博士毕业答辩.ppt
1,甘草甜素对大鼠心肌缺血再灌注后的保护作用及其机制研究,2,研究背景,炎症反应是动脉粥样硬化的核心因素 炎症直接参与了动脉粥样斑块破裂的病理 生理学变化 炎症与心血管事件存在一定关系，所以干 预炎症反应为我们提供了冠心病治疗的 新的研究方向和途径,3,研究背景,HMGB1贯穿缺血再灌注损伤炎症反应的全过程HMGB1可以刺激单核细胞使其粘附作用增加，分泌更多的细胞因子和促炎介质HMGB1可以刺激中性粒细胞增加其迁移和粘附特性HMGB1诱导树突状细胞的成熟，增加其表面标志的表达和炎症细胞因子的分泌HMGB1可以上调血管内皮细胞表面ICAM-1和VCAM-1的表达，刺激血管内皮细胞释放TNF-和IL-8,4,研究背景,5,研究背景,6,研究背景,血浆HMGB1浓度与急性冠脉综合征的冠脉狭窄程度成正相关Clinica Chmica Acta,2009，6（16）139-42 败血症时，HMGB1的集聚可以促进心脏微血管血栓的形成Clinica Chmica Acta,2006，5（29）109-16 大鼠心肌缺血再灌注后HMGB1和TNF-协同通过促进JNK磷酸化，促进心肌细胞凋亡。Journal of Thrombosis and Haemostasis,2010，10（24）913-21,7,研究背景,8,研究背景,甘草甜素是一种甘草根部提取的活性水溶性组分，具有抗炎特性,9,研究背景,甘草甜素可以减轻小鼠脊髓损伤后的炎症反应，减轻组织损伤 SHOCK 2009，4（31）367-75 甘草甜素可以通过抑制库普弗细胞分泌HMGB1，减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤 J Pharmacol Exp Ther 2011,1(339)93-8 甘草甜素可以通过抑制HMGB1，减少脑细胞凋亡，减轻大鼠脑出血损伤 Neuropharmacology 2011,4(19)975-80,10,研究背景,甘草甜素抑制HMGB1的作用是否存在于心肌缺血再灌注中，国内外尚未见报道甘草甜素是否在心肌缺血再灌注损伤中也同样起到保护作用，国内外尚未见报道,11,研究假说,甘草甜素可以通过抑制HMGB1减少炎症 反应，减轻心肌缺血再灌注损伤 甘草甜素可以通过抑制心肌细胞凋亡减轻心肌缺血再灌注损伤,12,研究目的,甘草甜素可以通过抑制HMGB1减少心肌缺血再灌注后炎症反应 甘草甜素对心肌缺血再灌注损伤有保护作用,13,材料与方法,试验分组假手术组：12只，模型建立时只穿线，不结扎缺血再灌注组：12只，结扎冠状血流30分钟,放松结扎线后再灌注1小时，造成I/R损伤模型甘草甜素干预组：12只，术前7天，每天大鼠尾静脉注射甘草甜素预处理（10 mg/kg）甘草甜素+重组HMGB1组：12只，术前7天，每天大鼠尾静脉注射甘草甜素预处理（10 mg/kg）；结扎冠脉血流30分钟后大鼠尾静脉立即给予重组HMGB1（100g/鼠）,14,材料与方法,TTC法检测大鼠心肌梗死情况HE染色法检测大鼠心肌病理改变TUNNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡情况ELISA法检测大鼠血浆HMGB1、TNF-浓度Western Blot技术检测Bax、cyt C、JNK等蛋白表达水平,15,Sham,NS,GL,GL+HMGB1,建立心肌缺血再灌注模型,TTC检测大鼠心肌梗死的情况,TUNNEL技术检测心肌细胞凋亡情况,Western Blot 技术检测通道蛋白表达情况,16,结 果,实验各组大鼠心肌细胞坏死情况,17,结 果,实验各组大鼠心肌病理改变,18,结 果,实验各组大鼠血浆HMGB1的浓度,19,结 果,实验各组大鼠血浆TNF-的浓度,20,结 果,实验各组大鼠血浆IL-6的浓度,21,结 果,实验各组大鼠心肌细胞凋亡情况,22,结 果,Western Blot检测Bax、cyt-c蛋白表达情况,23,结 果,Western Blot检测P38、JNK、ERK蛋白表达情况,24,创新点,证实甘草甜素可以抑制HMGB1，减轻缺血再灌注后的炎症反应证实甘草甜素可以通过抑制JNK/Bax通路，减轻心肌细胞凋亡提出甘草甜素对心肌缺血再灌注损伤的保护作用,25,限制性,由于实验条件及实验时间的限制，免疫组化法完善缺血心肌组织HMGB1的表达情况。甘草甜素副作用比如电解质失衡、血管内皮损害等尚待进一步的研究本研究仅观察JNK等细胞通路在甘草甜素心肌保护中的作用，其信号转导通路尚需进一步探讨,26,结 论,甘草甜素可以通过抑制HMGB1，减轻缺血再灌注后的炎症反应证实甘草甜素可以通过抑制JNK/Bax细胞信号通路，减轻心肌细胞的凋亡甘草甜素对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,27,致 谢,论文完成之际，首先衷心感谢我的导师黎莉教授，在导师的悉心关怀和严格要求下，本课题得以顺利完成。导师高深的学术造诣、渊博的知识和丰富的经验，使我收益颇丰，终身难忘衷心感谢上海新华医院心内科李毅刚、张松教授以及心内科全体医护人员在临床学习期间和课题实施过程中给予的大力帮助感谢各位师兄师姐师弟师妹在本课题的实施过程和论文撰写过程中给予的无私帮助。我要特别感谢我的家人和我刚满月的女儿，感谢他们三年来无私的支持和深切的理解，在此致以深深的谢意最后衷心感谢所有帮助过我的人,28,攻读学位期间发表的学术成果,Chang-lin Zhai，Yuan-yuan Wang，Guiping An,Li Li,et al.Glycyrrhizin protects rat heart against ischemia-reperfusion injury through blockade of HMGB1-dependent phospho-JNK/Bax pathway.Acta Pharmacol Sin.2012,33(12)1477-87.(第一作者，SCI,IF:1.953）,29,谢谢,
