HPLC法测定龙芪柔肝胶囊中丹参酮‖A的含量中药学专业毕业论文.doc

毕业论文HPLC法测定龙芪柔肝胶囊中丹参酮A的含量 系 别：生物技术系 班 级：中药制药2班 姓 名： 学 号： 指导老师： 目录 摘要1. 前言 1.1龙芪柔肝胶囊简介（3） 1.2处方分析（3） 1.3中药药理学分析（3） 1.4 小结（3）2.正 文 2.1.仪器与试药（3） 2.1.1仪器(3) 2.1.2试药(3) 2.2.方法与结果 (3) 2.2.1 对照品溶液的制备 (3) 2.2.2供试品溶液的制备 (4) 2.2.3色谱条件(4) 2.2.4线性关系的考察(4) 2.2.5精密度试验 (4) 2.2.6重复性试验 (4) 2.2.7稳定性试验 (4) 2.2.8加样回收率试验(4) 2.2.9样品的含量测定（4）3.讨 论3.1 检测波长的选择（4） 3.2 色谱条件的选择（4） 3.3 提取方法的选择（4） 3.3.1 药品预处理（5） 3.3.2 供试品溶液的提取（5） 3.3.3 供试品的筛选（5）4.参考文献（5）5.致谢（5） HPLC法测定龙芪柔肝胶囊中丹参酮A的含量摘 要 目的：建立HPLC法测定龙芪柔肝胶囊中丹参酮A含量的方法。方法：选用Anjilent C18柱（250mm×4.6mm,5um）,以甲醇：水（20:80）为流动相，流速1.0ml·min-1,检测波长270nm,柱温25。结果：丹参酮IIA 在16.96152.64ugml间呈良好的线性关系(R2=0.99969),平均加样回收率为101.32%（RSD=2.8n=5）；结论：该方法快速、准确、精密，可用于龙芪柔肝胶囊的质量控制。关键字：HPLC法；龙芪柔肝胶囊；丹参酮IIADetermination of TanShinone Tong A in the LongQi Capsules by HPLCABSTRACT Objective: To establish an HPLC method for the TanShinone Tong A in the LongQi Capsules. Method :The analysis was performed on a column of Anjilent C18 （250mm×4.6mm,5um）.The mobile phase consisted of methanol and water （20:80）with the flow rate of 1.0ml·min-1.The detection wavelength was 270nm and the column temperature was 25 . Result: Promising linearity was obtained within the range of 16.96152.64ugml for TanShinone Tong A . The average recovery of TanShinone Tong A was R2=0.99969. Conclusion :This method is rapid and accurate and can be used to control the quality of TanShinone Tong A.KEY WORDS : HPLC ; TanShinone Tong A ; LongQi Capsules1. 前 言1.1龙芪柔肝胶囊简介 龙芪柔肝胶囊为信阳市中医院院内制剂，由黄芪、丹参、党参、 生地黄、北沙参、当归、地龙、醋白芍、鳖甲、黄精、五味子、灵芝、桃仁、红花、炒穿山甲共15位中药制备而成。主治慢性病毒性肝炎，肝纤维化、肝硬化等症。具有益气养阴，活血柔肝的功效。方中地龙有较强的异味，穿山甲属名贵药材以打粉入药。因胶囊剂具有能够掩盖药物不良臭味，载药量大的特点，故选用胶囊剂4。1.2处方分析方中以黄芪、地龙为君药，以丹参、当归、生地黄、北沙参、党参为臣药。方中黄芪甘温入脾肺经，补中气、升清阳，益肺气、实皮毛，以扶正；地龙同入肝脾经，息风止痉，通络，以开血脉阻滞，二者共为君药。丹参、当归并用，生血、活血且化瘀、通络而不伤血；生地、北沙参并用，滋阴而又养阴；党参补气以行血；五者共为臣药。取君二臣五，奇之制之意。五味子、醋白芍共同辅助君药抑阳敛阴，以柔肝；鳖甲、黄精、灵芝共用助君药滋补肝阴。五者共为佐药。桃仁、红花活血祛瘀，穿山甲消肿排脓，三者共同引药归经，均为使药。本方为补中益气汤（脾胃论）和补阳还五汤（医林改错）的复合方。一为补气，一为活血祛瘀，二者并用以达到益气养阴、活血柔肝的功效5。1.3 中药药理学分析 黄芪主含多糖类和皂苷类成分，能增强非特异性免疫功能，包括增加WBC和中性粒细胞、Mø吞噬功能。地龙提取物口服，对小鼠S180和H22均有抑瘤作用，并可增强5-Fu受体活化，从而增强免疫细胞的活性。丹参中主含丹参酮A ，丹参酮A 磺酸钠可抑制心肌收缩力，降低窦房结自律性，能促进肝、骨、皮肤等多种组织的修复与再生，其中促进肝组织的修复与再生尤为显著3。因此丹参酮A 也是本药的重要和关键性成份。1.4 小结本文重点探索了HPLC法测定龙芪柔肝胶囊中丹参酮A含量时方法的建立及优化，为全面评价该制剂质量和完善本复方制剂的质量提供实验依据。2.正 文2.1.仪器与试药2.1.1仪器Agilent-1200液相色谱仪(美国Agilent公司，Agilent-1200检测器，Agilent工作站)；Waters-1525液相色谱仪（Waters公司， Waters2489柱温箱 Breeze工作站）；普利赛斯双量程电子天平(美国塞利普斯公司)；超纯水机（基因型185OD重庆摩尔制水设备有限公司）；超声仪（宁波新芝生物科技有限公司）。2.1.2试药丹参酮A对照品（规格：20mg支，110766-200518，中国药品生物制品检定所）；甲醇（色谱纯，美国Agilent公司）；龙芪柔肝胶囊（信阳市中医院制剂室，规格：60粒瓶，批号：20110410 、20110512 、20110823）；水（信阳市药检所中药实验室制水机，一级水）；其他试剂均为分析纯。2.2.方法与结果2.2.1 对照品溶液的制备 取丹参酮A对照品10.6mg置25ml容量瓶中，精密称定，加甲醇定容。用1ml移液管移取配置好的对照品溶液，另置25ml容量瓶中，加甲醇定容，即得。配得的对照品溶液浓度为16.96ugml.2.2.2供试品溶液及阴性样品的制备 取本药品5份，每份3.2g，精密称定。分别置同型号250ml具塞锥形瓶中，各加入25ml甲醇。精密称定。超声提取30min。放至室温，精密称定，用甲醇补足损失的量。过滤，取续滤液，即得。模拟处方的制备方法，制备不含丹参的阴性样品，按供试品制备方法制备成阴性样品溶液。表1 取样量 超声前 超声后 补足后1号实验 3.1873 116.3690 116.3269 116.36422号实验 3.1770 112.2992 1123.2871 112.29313号实验 3.1933 94.3075 94.2945 94.30214号实验 3.2188 104.3507 104.3348 104.35205号实验 3.1842 88.1713 88.1548 88.17482.2 .3色谱条件 色谱柱：Agilent C18柱（250mm×4.6mm,5um）；流动相：以甲醇：水（20:80）为流动相；流速：1.0ml·min-1；检测波长：270nm；柱温：25。理论板数按丹参酮A峰计算应不低于2000。分离度1.5；龙芪柔肝胶囊中其他成分对丹参酮A含量的测定无影响。 1.对照品 2.供试品 3.缺丹参对照品2.2.4线性关系的考察待添加的隐藏文字内容3精密吸取配置好的丹参酮A对照品溶液1ul、3ul、5ul、7ul、9ul注入高效液相色谱仪，依法测定，以峰面积积分值为纵坐标（Y），以进样量（ug）为横坐标（X）,绘制标准曲线。结果表明丹参酮A在16.96152.64ugml范围内呈良好的线性关系。回归方程为：Y=5759589X-101938;R2=0.99969.进样量 进样量（g） 保留时间 峰面积 %面积 1微升 15.511 2573.0000 75.463微升 15.537 183679.0000 82.315微升 15.511 383743.0000 91.797微升 15.504 580916.0000 97.889微升 15.496 781003.0000 91.912.2.5精密度试验取中间上述2.5对照品注入高效液相，重复进样6次，每次进样5ul。记录丹参酮A峰面积，结果丹参酮ARSD=1.69(n=5)2.2.6重复性试验 取同一批号供试品，按2.3项下方法制备5份供试液，分别进样，测定峰面积，计算丹参酮A的平均含量为0.081·g-1，其RSD=2.67 （n=5）。2.2.7稳定性试验取同一供试品溶液，分别在0、3、6、9h按上述色谱条件试验，记录丹参酮A峰面积积分值，结RSD=3；表明供试品溶液在9h内基本稳定。2.2.8加样回收率试验精密称定已测定含量的样品（16.96 ugml），共取5份，每份3.2g，按2.2项下方法制备供试品溶液。分别精密加入丹参酮A对照品储备液1ml，进样。计算丹参酮A含量并计算回收率为101.32%RSD=2.8(n=5)。2.2.9样品的含量测定取3批龙芪柔肝胶囊样品，按上述供试品溶液的制备方法制备，并按上述色谱条件测定丹参酮A含量。结果=0.081·g-13.讨 论3.1 检测波长的选择经过Agilent-1200 三维图谱分析，发现在270nm,275nm处均有吸收峰，且吸收系数均较大，考虑到龙芪柔肝胶囊药味比较复杂，对丹参酮A的检测容易产生干扰，因此选择检测波长为270nm。3.2 色谱条件的选择曾用甲醇：水（25:75）作为流动相1，但丹参酮A峰形有拖尾，用于定量分析不准确。经过试验，调整流动相为甲醇：水（20:80）。峰形明显改善。影响峰形的因素是否还与其他因素（如pH）有关，尚需进一步研究。3.3 提取方法的选择3.3.1 药品预处理取龙芪柔肝胶囊4份，每份3.2g，精密称定。分别置250ml具塞锥形瓶中。编号为回1、回2、超1、超2。各瓶精密加入甲醇50ml,称定重量。 3.3.2 供试品溶液的提取 对回1进行30min回流提取，对回2进行45min回流提取。对超1进行超声30min超声提取，对超2进行45min超声提取1。3.3.3 供试品的筛选将上述四瓶供试品放至室温，精密称定，补足损失的量，过滤。取续虑液，用HPLC进行检定。发现30min时即提取完全。且超声提取优于回流提取。4.参考文献1国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部s.北京;中国医药科技出版社,2010：2张德钦.中药分析制剂技术.北京.中国中医药出版社3方泰惠.吴清和.中药药理学.北京.科学出版社4陈琼.中药制剂技术.北京.中国农业大学出版社5王均宁.薛建国.方剂学.北京.科学出版社6凌一揆.中药学.上海.上海科学技术出版社7唐丽琴，张善堂，陈象青，等.HPLC法测定不同来源补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量m.中国药师，2011，(3):377378