曲尼司特对人正常皮肤和瘢痕疙瘩成纤维细胞部分细胞因子表达的影响（可编辑） .doc

曲尼司特对人正常皮肤和瘢痕疙瘩成纤维细胞部分细胞因子表达的影响 临床皮肤科杂志年 卷第 期 论著曲尼司特对人正常皮肤和瘢痕疙瘩成纤维细胞部分细胞因子表达的影响陈连军 项蕾红 祝禄川 武晓莉 郑志忠复旦大学附属华山医院皮肤科 上海 上海交通大学附属上海市第九人民医院整形外科 上海 摘 要 目的 研究曲尼司特对正常皮肤和瘢痕疙瘩成纤维细胞转化生长因子、碱性成纤维细胞生长因子 和白介素表达的影响。方法 在体外无血清培养的人正常皮肤成纤维细胞和瘢痕疙瘩成纤维细胞中 分别加入、 、 、 和 曲尼司特孵育 、 、 用双抗体夹心酶联免疫吸附试验 法测定其上清液中 、和的表达水平。结果 与对照组相比 、 和 曲尼司特能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞 的表达 和 曲尼司特能增加瘢痕疙瘩成纤维细胞的表达 曲尼司特可降低的表达 上述改变在一定时段差异有统计学意义 。不同浓度曲尼司特对正常皮肤成纤维细胞的影响相似。结论 曲尼司特能降低瘢痕疙瘩成纤维细胞 的产生 增加 的合成 减少 的表达 这或许可解释其在抑制异常瘢痕形成中的作用。 关键词 瘢痕疙瘩 成纤维细胞 曲尼司特 转化生长因子 成纤维细胞生长因子 碱性 白介素 中图分类号文献标识码 文章编号 瘢痕疙瘩多发生于有色人种 具有浸润生长的特材料与方法点 即使采用各种联合治疗 仍有较高的复发率。虽然材料其发病机制尚不清楚 但生物活性因子如转化生长因主要试剂和药品 培养基、胰蛋白酶 公 子、碱性成纤维细胞生长因子 和 司 胎牛血清 公司 细胞培养瓶及培养板 白介素可能在这种异常修复过程中发挥重公司培养基公司 人转化生长因要作用 。曲尼司特具有较明显的抗瘢痕增生效应 子定量酶免疫分析试剂盒、人 定量酶免疫分析可能是通过改变某些生物活性因子的水平而发挥作试剂盒、人定量 试剂盒均购自公司。曲尼司特溶用 。本研究采用无血清培养的方法 探讨正常皮肤和液 日本 制药公司 。瘢痕疙瘩成纤维细胞 、 和的自分仪器 生物洁净工作台 日本公司恒温孵箱 美国 公司 倒置相差显微镜 日本泌表达 以及曲尼司特对其表达的影响。公司 离心机 型 德国 公司 型全自动多功能型酶标仪 芬兰 公司 洗板机型 美国 公司 。收稿日期 修回日期 方法基金项目 上海市科学技术发展基金资助项目 通讯作者 项蕾红细胞培养 分别取正常人胸部皮肤及瘢痕疙瘩皮损 后 临床皮肤科杂志 年 卷第 期者由上海市第九人民医院提供 标本 按植块法培养原代成纤表 曲尼司特对正常皮肤和瘢痕疙瘩成纤维细胞 、 、表达的影响 ± 维细胞 用含 胎牛血清和 青霉素 链霉素 两性霉素的培养时间培养液 待细胞完全融合后按的比例进行传代和 曲尼司特 细胞因子 组 别接种 用含 胎牛血清及 青霉素 链霉素 两性霉素的正常皮肤对照 ± ± ± 培养液 建立二倍体细胞系。取 代细胞进行实验。± ± ± 无血清培养 及接种 将 培养液 含± ± ± ± ± ± 青霉素 链霉素 两性霉素和 谷氨酰胺 加入待接种的实± ± ± 验用成纤维细胞中 按×密度接种于 孔培养板上 置瘢痕疙瘩对照 ± ± ± 细胞培养箱内孵育 。± ± ± ± ± ± 曲尼司特处理 用液清洗培养板 以去除死± ± ±的或黏附差的成纤维细胞。吸出液后 分别加入含± ± ± 、 、 和 曲尼司特的 培养液 正常皮肤对照 ± ± ±含 青霉素 链霉素 两性霉素和 谷氨酰胺 。对照孔成纤± ± ± ± ± ± 维细胞加入不含曲尼司特的培养液。空白孔则无细胞 仅 ± ± ± 含上述培养液。 ± ± ± 吸取上清液和细胞活力测定 培养 、 、 后 收集瘢痕疙瘩对照 ± ± ± ± ± ± 各孔的上清液 放于微型离心管中 保存。同时锥虫蓝染± ± ±色测定成纤维细胞活力。 ± ± ±生物活性因子测定 双抗体夹心酶联免疫吸附试验± ± ± 正常皮肤对照 ± ± ± 法测定各时段各孔上清液中 、和± ± ± 的表达。根据酶标仪所测得的 值 在标准曲线上查得± ± ± 相应含量。± ± ± 统计学方法± ± ± 瘢痕疙瘩对照 ± ± ± 所有数据处理应用统计软件 进行检验± ± ± 和多因素方差分析 显著性检验水平为 。± ± ± ± ± ±结 果 ± ± ± 与同组对照相比成纤维细胞的活力锥虫蓝染色显示各组成纤维细胞的活力为瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌的稍高于正常皮肤。曲尼司特可以增高其表达 在 、 尤其明显。与 的检测结果对照组相比 曲尼司特作用 、不同时段、不同浓度曲尼司特作用下 正常皮肤 曲尼司特作用 、 后 正常皮肤成纤维细和瘢痕疙瘩成纤维细胞的 表达情况见表 。胞表达的差异有统计学意义 。与对照瘢痕疙瘩较正常皮肤成纤维细胞分泌更多的 组相比 、 曲尼司特分别作用 、 、 曲尼司特可以明显降低其表达。与对照组相比后 瘢痕疙瘩成纤维细胞表达的差异有统计学 曲尼司特作用 、 曲尼司特作意义 。多因素方差分析显示 不同浓度、不同用 、 、 后正常皮肤成纤维细胞 表达的时段、不同细胞来源差异有统计学意义 其差异有统计学意义 。与对照组相比 中浓度和时间、浓度和细胞来源、时间和细胞来源之曲尼司特作用 、 、 曲尼司特作用 间有交互作用。、 、 后 瘢痕疙瘩成纤维细胞 表达的 的检测结果差异有统计学意义 。多因素方差分析显示不不同时段、不同浓度曲尼司特作用下 正常皮肤同浓度、不同时段、不同细胞来源差异有统计学意义和瘢痕疙瘩成纤维细胞的表达情况见表 。瘢痕 其中浓度和细胞来源之间存在交互作用。疙瘩成纤维细胞在 、 较正常皮肤表达更高的 的检测结果 曲尼司特可降低这种表达。与对照组相比 和在不同时段、不同浓度曲尼司特作用下 正常皮 曲尼司特作用 后 正常皮肤成纤维细肤和瘢痕疙瘩成纤维细胞的 表达情况见表 。胞表达的差异有统计学意义 。与对照组