2054532495发酵豆粕与评估应用.ppt
根源生物,发酵豆粕与评估方法,乳仔猪消化生理特点,乳猪胃肠等消化器官重量轻、容积小；胃肠蠕动能力不足；胃酸和小肠碱分泌不足；乳猪消化酶分泌不足；腹泻严重。,乳仔猪腹泻,断奶应激；环境问题；饲料，液体到固体的转变；饲料蛋白质种类。,蛋白质种类对腹泻的原因,蛋白质种类与腹泻有关，豆粕较容易引起腹泻；豆粕的比例越高腹泻率越高（消化性和抗原性）；蛋白原料的选择至关重要。,蛋白质种类与乳仔猪腹泻,大豆抗营养因子,降低豆粕中的抗营养因子，抗原、寡糖等；提供优质消化率用率高的蛋白质（高小肽）；提供乳仔猪需要的有机酸（乳酸、乙酸、丙酸和丁酸）；提供乳仔猪需要的微生态制剂及其有益代谢副产物（具有活性的乳酸菌、酪酸菌和维生素等）。,发酵豆粕的目标,发酵豆粕生产工艺与质量控制,原料的选择：43%，46%？有无其它原料？产品：46-48%,50%。,原料,发酵豆粕生产工艺与质量控制,发酵混合工序是否合理，与菌种混合均匀度？有无存在污染的可能性（生产的连续性）？清理程序？,混合系统,发酵混合工序是否合理，与菌种混合均匀度？有无存在污染的可能性（生产的连续性）？清理程序？,混合系统,发酵豆粕的工艺与质量控制,发酵原则：低损耗，高效率；发酵容器的选择：池子？罐？带式？箱式？优缺点：。,固体发酵设备,发酵豆粕的工艺与质量控制,菌种：自产？外购？菌种的稳定性。,菌种,温度控制系统是否完善：空调？暖气？通风？环境净化系统：空气清洁度。,发酵环境控温,发酵豆粕的工艺与质量控制,烘干系统的选择：滚筒？管束？流化床？工艺的优点烘干系统的关键控制点：重点控制指标，温度与效率，控制好美拉德反应。,烘干系统,发酵豆粕的工艺与质量控制,粉碎:粉碎：效率？除尘？清理？过程记录成品:成品库：防潮？防鼠？通风？仓储条件、周转周期。,其他工艺,发酵豆粕的工艺与质量控制,质量过程控制,每一个生产环节是否有恒定的监控指标；严格的生产记录管理制度。,发酵豆粕的工艺与质量控制,根源发酵豆粕的工艺特色与优势,根源集团在菌种方面的优势严格选用优质豆粕原料独一无二的全自动无菌车间生产线均衡的产品指标,菌种 1）专业的微生物、酶制剂研发团队，生产研发和应用研发相结合。2）菌种的选择，专菌专用，多菌联合发酵（乳酸菌和酵母菌）。3）菌种自产自用，菌种新鲜，采用液体菌种，发酵启动快。,1、高活力菌种和完备生产工艺,不同乳酸菌在棉籽糖培养基中的生长能力,不同乳酸菌株对水苏糖的降解能力比较,菌种发酵工艺与生产设施,1、高活力菌种和完备生产工艺,豆粕 好产品必须用优质的原料 1）质量稳定，供应商，青岛渤海科技有限公司、烟台益海 2）价格优势：中慧集团采购 3）运费优势：距离近 4）包装优势：袋装转为吨包,2、严格选用优质豆粕原料,原料,投料,自动混合,自动发酵,烘干,粉碎,打包,成品,3、全自动化恒温发酵生产线,1.净化车间：发酵车间空气净化达到万级，保证发酵环境无杂菌污染；全部物料从投料到成品均不接触外界环境，杜绝了物料传输过程中的污染。2.恒温发酵：发酵车间温度控制在35；恒温的环境带来发酵周期的稳定，保证发酵周期恒定在48小时。,4、生产线优点,3.均匀发酵：菌种、豆粕与水的配料使用自动添加系统，减少人工配料带来的误差；后续发酵采用木框式发酵，发酵单元较小，使得在发酵过程中各个点的温度均匀，均匀的发酵带来产品品质外在指标的稳定与内在指标的提升。4.全自动化：自动配料、自动进料、自动控温、自动出料；全生产线实现自动化控制，减少了人工操作的不准确性，实现精益生产。,4、生产线优点,加 料 过 程,车阵式固态发酵,出 料 过 程,车阵式固态发酵,卸 料 过 程,车阵式固态发酵,益生肽产品控制指标,发酵豆粕：蛋白质体外消化预处理产品批次之间的稳定性发酵、烘干过程的均匀性,5、完善质量控制体系,水分和蛋白每6吨取样检测，其他指标为分原料批次检测。每批发货产品均进行全面检测，并附检验报告单。,生物原料生产车间,研发中心,发酵豆粕的评估,菌种,菌种：自产？外购？菌种生产的稳定性。菌种的有益性能。,发酵豆粕的评估,根据蛋白质的溶解性，大豆蛋白可分为两类：清蛋白（非酸沉蛋白5%）和球蛋白（酸沉蛋白90%）根据超速离心分析，大豆蛋白主要为11S（大豆球蛋白）和7S（-伴大豆球蛋白）组分大豆球蛋白占大豆籽实蛋白的19.5-23.1%（25-30%），占总球蛋白的40%，由酸性多肽（34-44ku）和碱性多肽（20ku）。-伴大豆球蛋白占大豆籽实蛋白的10-12.7%，占总球蛋白的30%,由（58-77ku）、（58-83ku）和（42-53ku）三种亚基组成。其它球蛋白含量低，抗原性也弱。,大豆抗原蛋白占豆粕总蛋白比例,大豆抗原与检测,由酸性亚基和碱性亚基组成ELISA测定的是碱性亚基的含量大多数acid肽链与IgE、IgM、IgA 有很强的结合活性，能引起致敏反应，结合区域位于酸性多肽192-306 残基处，碱性肽链则没有.Adachi M.Crystal structure of soybean 11S globulin:Glycinin homohexamerJ.Plant Biology,2003(12):7 395-7 400.,11S 抗原蛋白,大豆抗原与检测,7S伴大豆球蛋白由、和三种亚基组成。ELISA测定的是-亚基。亚基有很强的结合IgE、IgM、IgA 的活性，结合区域位于亚基多肽链的232-383 碳原子处，与亚基则没有。具有抗原性的关键在于内源性消化酶不能够对进行有效消化。,Maruyama N,Adachi M,Takahashi K,et al.Crystal structures of recombinant and native soybean-conglycinin homotrimers J.European Journal of Biochemistry,2001,268(12):3 595-3 604.,大豆抗原与检测,SDS-PAGE,大豆抗原检测方法,优点：结果直观缺点：难以准确定量,发酵豆粕抗原检测（SDS-PAGE法）,豆粕 1 2 3 4 5 6 7 8 9,样品1-9分别为不同企业的发酵豆粕产品,蛋白哪去了？,SDS-PAGE结果显示了从豆粕（或发酵豆粕）中提取的可溶性蛋白的检测结果，蛋白的分子量范围10k-200kDa。,都变成小肽了？,抗原与抗体之间的特异性结合抗原或抗体的固相化抗体或抗原的酶标记，催化底物显色来进行抗原或抗体的定性以及定量检测,ELISA的优点：可准确定量,ELISA检测不同工艺产品会出现较大误差,试剂盒提取液浸提蛋白的SDS-PAGE,0.6%KOH溶液浸提蛋白的SDS-PAGE,ELISA方法检测对象大豆球蛋白：base亚基伴大豆球蛋白：-亚基,根源产品致敏亚基消除得最好,分析：A、B ELISA检测结果显示-伴大豆球蛋白和我们益生肽产品相差不大，大豆球蛋白益生肽产品比A样的高。但是0.6%KOH-SDS-PAGE条带A、B样的大豆球蛋白条带都比益生肽深，而且和条带位置下面多了两条很明显的条带，且和豆粕原料不对应。我们的三个样品ELISA检测结果和0.6%KOH-SDS-PAGE处理SDS条带基本相同，而且相对应。,4.检测方法,抗原蛋白-0.6%KOH-SDS-PAGE,温度对抗原的影响,ELISA和SDS-PAGE的检测流程和存在问题,称量样品,浸泡提取,离心取上清作为样品,SDS-PAGE,ELISA,存在问题：发酵豆粕不同样品的蛋白含量基本相同（48-50%），但在同一浸提条件下，提取的蛋白含量存在巨大差异！,根源产品评价体系与优势,1、标准,1.粗蛋白质：48.0%，50.0%2.水分：12.0%，10.0%3.灰分：7.0%4.pH：5.5 5.VBN：70mg/100g 6.酸溶蛋白（大豆肽或小肽）：9%，14%7.氢氧化钾蛋白质溶解度：70%8.L-乳酸：2.5%8.总酸（有机酸）：3%9.抗原：定性0.6%KOH-SDS-PAGE 电泳，定量ELISA 10.寡糖 大豆低聚糖（水苏糖、棉子糖、蔗糖）：定性：TLC薄层层析 定量：行业标准NY/T 2218-2012 附录A发酵豆粕水苏糖的含量测定方法其它：符合饲料卫生标准,2、均衡的产品发酵指标,微生物检测,3、评估方法,例：如何判断无籽西瓜？,隔皮猜瓜？不靠谱！,为什么不直接切开？一目了然！,有些靠谱了,这样呢？,切一小片？不准确！,TLC薄层层析，寡糖定性检测，豆粕经过我们所筛选的微生物发酵后，不良寡糖蔗糖、棉籽糖、水苏糖都能够有效去除。水苏糖3%降到0.1-0.3%，棉籽糖1%降到0.4-0.6%,定性和定量（寡糖TLC检测图和水苏糖高效液相色谱）,4、寡糖的检测,棉籽糖的检测,4、寡糖的检测,分析：A、B样品的pH比益生肽的低，乳酸含量比较高，但是，VBN指标也比益生肽的高，尤其是B特别高，说明产品游离氨或非蛋白氮特别高，根据我们的数据，即时延长发酵周期也不会到82或118mg/g，KOH蛋白质溶解度B比A低，在70%以下，说明B的烘干温度过高，美拉德反应比较严重。C水分和粗蛋白数据差异比较大，水分很低，可以断定对方发酵时没有用46%的豆粕原料发酵。C的乳酸含量也比益生肽的低。,5、同行样品比较-常规指标,分析：抗原蛋白相对豆粕原料都能去除，我们产品-伴球蛋白一般在6-30mg/g，大豆球蛋白在15-60mg/g之间。我们已通过实验验证，通过高温加热的方式就可以把豆粕原料抗原蛋白能去除检测不出来，跑电泳时条带也比较干净，ELISA试剂盒检测也是在10mg/g以下。通过大量的试验要通过固体发酵的方式达到完全去除抗原蛋白是不可能实现的，除非采用液体发酵或酶解豆粕。,6、抗原蛋白-ELISA,7、检测设备,乳酸,分子检测设备,7、检测设备,电泳仪,7、检测设备,蛋白分析,7、检测设备,酶标仪,7、检测设备,合作大客户,安佑集团正大集团温氏集团禾丰集团金新农集团中慧集团九鼎集团六和集团*,海大集团旺大集团天普阳光集团希杰集团和美华集团特驱希望集团中晨康地集团英联集团*,九鼎合作建厂：湖南岳阳，九源生物,参观考察,评估检测,生产资质,标准,现场,样品,前期,合作,百闻，不如一见；选择，贵在理性；理性，贵在科学；科学，贵在有效。欢迎到根源集团莅临指导！,张铁鹰，中国农业科学院北京畜牧兽医研究所电话：13911288868邮箱：,谢谢！,
