酶联免疫法和胶体金快速检测板.doc

酶联免疫法和胶体金快速检测板检测乙肝两对半的比较分析红安县人民医院 石梁摘 要 目的：对酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体金快速检测板(EICA)检测乙肝两对半进行结果比较和方法分析。方法：同时用酶联免疫(ELISA)法和胶体金快速检测板检测293例待测血浆标本，比较分析两种方法乙肝五项指标的检测结果。结果：293例标本中，用ELISA法与金标法有279例一致，ELISA法有213例阳性,80例阴性，胶体金检测试剂板有2例HBsAg阳性未能检出，其余各例两法结果完全符合。结论：胶体金快速检测板与酶联免疫法测乙肝两对半的符合率高，结果基本一致。且胶体金快速检测板与ELISA相比，不需要特殊设备，易于观察结果，能快速检测单个标本，操作简便，更适合于急诊检验。关键词 ELISA法；胶体金快速检测板；乙肝两对半；比较分析Comparison and Analysis of Enzyme-linked Immunoassay Assay(ELISA) and Emalsoid Immunoehromatography Assay(EICA) on Detection of HBV MarkersAbstract Objective: Evaluating enzyme-linked immunoassay assay(ELISA) and emalsoid immunoehromatography assay(EICA) on detection of HBV markers by comparing the results of these two methods. Methods: 293 serum samples were detected for the five makers of hepatitis B with ELISA and the strip of EICA simultaneously, then the results were compared and analyzed. Results: Within the 293 serum samples, 279 samples have the same results. According to ELISA, 213 samples were positive and 80 negative. The results of EICA were same with ELISA, except 2 sample of HBsAg did not show positive result. Conclusion: The coincidence rate of ELISA and EICA was high. Comparing with ELISA, EICA does not demand specific facilities and can exhibit the results clearly. Furthermore, this method is easy for operation and can detect single sample effectively, which is fitter for emergency detection.Key words: ELISA;EICA;HBV markers; comparison and analysis我国是HBV高流行区，乙肝病毒感染率约60%-70%，全国约有9300万人携带乙肝病毒，其中乙肝患者大约有3000万，肝炎患者中60%是慢性肝炎患者。HBV又与肝硬化和原发性肝癌密切相关，HBV的防治是我国传染病控制的首要问题1，而且目前尚无明确有效的治疗方法。并且，随着人们生活水平日益提高，健康意识不断增强,乙肝两对半的检测已成为人们日常体检，献血员体检，以及医院急诊患者和手术患者的常规检查项目。以达到早诊断、早防护，减少院内交叉感染的目的。目前实验室普遍采用的ELISA检测，虽然其性能得到公认，但需要相应设备，检测时间长，操作较繁琐，不便单样本快速检测。胶体金快速检测板不需要相应设备且能够快速检测单个样本。为此，我们选用了乙肝两对半胶体金快速检测板，经与ELISA法对比试验，结果显示两者有较高的符合率。现报告如下。材料与方法1.材料11样本来源标本来自2013年8月-2014年6月红安县人民医院门诊、住院患者及部分体检者，其中男165例，女128例，年龄15一75岁，静脉采血，肝素抗凝离心(3 000 rmin，5 min)，分离血浆备用。12试剂与仪器1.2.1 试剂 ELISA试剂盒由珠海丽珠试剂股份有限公司提供金标快速检测板由艾康生物技术（杭州） 有限公司提供。按说明书保存试剂盒，操作时从冷藏箱取出，放置于37恒温30 min。使试剂温度恢复至37后方可使用，试剂从冰箱取出恢复到反应温度需要时间。在平衡试剂的同时，待测标本需置室温平衡30 min后再进行测试，如果取出后测定，试剂温度、时间达不到要求，抗原抗体反应不完全可能会出现假阴性。1.2.2 仪器 仪器为桂林优利特URIT-600酶联免疫检测仪， 郑州基波JB-I全自动快速立式洗板机。2.实验方法1.3.1 金标法乙肝两对半检测试剂板采用快速免疫层析法检测乙肝病毒五项血清学标志：HBsAg，HBsAb，HBeAg，HBeAb，HBcAb。其中HBsAg，HBeAg检测试纸条采用双抗体夹心法试纸条含有被事先固定于膜上测试区(T)的多克隆抗体和控制区(C)的相应抗体。HBsAb检测试纸条采用双抗原夹心法，试纸条含有被事先固定于膜上测试区(T)的乙肝表面抗原和控制区(C)的相应抗体。测试时血清(血浆)标本滴于试剂板加样处，在测试区(T)和质控区(C)均有红色条带出现为阳性；在测试区(T)不出现红色条带，质控区(c)内出现红色条带为阴性结果。HBeAb，HBcAb检测试纸条采用竞争抑制法，试纸条含有被事先固定于膜上测试区(T)的单克隆抗体和控制区(C)的相应抗体，测试时，血清(血浆)滴入试剂板加样孔，随之标本在毛细效应下向上层析。如标本中含有相应抗体，则同膜上测试区(T)的单克隆抗体竞争与预包被在乳胶颗粒上的相应抗原反应。如标本中没有相应抗体，预包被在乳胶颗粒上的相应抗原则同膜上测试区内(T)的单克隆抗体全部结合。强阳性标本测试区内(T)没有红色条带，弱阳性标本，测试区(T)将有一条非常弱的红色条带，阴性标本测试区(T)内将会出现明显的红色条带。质控区(c)所显现的红色条带是判定是否有足够标本、层析过程是否正常的标准，无论阳性或阴性标本，质控区内(c)都会出现一条红色条带。本测试板要求在15min以内读取结果，20min后判定结果无效。132 ELISA法 严格按说明书操作，全自动洗板机洗板，酶标仪450630nm双波长比色，以SCO值判定结果。1.3.3 统计学方法（采用检验）2结果293例标本两种检测法测定，按HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb为1,2,3,4,5的顺序判定结果。具体结果见表l。3讨论本文对比分析的293例标本中，金标法快速检测板有2例HBsAg于15min内未能检出，只检出45模式阳性，放置30min后，HBsAg出现微弱阳性，该例标本ELISA法检测结果为145模式阳性，,HBsAg孔显色较浅，可能是由于抗原滴度较低，金标法快速检测板未能检出，有2例HBeAb未检出，由于HBeAb的检测是采用竞争法，结果的判定是比较检测线和控制线颜色的深浅，而当这两条线颜色相近时，受肉眼辨色的影响难以判定，因此造成金标快速检测板HBeAb的假阴性增多。还有2例HBcAb未检出，金标快速板HBcAb的灵敏度和特异性稍差，假阴性较多的原因可能是ELISA法检测HBcAb时将血浆作一定稀释后才测定的，而金标快速板是直接测血浆，其他各例均于15min内得出结果,且与ELISA法所得结果完全相符。表1 293例ELISA法与胶体金快速检测板结果比较模式13514515245253545522,4全阴金标法4243291316118440582ELISA法4247271516116442380P值>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05>0.05乙肝病毒感染是我国最常见的感染性疾病之一，而应用免疫技术测定HBV特异性抗原抗体是HBV感染诊断的主要手段。目前常用的检测HBV特异血清标志物主要有HBsAg、抗一HBs、HBeAg、抗一HBe、抗一HBcIgM和抗一HBcIgG等，常用的检测方法为ELISA法、金标记免疫层析法和化学发光法2。ELISA法是利用酶催化底物反应的放大作用3，提高特异性抗原抗体反应的敏感性。其特点为特异性和灵敏度高、准确性好。而金标层析法是20世纪70年代，Fanlk等建立的免疫胶体金技术。它是继ELISA法之后发展起来的一种固相膜免疫测定其以胶体金作为标志物利用层析作用来检测抗原或抗体4。用于检测乙肝五项的金标层析法，现在已广泛使用于临床和各医疗机构。随后该技术广泛应用于免疫检测技术，目前已研制出的各种不同的金标检测条、检测卡，金标检测HBsAg已有较多报道5-8。 总之，金标快速检测板检测乙肝五项指标敏感性和特异性均较高，并具有操作简便、快速，不需特殊设备，易观察结果，能单份测定的特点，而且价格适中。适合血站流动采血点献血员的快速筛检，医院急诊病人和手术前的应急检测，更适合了基层医疗单位的推广应用，并能满足门诊病人和健康体检者随机采血作乙肝两对半快速诊断的要求。但是检测乙肝两对半，胶体金快速检测板只是定性筛选，ELISA可用定值血清确定其浓度。由于胶体金快速检测板检测结果判定是比较检测线和控制线颜色，当检测线颜色较弱，肉眼难以判定，造成其检测的假阴性增多。也有研究结果表明，金标快速检测板的灵敏度稍低于ELISA法，血清中HBsAg含量大于5 ng/ml“时，才能检出，特别对小三阳和乙肝携带者有漏诊的可能9。而且金标快速检测板成本高于ELISA法。而酶联免疫ELISA法具有特异件强。灵敏度高，检测灵敏度05 ngml，重复性好，可以批量检测，但操作步骤繁琐，对标本、试剂要求比较严格，有许多影响因素，因此，实验室应根据实际需要并结合工作情况选用。参考文献1 傅桂莲 分子生物学检验技术M，第二版，人民卫生出版社，2003:1502 中华人民共和国卫生部医政司全国临床检验操作规程M第3版南京：东南大学出版社，2006：6183许文荣临床免疫和免疫学检验M3版北京：人民卫生出版杜，2007：1011054李影林中华医学检验全书M1版北京：人民卫生出版杜，1997：3293335成军，张国祥，孙关忠，等，252例低滴度HBsAg感染乙肝标志物检测结果分析J.中国实验诊断学，2000，4(6)：266-2686曾章新，刘文星，朱忠勇，等，胶体金免疫层析法检测乙型肝炎表面抗原的评价J中华医学检验杂志，1999，22(6)：327一3297 谯艳娥.金标法初筛对16055份无偿献血者标本HBsAg检测结果分析J国际医药卫生导报，2005，11(14)：446-4478郑素钠,.乙肝两对半酶联免疫法与金标快速检测板的比较探讨J. 中国现代临床医学杂志, 2005，15（9）：2229胡晓静.金标法快速检测HBsAg漏检分析J.2009,16(23):405乙型肝炎病毒检测方法 红安县人民医院 石梁前言：乙型肝炎是世界上最常见的传染病之一，世界卫生组织（WHO）估计，本病每年造成约100万人死亡。我国是HBV高流行区，根据有关流行病学资料，我国乙肝病毒感染率为576，其中乙肝病毒表面抗原携带率为98；全国现患慢性肝炎病人超过2000万例。慢性乙型肝炎是HBV感染的一种严重后果，HBV又与肝硬化和原发性肝癌密切相关。HBV的防治是我国传染病控制的首要问题。鉴于人们对病毒性肝炎越来越重视，对乙肝两对半的检测已成为人们日常体检，献血员体检，以及医院急诊患者和手术患者的常规检查项目。以达到早诊断、早防护，减少院内交叉感染的目的。目前检测乙肝病毒临床上以检测其血清标志物HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb,HBcAb(俗称“两对半”)较普遍，在健康体检中常常将乙肝两对半作为首选筛查项目，此外还可以通过检测HBV- PreS1抗原或者HBV-DNA来检测HBV感染。回顾历史，随着检验技术的发展，检测方法的特异性、灵敏度以及检测结果的准确性日趋完善，而在各种检测方法中既有定性检测也有定量检测，并且各方法相对而言都有一定的优缺点。熟知各种不同的检测方法及其方法学评价，能够在临床有不同需求情况下选择最合情合理的检测方法提供有力的依据，为临床提供正确可靠的结果。主题：在我国乙肝的预防、诊断与疗效等方面很大程度都依赖乙肝两对半的检测，血清乙型肝炎五项标志物定性测定始于80年代中期，对乙型肝炎的疾病诊断，病程监测，疗效观察起到了一定的作用.乙肝两对半各项检测指标对乙肝病毒感染具的检测有重要意义1。目前我国现状HBV感染者多以其血清感染标志物（ 乙肝两对半，HBV-M）判定，检测方法主要有酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金标记免疫层析法（GICA）、化学发光法以及时间分辨荧光免疫法（TRFIA）。由于其组合模式复杂多样，从而导致了临床上对部分发病患者的HBV感染复制状况难以判断，有时甚至会出现漏诊的情况。随着实验诊断学的发展，乙肝病毒的血清学指标不断得到发展完善，HBV-PreSl作为一项新的乙肝病毒感染的血清学标志物也越来越被临床重视，其相对于乙肝两对半有一定的优越性。但是由于乙肝病毒血清标志物检测不能直接反应HBV 复制，临床上难以掌握并准确判断患者体内HBV 复制情况，因此又有了对直接反映乙肝病毒存在、活动性复制及具有传染性的可靠指标HBV-DNA的检测,主要采用聚合酶链反应技术(PCR)。乙肝两对半检测酶联免疫吸附试验(ELISA)：ELISA法是目前使用的最主要的方法之一，基本原理是把抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性，并将抗原或抗体与某种酶连接成酶标记抗原或抗体，它既保留了免疫活性，又保留了酶的活性，测定时将受检样品和酶标记抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体反应形成抗原抗体复合物，用洗涤的方法将固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例；加入底物后，底物被固相载体上的酶催化变成有色产物，通过定性或定量检测有色产物量即可确定样品中待测物质含量。 酶联免疫ELISA法具有特异件强。灵敏度高，检测灵敏度05 ngml，重复性好，适合批量检测，但操作步骤繁琐，对标本、试剂要求比较严格，有许多影响因素,此外，ELISA也无法检测出乙肝两对半各项指标的具体浓度，只能笼统的检测其阴、阳性结果2。在ELISA方法性能评价中发现除方法和试剂本身对检测结果性能的影响外，检测过程中也存在影响检测性能的因素，如：加样和加试剂重复性、孵育温度的均衡性、孵育时间的长短、标本的溶血、RF的增高等都可能影响检测结果。因此，日常检测中尽管使用的是符合实验性能要求的方法和试剂，也应注意检测过程中的其它影响因素对检测结果的影响3。胶体金标记免疫层析法（GICA）：虽然ELISA法已成为日常检验的首选方法，但不方便作单个样本的快速检测，尚不能满足急诊检验的需要。为此，我们选用了乙肝两对半快速检测板，采用 乳胶层析技术,其中HBsAg和HBeAg采用双抗体夹心法，阳性标本在测试区形成“抗体一抗原一抗体”免疫复合物而显色。抗HBs采用双抗原夹心法，阳性标本在测试区形成“抗原一抗体一抗原”免疫复合物。抗HBe和抗HBc采用竞争抑制法，如标本中含有相应抗体，则和测试区的单克隆抗体竞争与预包被在乳胶颗粒上的相应抗原反应，如标本为阴性，则预包被在乳胶颗粒上的相应抗原同测试区的单抗全部结合。经实验证实，乳胶层析法具有特异性强、灵敏度高的特点，操作便捷、快速，一次加样即可检测5项指标，15 min可读取结果，不需任何仪器，结果易于判断。与酶联免疫法比较，其敏感性、特异性均在90以上。且此法无须恒温反应、冲板洗涤等操作，大大减少了污染机会，其试剂盒保存条件宽松，对操作人员的要求低而且价格适中。适合血站流动采血点献血员的快速筛检，医院急诊病人和手术前的应急检测，更适合了基层医疗单位的推广应用，并能满足门诊病人和健康体检者随机采血作乙肝两对半快速诊断的要求。另外乳胶层析检测试剂板只是定性的筛选乙肝病毒血清标志物的存在，不能确定其在标本中的含量，对可疑结果应作相应的进一步检测4.化学发光法; 乙型肝炎病毒(HBV)两对半定性测定是目前临床分析和判断患者传染性的重要依据之一5随着临床医学的需要，仅凭阴、阳性定性检测已不能满足临床要求6.近年来化学发光检测技术应用于检验医学，使得乙肝两对半定量测定成为可行。化学发光标记技术具有高灵敏度。因此，通过化学发光法定量检测可以减少其漏检，这对一些低浓度HBsAg携带者特别是一些群体如医务工作者及病人家属等的检测，做好早期预防有重要的现实意义。 化学发光标记免疫技术由于其具有灵敏度高，重复性好，特异性强，准确性佳，检测快速，无放射性危害等优点7，因此近年来被广泛应用于临床。雅培i2000检测系统是基于化学微粒子免疫分析(CMLA)检测技术的全自动免疫分析系统，其以顺磁性微珠作为包被载体，与标本中的相应抗体或抗原结合后，加入吖啶酯作为标记的二抗后，在特定的磁场区发生沉积，经反复洗涤使游离抗原或抗体与抗原抗体复合物分离，加入预激发液与激发液后，测定其激发光强度即可判别标本中的抗原抗体浓度。与我们传统的ELISA法相比，由于前者是液相磁珠包被，后者采用固相微板包被，因此大大提高了接触反应面积，其检测试剂的高灵敏度的定量检测使大量的低水平患者减少漏检的可能性；近十几年来，由于抗病毒药物、乙肝免疫球蛋白及乙肝疫苗的使用导致病毒核酸出现突变，产生了HBV突变株，它们可以逃过宿主的免疫防御，导致检测失败，以往ELISA试剂采用单一的单克隆抗体，缺乏对突变株的检测能力，而雅培HBsAg试剂采用的抗体是针对一些受突变影响最小、又具有恒定高亲和力抗原决定部位的多种单克隆抗体，能有效地识别各种逃逸变异株，也避免了可能出现的漏诊，固对与突变株的检测后者明显优于前者8。综上所述，化学发光法乙肝两对半定量具有灵敏度高，对突变株的检测能力强等优点，对于可疑的少见模式应尽可能采用定量方法，对乙肝患者的病程、治疗、预后起一个动态监测的作用，能够让医生对病情疗效作出合理的解释提供依据。时间分辨荧光免疫法（TRFIA）: 乙肝的预防、诊断与疗效监测等都依赖乙肝两对半的检测，因而其检测方法的科学性就显得极为重要。荧光免疫测定是将抗原抗体反应与荧光物质发光分析相结合，用荧光检测仪检测抗原抗体复合物中特异性荧光强度，对液体标本中微量或超微量物质进行定量测定。临床实践证明，该方法与酶联免疫吸附试验(ELISA)相比，有较显著的优势。时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)作为一项具有广阔发展潜力的新兴生物学技术，其灵敏度高、线性范围宽、试剂有效期长、标准曲线稳定性好、应用范围广、测量快速，易自动化、无放射性污染等优点，给标记免疫技术带来了一次飞速发展。TRFIA同样也适合大批量样本检测，只是结果更准确更可靠而已。TRFIA法能准确检测乙肝两对半5项指标的浓度变化，而ELISA法只能提供阴、阳性结果。2者比较，TRFIA法不但能通过测定ELISA不能测出的HBsAg低浓度值，为临床早诊断、早发现乙肝患者提供有力证据，也能通过测定HBsAb的浓度，对被检测人群机体的免疫状况进行评估，为需注射乙肝疫苗的人群提供精确指导，也为临床评价药物疗效提供动态数据9。缺点是易受环境、试剂和容器中的镧系元素离子的污染，使本底增高。HBV PreSl抗原检测随着实验诊断学的发展，乙肝病毒的血清学指标不断得到发展完善，PreSl作为一项新的乙肝病毒感染的血清学标志物也越来越被临床重视。乙型肝炎病毒（HBV）为嗜肝DNA 病毒。HBV-DNA基因组呈环状分为长的负链（L）和短的正链（S）两股。L 链有四个开放读码区（S 、C 、P 、X 区） 。S区又分为前S 、前S 两区及S 区，分别编码包膜上有前S 、前S 和HBsAg10-11。前S 蛋白主要存在于Dane 颗粒中，对HBV 附着肝细胞和诱导特异性免疫应答具有重要作用。研究认为，蛋白在病毒附着并侵入细胞过程中起重要作用，急性HBV 感染时前S 蛋白反映病毒活跃复制并引发肝损害，前S 蛋白持续阳性，显示病情较重，预后不良。而在慢性HBV 感染者中，前S 蛋白持续阳性可提示病情呈进行性发展12，故检测肝炎病毒前S 蛋白可作为HBV 复制的指标和判断HBV 活动性的一个依据,研究认为，前S 蛋白与HBV-DNA 和HBeAg 呈正相关，因此能够反映乙肝病毒复制情况。新的标志物前S 蛋白检测不需特殊设备，操作简便，易在基层医疗单位推广应用，对乙肝的诊断、病毒复制及疗效观察具有同样的诊断价值13。PreSl抗原的检测能够从以下几个方面弥补和加强乙肝五项检测的不足。(1)PreSl抗原出现在急性乙型肝炎感染的早期，在转氨酶升高前即可查出，提示可作为早期诊断乙肝病毒感染的指标。(2)急性乙型肝炎患者PreSl抗原阴转越早，预后越好，是病毒清除的最早迹象。反之，PreSl抗原持续阳性，将发展至慢性肝炎(此指标比HBeAg阴转、HBsAb阳转指标提示要早)。(3)HBeAb(+)慢性乙型肝炎约占慢性乙肝的3050，检测PreSl抗原，提示病毒在机体内继续复制，此类患者更容易演变为肝硬化或肝癌。加查PreSl抗原，弥补了因HBeAg缺失造成的诊断和治疗困难。(4)HBV无症状携带者中有一定比例的HBeAb(+)者，加查PreSl抗原(+)提示病毒在体内还较活跃。病毒并没有清除，肝脏还有潜在的病理损伤。(5)抗病毒治疗乙型肝炎，加查PreSl抗原可作为治疗前的患者筛查和治疗后的疗效判断，尤其对HBeAb(+)的慢性肝炎患者抗病毒治疗的排查也起到重要作用。所以将乙肝两对半检验和乙型肝炎病毒PreSl抗原相结合，可在急性肝炎，慢性肝炎，HBV无症状携带者和抗病毒治疗乙型肝炎诊疗过程甚至在流行病学调查中都起到了十分重要的作用14。荧光定量PCR检测HBV-DNAHBV-DNA是直接反映乙肝病毒存在、活动性复制及具有传染性的可靠指标15。但目前我国现状HBV感染者多以其血清感染标志物（ 乙肝两对半，HBV-M）判定，由于其组合模式复杂多样，从而导致了临床上对部分发病患者的HBV感染复制状况难以判断，有时甚至会出现漏诊的情况。定量PCR 法的应用，使得我们进行HBV-DNA的检测的同时得以对其进行相对的量化，这对于乙肝患者体内的HBV的复制以及传染性有更直接的了解，同时也更有利于对临床HBV 感染的诊断、治疗方案的选择及疗效的判断. FQ-PCR 是进行临床基因诊断的有效手段，它采用了完全闭管检测，不需要PCR后处理，避免了交叉感染；同时采用实时检测技术，所得Ct 值和原始模板数量完全呈线形相关，定量准确率极高16，它不仅具有普通PCR 的高灵敏性，而且由于荧光探针的应用，可以通过光电传导系统直接探测PCR扩增过程中荧光信号的变化以获得定量结果，所以还具有DNA杂交的高特异性和光谱的高精确性，克服了常规PCR 的许多缺点17. 乙肝两对半标志物全阴性的病人不能排除HBV感染。因此PCR 的高灵敏度可作为早期诊断HBV 感染提供依据，提示在临床上对HBV-M均阴性者，有进一步进行HBV-DNA、FQ-PCR检测的必要，以确立有无HBV感染。研究结果表明，PCR与ELISA两种方法检测HBV感染与复制，多种血清学标志物模式都有一定的HBV-DNA 检出率，由于DNA阳性表示HBV在体内复制，如果仅以HBV-M的检测结果作为判断HBV-DNA 感染、传染性以及HBV 是否在体内复制有一定的局限性，因此，为临床提供HBV感染、复制及传染性判断以及指导治疗和观察疗效，我们应选择乙肝两对半标志物并同时做HBV-DNA的荧光定量PCR检测18。总结酶联免疫吸附试验(ELISA)定性检测乙肝两对半特异性和灵敏度较高，价格较低，但操作繁琐，适合普通批量筛检；胶体金标记免疫层析法（GICA）适合血站流动采血点献血员的快速筛检，医院急诊病人和手术前的应急检测，但有漏检可能，对乙肝两对半全阴及其它可疑标本，应用其他方法加以证实；化学发光法、时间分辨荧光免疫法（TRFIA）适合乙肝两对半定量浓度检测，对于可疑的少见模式应尽可能采用定量方法，减少其漏检，为临床早诊断、早发现乙肝患者提供有力证据，也能通过测定HBsAb的浓度，对被检测人群机体的免疫状况进行评估，为需注射乙肝疫苗的人群提供精确指导，也为临床评价药物疗效提供动态数据。同时HBV-PreSl抗原作为一项新的乙肝病毒感染的血清学标志物，它可作为HBV 复制的指标和判断HBV 活动性的一个依据，且其检测不需特殊设备，操作简便，易在基层医疗单位推广应用，对乙肝的诊断、病毒复制及疗效观察具有较大的诊断价值；但是由于乙肝病毒血清标志物检测不能直接反应HBV 复制，且两对半模式复杂多样，临床上难以掌握并准确判断患者体内HBV 复制情况,荧光定量PCR检测的HBV-DNA是能够直接反映乙肝病毒存在、活动性复制及具有传染性的指标，对于乙肝患者体内的HBV的复制以及传染性有更直接的了解，同时也更有利于对临床HBV感染的诊断、治疗方案的选择及疗效的判断。虽然HBV-DNA 已成为目前判定HBV 复制重要和可靠的指标，但由于需较高的实验条件与设备，许多基层医疗单位，尤其是我国西部边疆地区，尚不能开展PCR工作.。故临床在选择检测方法时，实验室应根据实际需要并结合工作情况选用，选择最合适的检测方法，必要时选用两种或两种以上方法相结合以提高检测结果准确性。例如，研究结果表明，将乙肝两对半检验和乙型肝炎病毒PreSl抗原相结合，可在急性肝炎，慢性肝炎，HBV无症状携带者和抗病毒治疗乙型肝炎诊疗过程甚至在流行病学调查中都起到了十分重要的作用14。 由于目前使用的各种检验方法自身都存在一定的局限，如定性方法灵敏度和特异性均不及定量法，无法为临床提供准确依据。而定量法成本太高，对人员及仪器要求也较高，尤其在农村偏远及贫困地区普及起来有一定困难，不利于乙肝的防治与诊断。但是相信随着检验技术的快速发展，一定能够在特异性与灵敏度以及经济、方便相统一的层面上找到一个较好的平衡点，让所有乙肝病毒感染者都能得到最好的诊断与治疗，为世界打好乙肝病毒之战做出重要贡献！参考文献1 赵远怀 ,乙型肝炎两对半检测的临床意义和影响因素J, 中国当代医药2011,18（3）2 牛平英,乙肝两对半酶联免疫法与金标法的应用及注意事项, 中国当代医药, 2009,16(5)3赵辽群, ELISA法在检测乙肝标志物中的应用和评价J, 中国医药导报, 2012,9(3)4戴平, 乳胶层析法和酶联免疫法对比检测乙型肝炎两对半, 检验医学与临床, 2007,4(5)5赵亮1145例乙型肝炎患者血清标志物检测与分析J中外健康文摘，2008，7(5).6 李辉霞乙肝两对半定量检测及临床意义J医学信息2010，23(9)7农天雷，常用化学发光免疫分析技术及其特点 J现代医药卫生,201127(14)：2018 郑黎明，化学发光法与ELISA法检测乙型肝炎病毒指标比较J，贵阳医学院学报，2010，,35（1）.9 任建新, 时间分辨荧光免疫法定量检测乙肝两对半的效果评价, 中外医疗, 2010,29(13)10 邹晓毅，机体清除乙型肝炎病毒免疫机制研究新进展J 国外医学病毒学分册，2005，12（2） ：4311李兰娟，任红，主编传染病学M 第8版北京：人民卫生出版社，2013 ：19 2112 毛和香，罗德生，王长本，等乙型肝炎病毒感染前S 蛋白与病毒复制的关系J 中国误诊学杂志，2005，5（3） ：40713 林国跃，张和平，罗婷，杜小璐，张金萍，HBV 前S蛋白与HBV-DNA 检测和乙肝二对半模式相关性研究, 中国实验诊断学, 2011,15(2)14陆光辉,乙肝病毒PreSl抗原和乙肝两对半结合检查的意义和应用J，亚太传统医药，2007,3(12)15彭文伟，主编: 病毒性肝炎研究,广州：广东科技出版社，1998,316 邱海山，严慧芳.荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒分析.健康必读杂志，2010,4（2）：5617 沈敏，张庆五，等 PCR定量测定血清HBV-DNA的评估.胃肠病学，1999,4(1):55-5618 韩宏芳，付晓野，董玉琳等：荧光探针定量PCR检测HBV-DNA.上海医学检验学杂志，2000,15（1）:18-19