紫格醇脂质体细菌内毒素的检测.doc

紫格醇脂质体细菌内毒素的检测中国医药工业杂志ChineseJour几alofPharmaceutlcal2001.32(6文章编R-:1001-8885(2001)06086603紫杉醇脂质体细菌内毒素的检测张震宇,章小萍,马玉萍,唐黎明(海市药品检验所.上海008230)摘要:对注射用紫杉醇脂质体中的细苗内毒素检查方法进行了研究=以60乙醇溶液作为溶剂破坏脂质体后进行试验.结果表明,6O的乙醇溶液列细菌内毒索的话性无明显影响4的乙醇溶液和0.17rag/m的供试品藩液对鲎试剂和细菌内毒素的凝集反应无明显干扰.美建词:紫杉醇;注射用脂质体;细菌内毒素检查中圈分类号TQ46O.72文献标识码:A目前抗癌药物常采用脂质体为载体,提高其疗效和耐受性,降低毒副作用”.紫杉醇(1)是一种由紫杉类植物的树干,树皮或针叶中提取或半合成的二萜类化台物,主要用于卵巢癌和乳腺癌,对肺癌,大肠癌等也有一定的治疗作用0.23.l脂质体能均匀地分散于氯化钠注射液或5葡萄糖注射液中而不析出结晶,提高了疗效.为了保证临床使用的安全,中国药典2000年版规定必须对静脉注射药物进行热原检查,但在热原试验时,抗癌药物本身的毒性常会引起家兔体温的异常变化,影响实验结果的准确性.因此目前多采用细菌内毒素检查法.本文对注射用1脂质体细菌内毒素检查的方法进行研究.1仪器和试药细菌内毒素工作标准品(批号:80007,lO0EU,ml中国药品生物制品检定所)1鲎试剂(批号:9807i5,0.5EU/ml;批号:090410A-=003EU/ml,湛扛安度斯生物有限刮1细菌内毒紊楗查用水(批号:080811.湛江安度斯生物有限公司);l对照品(批号;108182r古量97.9.BristolMyersSquibb公司)i炔诺酮(批号920301,卜海第十二制药厂)Il脂质体样品(规格:15rag瓶上海医药工业研究院);甲酵,乙酵均为光谱纯Agilent111()型高教踱相色谱仪(美国AgilentTechnologies公司)1XW一80A型旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)l8O1型台式离心机(上海手术器槭厂J;Nikon显微镜(日丰Nikoa公司】2方法和结果2一样品处理供试品溶液的配制:取样品l瓶,加6O乙醇6ml,混旋5min,离0(3000r/rain)15min,取上清液作为供试品溶液.取供试品溶液于显微镜(15×40)下观察,并与用注射用水代替60乙醇配得的溶液比较,结果见图1-_1原料1样品以注射用承配制1样品以60乙醇溶液配制圄l样品藩j丧显被镜观察结果取供试品溶液,参照文献【进行含量测定,结果表1含量测定结果见表1.收稿日期:20010219作者筒卉:张震宇(1g68),男,主管药师从事药品橙驻,药物丹析丑质量标准研究T.02164703139*3Email:shypiysc中国医药工业杂志Chlnese由图1,表1可知,60乙醇溶液已基本破坏了1脂质体的卵磷脂层.2.2内毒素检查方法确证试验2.2.1乙醇对细菌内毒素与鲎试剂凝集反应的干扰试验预试验:取细菌内毒素工作标准品1支,以6O的乙醇溶液溶解后,分别用检查用水及相应浓度的乙醇溶液稀释成行检查.结果显示6批供试品细菌内毒素含量均小于0.18EU/mg.3讨论3.1细菌内毒素检查系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理,以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法(中国药典2000年版,附录86;美国药典24版,1829)通常须将供试品溶于细菌内毒素检查用水后进行测定.由于脂质体系将药物包裹在卵磷脂内.要测定药物所含的内毒素就必须采用特殊的溶剂先破坏其卵磷脂层.将药物释放出来.因此我们参考文献.选择了6O乙醇溶液作为溶剂本试验提取方法提取后的溶液以显微镜观察显示(图1)脂质体已被破坏,1呈结晶状态;含量测定结果均在规定的范围之内.表明6O乙醇已基本破坏其卵磷脂层.3.2为观察6O的乙醇溶液是否对细菌内毒素的活性及内毒素与鲎试剂的凝集反应有影响,本试验(下转第288页)中围药丁杂志Chinese3ourna】OfPharmaceuticals200】.32(6ArylpropionicAcidsHUAiX1.CA()ShengChun.DONGX/anMing!一WENLingFet1(llegeChemistrynnd(VcemicalE!neeng,H0!i,Changsha410082YechangEducationCollege,Yichang443300)ABSTRACT:Opticalresolutionof2-arypropionicacidsbyenzymecatalyzedhydrolysisandester1icatjonarereviewed.KeyWords:2arylpropionicacid;enzymecatalyzedhydrolysis;esterification;resolution,(上接第265页)采用了将6O的乙醇溶液直接溶解细菌内毒素工作标准品,并将乙醇浓度稀释至5以下的方法结果表明,60的乙醇溶液对细菌内毒素的活性无明显影响.可作为供试品细菌内毒素检查时破坏其卵磷脂层的溶剂;同时4的乙醇溶液对内毒素与鲎试剂的凝集反应也无明显干扰作用3.3供试品溶液用检查用水稀释成0.17mg/ml的稀释液(其中乙醇浓度约4).以此稀释液配制的内毒素溶液测得的鲎试剂灵敏度与检查用水配制的内毒素溶液测得的结果一致,表明该浓度下的供试品对内毒素与鲎试剂的凝集反应无明显干扰作用.3.46批供试品的细菌内毒素含量均小于0.18EU/mg.根据文献i,l临床剂量为l3j175mg/m,加至500l000ml的氯化钠注射液或5葡萄糖注射液中,静脉滴注3h参照文献将0.4Eumg作为供试品内毒素的限值,人体表面积按1.5m,体重按60kg计算,并加上大输液中可能含有的内毒素量(按中国药典2000年版规定的0.5EUm1),则每小时输入体内的内毒素最大量约为3.4EU/kg.小于中国药典2000年版规定的阈值5EUkg?h,因此我们认为该限值可作为供试品内毒素的限值,以保证临床使用的安全.参考文献:1SharmaA,StraubingerR.Noveltaxoformulations:Preparationandcharacteriaatonoftaxocontainingliposomesl_J.PharmaRes,1994,11(6):889899.:2陈新谦.金有豫.新编药物学M.北京:人民1;_生出版社.1997.522523.-3WS405(x350)95,紫杉醇注射液质量标准:s.:4U.SFDAGuidelineonvalidationoftheLALasanendproductendotoxintesforhumanandanimalparenteradrugs,biologicalproductsandmedicaldevicess-.DeterminationofBacteria1EndotoxinsinPaclitaxe1LiposomesZHANGZhenYu,ZHANGXiaoPing,MAYuPing,TANGLiMmg(SangkaiInstituteJotDrugc.nEm!.Shahhai200233)ABSTRACT!Abacterialendotoxintestwasdevelopedfordeterminationofpaclitaxe1iposomesforinjection,using60ethanolforpretreatment.TheresultSshowedthattheactivityofthebacterialendotoxinwasnotaffectedby60ethano1.and4ethanoland0.17mg/mlpacitaxelsolutiondidnotinhibit0renhancethegelclotreactionolbacterialendotoxinwithLAL.KeyWords:pacIitaxe;liposomes:bacterialendotoxintest2mDPRL苫.一.bm蚰A