.15),进样量5Ixl,测定栀予和水栀子的HPLC指纹图谱.结果以栀子苷峰为参照物峰,确定35个共有峰,将水栀子和栀子的HPLC指纹图谱进行比较,并用”中药色谱指玟图谱超信息特征数字化评价系统”软件对其进行全面评价.结论水栀子在化学成分分布上与栀子极为相似,但各组分的含量相差较大.关键词:水栀子;栀子;高效液相色谱指纹图谱D0I标识:doi:10.3969/i.issn.1008-0805.2010.11.108中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编号:10080805(2010)11-29432HPLCDigitalFingerprintsofFructusGardeniaeandFructusGardeniaeGrandifloraeHOUZhifei,WANGGang,SUNGuoxiang(1.PharmacologicalEngineeringDepartment,HebeiChemicalandPharmacologicalCollege,Shifiazhuang050026,China;2.CollegeofPharmacology,ShenyangPharmacologicalUniversity,Shenyang110016,China)Abstract:ObjectiveToinvestigatethedifferencesbetweentheHPLCfingerprintsofFructusGardeniaeandFructusGardeniaeGrandifloro,e.MethodsThechromatographicfingerprintswereobtainedbyinjectingthesamplesolutioneachtimeonaCenturySILCl8BDScolumn(20cm×4.6mm,5Ixm)withthegradientelutionsolventsystemcomposedof1%acetateacidwaterand1%acetateacidacetonitrile.Theflowratewas1.0ml/min,thecolumntemperaturewasmaintainedat(30.O0±0.15)andthedetectionwavelengthwassetat265nm.Results35COpossessingpeakswereselectedasthefingerprintpeaksbytakingGeniposidepeakasthereferencepeak.Thefingerprintswerecomparedandcomprehensivelyevaluatedby”ThedigitizedevaluationsystemoftheTraditionalChineseMedicinefingerprintwiththesuperinformationcharacteristics”.ConclusionThereweregoodsimilaritiesbetweentheHPLCFPsofFructusGardeniaeandFructusGardeniaeGrand1oraeintermsofthedistributionofchemicalingredients,butthequantitativesimilaritywasnotdesirable.Keywords:FructusGardeniae;FructusGardeniaeGrandiflorae;HPLCdigitalfingerprint栀子为茜草科植物栀子GardeniajasminoidesEllis的干燥成熟果实,2005年版中国药典作为正品入药的栀子仅此一种.水栀子则为同科植物大花栀子GardeniajasminoidesEllisyar.grandifloraNakai的果实.水栀子为栀子的一个变型,果实较栀子长,历来只作染料用或外用治扭挫伤等,栽培于水溪岸旁,分布于江西,广西,贵州,湖北,湖南,四川等地.研究发现,水栀子中含栀子苷高于栀子1倍多,且有利胆和抗炎作用,均比栀子更显着.为了能充分利用与开发水栀子的宝贵资源,本文从指纹图谱角度对水栀子与栀子作全面比较,为其药材鉴别及开发利用提供科学依据.1仪器与试药Agilent1100型液相色谱仪(配有二极管阵列检测器,低压四收稿日期:200910-27;修订日期:2010-05-20基金项目:国家自然科学基金重大研究计划项目(No.90612002)作者简介:侯志飞(1982?),女(汉族),河北涿鹿人,现任河北化工医药职业技术学院讲师,硕士学位,主要从事中药有效成分及中药质量标准研究工作.通讯作者简介:孙国祥(1962一),男(汉族).辽宁凌源人,现任沈阳药科大学教授,博士研究生导师,博士学位,主要从事中药指纹图谱研究X-作.元梯度泵,在线脱气装置,自动进样器),ChemStation工作站(Agilent科技有限公司).KQ一50B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),旋转蒸发仪RE52(上海亚荣生化仪器厂),SarturiUSBS110S分析天平(北京赛多利斯天平有限公司).栀子苷(中国药品生物制品检定所),乙腈(色谱纯,山东禹王实业有限公司),冰醋酸(色谱纯,天津市科密欧化学试剂开发中心),其它试剂均为分析纯,所用水为去离子水.1O批栀子药材产自S1河南唐河县,s2贵州铜仁,s3安徽池州东至县,S4河南桐柏县,s5云南威信县,s6云南省红河哈尼族彝族自治州,s7浙江五凤乡,s8四川达县,s9江西金溪县,SlO广西鹿寨县.l0批水栀子药材产自P1江西樟树市,P2广西富川县,P3广西全州县,P4广西柳州市,P5浙江安吉县,P6湖北广水市,P7湖北襄樊市,P8江西抚州市,P9四川开江县,P10湖南龙山县.2方法2.1样品溶液制备2.1.1供试液制备栀子于60干燥40rain,粉碎后取约2.5g,精密称定,加水50ml,回流提取2h,滤过,残渣加水30m1,继续回流1.5h,合并两次滤液,减压浓缩至2Oml,加乙醇至80%(V/?2943?时珍国医国药2010年第2l卷第11期LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.11V),冷处避光放置,醇沉24h,滤除沉淀,减压回收乙醇至无醇味,残液再用水定容至25ml,摇匀,即得.同法可得水栀子供试液:2.1.2对照品溶液制备精密称取栀子苷对照品5.0mg,置25ml量瓶中,以甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,即得=2.2色谱条件CentuSILc】8BDS柱(25cnlx4.6mm,5m),所用A=1%醋酸水,B=乙腈(含1%醋酸),低压线性梯度程序:03rain,00%B;39rain,05%B:922min,510%B:2230rain,1012.5%B;3045rain,l2.530%B:455Orain,3036%B;5075rain,3686%B;流速1.0ml?rain,柱温(30±0.15),进样量5l,紫外检测波长265nm.3结果与讨论3.1栀子HPLC指纹图谱的建立3.1.1参照物峰选择将栀子苷对照品溶液和栀子样品供试液分别进样5l.对比保留时间及在线紫外光谱图可知栀子苷峰在23.6rain左右.由于栀子苷峰与相邻峰分离很好,在删定时比较稳定,峰面积较大,因此选作参照物峰.3.1.2指纹图谱方法学考察经指纹图谱方法学考察,各项指标均符合要求.3.1.3栀子HPLC指纹图谱建立按”2.2”项条件将1O个不同产地栀子供试液在HPLC仪上进样分析,记录色谱图,比较分析并以出现率100%计,确定35个共有峰,见图1将l0批栀子色谱图原始信号导入孙国祥等开发的”中药指纹图谱超信息特征数字化评价系统”软件生成对照指纹图谱(平均值法)数据(见表1)结果l0批栀子与对照指纹图谱的相似度S0.936.图l栀子的HPLC指纹图谱表l栀子对照HPLCFP峰信息峰号相筹留血冬县相对保留相对峰峰号相对保留相对峰峰号相留时间面积.时间面积l0.11O.05lOO.53O.11l91090.04281.77O.172O.24O.O2l10580l12Ol170.04291.790.2730,320.O2l20.62().O22l1.2OO.0330l8l0.0240.35OO2l30.65O.03221530.043l1.83O.O25O.380.0514072004231.550.0932I.85O.O360.400.O2l50.740.12241.580.05331.990.0470440.O2160.82O.05251.650.04342.12O.O280.470.0317O.880.1326l68O.O3352.15O.O390.500.05l8l00l0027l750.043.2水栀子的HPLC指纹图谱建立按”2.2”项条件将lO个不同产地水栀子供试液在HPLC仪上进样分析,记录色谱图,比较分析并以出现率100%计,确定35个共有峰,见图2.将l0批水栀子色谱图原始信号导人孙国祥等开发的”中药指纹图谱超;信息特征数字化评价系统”软件生成对照指纹图谱(平均值法)数据见表2.以夹角余弦为测度计算l0批水栀子与对照指纹图谱的相似度S0.92l.表2水栀子对照HPLCFP峰信息f/mm图2水栀子的HPLC指纹图谱峰号相留蝰号相对保留相对峰峰号相留峰号相留.时间面积10.100.06lOO.500.04l91.080.O3281.67O.052O.25O.02¨0540.09201.150.O5291.69O.233O.33O.O3l2O.590.O3211.190.033O1.7l0.Ol4O.350.06l30.620.O2221.460.05311.730.0350.370.03l40.670.O523I.480.0732I.75O.O260390.0615O.730.09241.51O.03331.89O.0170.4lO.01l60.760.04251580.02342.O00.0480.440.02l70.900.1026l600.02352.020.0490.470.O2【81.0O1.O0271.66O.O13.3水栀子和栀子HPLC指纹图谱超信息特征数字化评价结果分析由”中药色谱指纹图谱超信息特征数字化评价系统”软件分别计算得水栀子和栀子HPLC指纹图谱超信息特征数字化评价结果,选择代表性指标进行比较,见表3(表中数据为二者对照指纹图谱数据):从表3中可见:水栀子的和6值都比栀子的相应数值小,说明其指纹信号均化性差.水栀子的77值较大,说明其色谱空间占有率较大:水栀子的平均峰高较大.指纹图谱指数,和指纹图谱信息量指数I是反映指纹信号强度,信号大小均性,分离程度的综合指数,水栀子的,I和,值都?2944?较大.表3栀子和水栀子HPIc指纹图谱超信息特征数字化评价结果序号Para水栀子栀子序号Para水栀子栀子5A0.4040.41228f33.2317860.4310.4822965.551.2901680.13233,l6.214.420H一031524.934lr31.9262将”3.1.3”中栀子对照指纹图谱和”3.2”中水栀子对照指纹图谱信号导人”中药指纹图谱超信息特征数字化评价系统”软件,以栀子对照指纹图谱作为参照,计算得水栀子对照指纹图谱LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.11时珍国医国药2010年第21卷第11期的定性相似度s为0.986,总积分面积百分值为182.3%.可见水栀子与栀子在化学成分分布上极为相似,但各组分的含量相差较大,水栀子中各成分总含量显着高于栀子将水栀子与栀子的对照指纹图谱进行比较,见图3:从各指纹成分来看,除10,28,30和33号峰外,水栀子中各峰的含量均等于或高于栀子中相应峰的含量,其中4,6,18和29号峰比栀子中相应峰的含量高了约1倍.1234567891031121314151617181920212223242526272829303132333435PeakNo图3水栀子对照指纹图谱与栀子对照指纹图谱比较图4结论本实验建立了水栀子和栀子的HPLC指纹图谱,用”中药色谱指纹图谱超信息特征数字化评价系统”软件,采用多个量化指标从多维角度,多侧面,全方位,宏观定性定量揭示了水栀子HPLC指纹图谱隐含的超信息特征,并比较了水栀子与栀子HPLC指纹图谱的差异,水栀子与栀子在化学成分分布上极为相似,但各组分的含量相差较大,这为进一步开发利用水栀子提供了依据,也为进行药效学研究奠定了基础.参考文献:1付小梅.赖学文.葛菲,等.中药栀子类药材资源调查和商品药材鉴定J.中国野生植物资源,2002,21(5):23.一2付小梅,葛菲,褚小兰,等.栀子和水栀子利胆抗炎作用的对比研究:】.江西中医学院,2001,13(4):165.:3:孙国祥,侯志飞,董鸿晔,等.超复方中药指纹图谱多维多息特征数字化评价方法研究M.杭州:浙江大学出版社,2006:127.大叶千斤拔与蔓性千斤拔的高效液相色谱指纹图谱鉴别研究任朝琴,刘圆,袁玮.(1.阿坝师范高等专科学校,四川I汶川623000;2.西南民族大学少数民族药物研究昕,四川成都610041)摘要:目的鉴别大叶千斤拔,蔓性千斤拔:方法采用HPLC法,KrosmasilC柱(250Him×4.6mm,5m),乙腈一水梯度洗脱,检测波长为274nm,流速为1ml/min,柱温为30:结果在选定色谱条件下,建立了稳定可控的高效液相色谱图;应用主成分分析法,系统聚类分析法将药材分成两类,并计算相似度:结论应用高效液相色谱法鉴别大叶千斤拔,蔓性千斤拔是可行的.关键词:高效液相色谱指纹图谱法;大叶千斤拔;蔓性千斤拔;系统聚类法;主成分分析D0I标识:doi:10.3969/i.issn.1008-0805.2010.11.109中图分类号:R282.5文献标识码:A文章编号:1008-0805(2010)112945-()2StudyonMoghaniamacrophylla(Willd.)O.KuntzeandMoghaniaphilippinensis(Merr.etRolfe)LibyHPLCFingerprintRENChao.qin,LIUuan,YUANWei(1.ABaNormalCollege,Wenchuan,Sichuan623000,China;2.SouthwestUniversityforNationalities,Chengdu610041,China)Abstract:ObjectiveToidentifyMoghaniamacrophylla(Willd.)O.KuntzeandMoghaniaphilippinensis(Merr.etRolfe)Li.MethodsThefingerprintswereobtainedfromaters2695instrument:theseparationofHPLCfingerprintswasperformedonaKrosmasilClHanalyticalcolumnandgradientelutedwithacetonitrilewaterattheflowrateof1ml/min.Thetemperature0fcolumnwas30oC.TheUVdetectionwavelengthwas274mr1.ResultsPrincipalcomponentsanalysisandclusteringanalysiswereusedintheidentificationofthesamplesandthesimilitudewascalculatedbycompute17.ConclusionThemethodcanidentifyMoghaniamacrophylla(Willd.)O.KuntzeandMoghaniaphilippinensis(Merr.etRolfe)IJi.Keywords:HPLCFingerprint;Moghaniamacrophylla(Willd.)0.Kuntze;Moghaniaphilippinensis(Merr.elRolfe)Li.;Clusteringanalysis;Principalcomponentsanalysis收稿日期:200911-06;修订日期:2010-04-07基金项目:国家科技支撑计划重点项目(No.2007BAI25B05):四川省青年基金项目(No.07ZQ02601J):国家中医药管理局(No.0607ZP43)作者简介:任朝琴(1983一),女(藏族),四川阿坝小佥县人,现任阿坝师范高等专科学校助教.硕士学位,主要从事化学与少数民族药物的研究和教学工作.通讯作者简介:刘圆(1968一),女(汉族),重庆人,现任西南民族大学少数民族药物研究所教授,博士学位,主要从事少数民族药物的研究和教学工作.中国药典2005版l部中收载千斤拔为豆科植物蔓性千斤拔M.ghaniaphilippinensis(Merr.etRolfe)Li,大叶千斤拔ghaniamacrophylla(Willd.)O.Kuntze或绣毛千斤拔Moghaniaferruginca(wal1.exBenth.)Li.的干燥根.为目前市面上治疗效果和销量较好的妇科千金片的君药,具有镇痛,抗炎作用,可治疗妇科病蔓性千斤拔,大叶千斤拔分布较广,主产于江西,福建,湖北,湖南,广西,广东,四川及中国台湾等省区=由于千斤拔类药材称谓比较复杂,在药材商品流通和临床使用时很容易混淆,.2945.O0000OOO0O0000瑚湖m.