抗菌肽新型预混合剂饲养南荚臼对虾的效果试验.doc

抗菌肽新型预混合剂饲养南荚臼对虾的效果试验     当前对虾养殖疾病越来越严重，内服抗生素的效果不明显，养殖成效大大降低。这主要是因为对虾机体免疫力下降，且养殖微生态平衡被破坏，滥用抗生素造成药物残留，导致导致耐药苗株的产生，严重影响水产品的质量，甚至威胁人类健康。寻求和应用无毒、无公害、无耐药性的抗菌制剂替代抗生素来对抗细菌性疾病已成为发展趋势。    研究表明，抗菌肽具有非常特异性的抗细菌、真菌、病毒和肿瘤细胞、原虫等作用，且抗菌肽是鱼、虾、贝等水生动物抗病毒防御系统的主要成分之一。抗菌肽无毒副作用、无药物残留、不污染环境，已得到农业部转基因生物安全管理部门的批准在对虾养殖生产应用，但长期以来未有详细系统的使用报道，本试验采用抗菌肽新型预混合剂饲养南美白对虾，旨在探讨抗菌肽在对虾养殖中的应用，为产业寻求新的突破点。1实验材料和方法1.1实验材料和动物抗菌肽新型预混合剂由中国水产科学研究院珠江水产研究所水产饲料厂配制，其中抗菌肽由广州市微生物研究所提供，杀菌效价50006000单位/mL，饲料中含量为1%。南美白对虾亲虾产卵孵化和虾苗饲养在深圳市龙岗区对虾良种场进行；成虾养殖在台山市都斛镇对虾养殖场进行。    1.2实验设计    1.2.1亲虾培育设试验组和对照组各4组，每组选用亲虾各5对，分别在黑桶中饲养，黑桶盛水lm3。试验组将抗菌肽新型预混合剂与常规饲料按1：I00的比例混合均匀饲喂，对照组为常规饲料。每日投喂1次。观察亲虾交配、产卵及孵化情况。收集虾卵计数，将在试验黑桶中收集的虾卵用清洁的养殖用水冲洗，去掉杂质，均匀分布在1 nl3水体中，取50 mL沉淀后数其中的虾卵数量，连续5次，取平均值。计算公式：    1.2.2虾苗培育孵化后的无节幼体于盛水1m3的黑桶中饲养，设试验桶和对照桶各4组，每桶放养5万尾。放养前调节水温32，盐度2%e，pH80，溶氧6-8 mg/L。试验桶将抗菌肽新型预混合剂与常规饲料按1：100的比例混合均匀投喂，对照桶用常规饲料。除投喂常规饲料外，另加自行繁殖的轮虫及丰年虫等生物饵料。定期测定虾苗存活数量、体长等，测定幼体数的方法同虾卵方法，计算公式：1.2.3成虾养殖成虾养殖设试验池和对照池各2个，用围网间隔成20×30 m，深1.3-1.5 m，水体积780一900 m3。虾池消毒及水质控制按常规操作，水温28-32，pH 7.6-8.0，溶氧量46 mg/L。试验池将抗菌肽预混合剂与常规饲料按1：100的比例混合均匀投喂，对照池投喂常规饲料，每日投喂量按当时对虾体重换算，每一次处理重复一次。2试验结果  2.1抗菌肽新型预混合剂对亲虾产卵孵化的影响从测定数据来看，选定亲虾体长、体重无太大差别，但试验组亲虾平均产卵数17800粒尾，对照组平均15900粒尾，增加12%，虾卵孵化率试验组86.9%，对照组81.8%，增加6.2%。以上结果表明，在常规饲料中添加抗菌肽新型预混合剂，能提高南美白对虾的产卵数和虾卵孵化率。结果见表1。2.2抗菌肽新型预混合剂对虾苗的影响    表2结果显示，抗菌肽新型预混合剂试验桶存活率平均35.8%，对照桶平均31.2%，提高4.6个百分点。每桶收获虾苗数试验桶平均1.79万尾，对照桶1.56万尾，每桶增收虾苗2300尾。试验结果表明，从体长增长方面看，试验组与对照组无明显差别，但抗菌肽新型预混合剂有提高虾苗存活率和增收虾苗数的显著效果。    2.3对南美白对虾成虾的饲养效果    第一次饲养期80天，第二次饲养期110天。试验面积合计30亩，成虾存活率64%，对照面积合计30亩，存活率54.8%，提高成活率超过9%。试验池平均每亩收获对虾137.3 kg，对照池平均每亩收获对虾113.7 kg，平均每亩增收对虾23.6 kg，增产20.1%，增产效果明显。但对体长、体重等个体发育因子的影响不大。  3讨论  动物肠道内的抗菌肽能抑制外源性病原菌，而对动物肠道存在的正常菌群和动物细胞无杀伤作用，但其在动物体内的表达分泌量有限，应用基因工程大量生产动物专一性抗菌肽，并将其用作饲料添加剂，可以使饲养动物对外源病原菌入侵具有更好的抵抗能力。目前，国内作为添加剂生产应用的抗菌肽主要是重组蚕抗菌肽AD-酵母制剂，已得到农业部转基因生物安全管理部门的批准在对虾养殖生产应用，也是本品所用的主要成分之一。国外在抗菌肽对水产主要病原菌如鳗弧菌、杀鲑弧菌及杀鲑气单胞菌等的抑菌作用方面做过报道，并证实在罗氏沼虾、南美白对虾及海水鱼中均发现有抗菌肽类物质存在。姜兰等(2002)报告了重组蚕抗菌肽对多种水产养殖的病原微生物有较好的抑菌作用。如嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、迟钝爱德华氏·24菌、梅氏弧菌及荧光假单胞菌等，最低有效浓度的4g/mL。在本试验中，由于使用富含重组蚕抗菌肽AD-酵母的新型预混合剂，南美白对虾亲虾产卵及孵化均有提高，这主要可能是因为抗菌肽能有效杀灭霉腐微生物，在机体内还可以被蛋白酶降解，提高亲虾免疫力的同时，还能能保证虾卵不被霉菌侵蚀。而通过亲虾摄入的抗菌肽能否有效传递到虾卵中，目前还尚未见到相关报道。    本试验所用产品应用于虾苗的培育期间，对体长增长效果不明显，但是显示出对成活率的提高有较好效果，这主要因为虾苗死亡率受机体免疫力大小决定。宋理平等(2010)发现，未受微生物刺激时，饲料中添加抗菌肽对南美白对虾总抗氧化能力有促进作用，受微生物刺激后，饲料中添加抗菌肽喂养南美白对虾可显著提高对虾超氧化物歧化酶活性）和总抗氧化能力。因此饲料中添加抗菌肽喂养南美白对虾可提高其机体免疫力。    成虾养殖亦有较明显的效果，主要表现在成活率大大提高，每亩增产成虾15 kg以上，但对对虾的体长、个体体重等方面的影响并不明显。这与有些试验结论一致，如，添加抗菌肽可显著提高南美白对虾相对增重率、成活率和对致病菌的免疫保护率，但对饲料系数无显著影响。但王广军等(2005)研究了抗菌蛋白在南美白对虾养殖中的应用效果显示，在饲料中添加抗菌蛋白，在日生长速度、相对增重率、饲料系数、成活率及抗病力方面均有显著的提高。抗菌肽能否提高饲料系数，提高对虾个体性状，需要进一步做详细研究。    本实验所采用的预混料是按常规技术处理，使用方法简便，容易接受，充分混合是使用关键，可将抗菌肽新型预混合剂逐级混匀则效果更好，而混合不均匀将会影响效果。欧阳冰  黄永彤 黄自然 陈志斌，（1中国水产科学研究院珠江水产研究所，广东广州510380）（2暨南大学医药生物技术研究开发中心，广东广州510630；3华南农业大学，广东广州510642）广东饲料第22卷第8期2013年8月