临床生化检验(肝功).ppt.ppt

肝功能常规生化检验,2,3,主要内容,肝功检测项目:(肝十二项)AST（谷草转氨酶）、ALT（谷丙转氨酶）D-BIL（直接胆红素）、T-BIL（总胆红素）TP（总蛋白）、ALB（白蛋白）、GLOB（球蛋白）ALP（碱性磷酸酶）GGT（-谷氨酰基转移酶）CHE（胆碱酯酶）TBA（总胆汁酸）PALB（前白蛋白）,4,肝功能检测,肝脏的基本功能 肝脏的代谢功能 肝脏的生物转化功能 肝脏的分泌与排泄功能,5,肝脏的代谢功能,接受来自消化道的各种物质合成除-球蛋白以外几乎所有的血浆蛋白合成胆汁酸加工和处理体内产生或外界进入的非营养物质肝脏是多种激素在发挥调节作用后降解的 主要部位,6,肝脏的生物转化功能,某些生物活性物质,代谢终产物,外界异物,氧化、还原,水解,剩余物质,结合,葡萄糖醛酸硫酸氨基酸,增加溶解度,排出体外,甲基化,乙酰化,排出体外,排出体外,7,肝脏的分泌与排泄功能,胆固醇,合成,初级胆汁酸,胆酸鹅脱氧胆酸,胆汁,结合形式,大部分,小肠,回肠末端,门静脉,95%,重吸收,结合胆汁酸,经细菌分解形成次级胆汁酸,8,9,血清转氨酶的测定,ALT（谷丙转氨酶）各器官中按含量多少依次为：肝脏、肾脏、心脏、骨骼肌等。在肝细胞中主要存在于细胞质中，只有少量在线粒体中，肝细胞中ALT活性比血清高2850倍。AST（谷草转氨酶）各器官中按含量多少依次为：心脏、肝脏、骨骼肌、肾脏等。在肝细胞中约80%存在于线粒体中，约20%存在于胞质中，血清中AST和ALT的活性比值约为1.15参考值 AST 37U/L(37)(酶速率法)ALT 42U/L(37)(酶速率法)AST/ALT 1.15左右,10,11,12,谷丙转氨酶(ALT),检测原理ALT+L-丙氨酸+-酮戊二酸 丙酮酸+L-谷氨酸 丙酮酸+NADH L-乳酸+NAD+在340nm处检测NADH的吸收峰来推算 血清中ALT的浓度,LDH,13,谷草转氨酶（AST）,检测原理AST+天门冬氨酸+-酮戊二酸 草酰乙酸+L-谷氨酸草酰乙酸+NADH L-苹果酸+NAD+在340nm处检测NADH的吸收峰来推算 血清中AST的浓度,MDH,14,临床意义,1、急性病毒性肝炎 ALT、AST均升高，急性肝炎早期，AST/ALT1 重症肝炎临终期会出现“酶胆分离”现象，即血中ALT浓度下降，甚至在正常范围内，而此时胆红素却进行性增高,15,2、慢性肝炎和脂肪肝 AST、ALT轻度上升，一般不超过参考值的3倍，有时可降至正常 但是慢性活动性肝炎，ALT多数升至参考值的35倍，且长期维持在一个较高的水平，如果伴有肝坏死，可升至参考值的10倍以上。脂肪肝时，ALT可持续轻度升高 并伴有高脂血症,16,3、肝硬化 取决于肝细胞坏死和肝纤维化程度 肝硬化病变累及线粒体时，多数AST升高程度可超过ALT（肝细胞中，AST80%存在于线粒体中）4、原发性肝癌 ALT可轻度升高或正常，提示可能并发肝坏死，预后严重5、其他疾病 AST升高如急性心肌梗死、右心 功能不全、肌营养不良、溃疡性结 肠炎、外伤等,17,附注：,正常新生儿ALT水平比成年人约高2倍，出生后约3 个月降至成年人的水平。新生儿的肝细胞膜通透性较大，ALT 从肝细胞渗入血浆较多，使血清ALT 水平升高。血清不宜反复冻融，以免影响酶活性。血清置41周，酶活性无显著变化。在常规ALT 测定中，不推荐冰冻保存血清标本。宜用血清标本测定。草酸盐、肝素、枸橼酸盐虽不抑制酶活性，但可引起反应液轻度混浊。红细胞内ALT 含量为血清中3 5 倍，应 避免标本溶血。,18,血清胆红素的测定,黄疸 血清中胆红素含量过高，则可扩散至组织中，组织被黄染。分类 溶血性 肝细胞性 胆汁淤积性,19,20,21,22,23,直接胆红素 血清与重氮试剂混合后，在规定时间内所测定的胆红素相当于直接胆红素含量，总胆红素减去直接胆红素即为间接胆红素 参考值：直接胆红素 06.8mol/L 间接胆红素 1.713.2mol/L,24,总胆红素测定 原理：血清胆红素+重氮试剂 偶氮胆红素 出现呈色反应，颜色深浅与胆红素含量成正比 参考值：3.420.5mol/L,甲醇、咖啡因,加速剂,25,临床意义:,总胆红素 判断有无黄疸 根据血清胆红素的分类，判断黄疸类型直接胆红素 当总胆红素水平升高时，D-BIL/T-BIL可来 协助鉴别黄疸 肝细胞黄疸 D-BIL/T-BIL常为40%60%梗阻性黄疸 D-BIL/T-BIL常 60%,26,附注：,应空腹采血，避免脂血引起反应液浑浊，轻度溶血对本法无影响，但是明显溶血可使测定结果偏低。血液标本和标准液应避免阳光直照，防止胆红素的光氧化。胆红素对光的敏感度与温度有关，血标本应避光置冰箱保存。标本保存冰箱可稳定3天，-70暗处保存可稳定3个月。,27,总蛋白（TP）测定,是血清所含各种蛋白质的总和可一定程度反映肝脏合成和储备功能测定方法：（推荐）双缩脲比色法 蛋白质中的肽键在碱性条件下与 Cu2+作用生成蓝紫色的化合物。,28,测定原理：在碱性条件下，蛋白质多肽链中的肽键与铜离子（Cu2+）络合形成紫红色化合物参考值;6080g/L,29,临床意义：,生理性波动：由于体液分布原因，长久卧床者比直立活动时约低45g/L；新生儿比成人低58g/L；60岁以上的老年人比成人低2g/L增高：血液浓缩:导致TP相对增高：如严重腹泻、呕吐、高热时急剧失水、休克、慢性肾上腺皮质功能减退 血浆蛋白质合成增加：主要见于 球蛋白合成增加、多发性骨髓瘤患 者,30,减低：血液稀释:导致TP浓度相对减低：静脉注射过多低渗溶液或各种原因引起的水、钠潴留 摄入不足或消耗增加：如食物中长期缺乏蛋白质、长期消化不良或某些消耗性疾病（结核、甲亢、恶性肿瘤等）蛋白质丢失：严重烧伤（血浆大量 丢失）、大量失血、肾病综合症时大 量蛋白尿或溃疡性结肠炎（肠道长期 丢失蛋白质）,31,白蛋白（ALB）测定,由肝实质合成，是血浆中含量最多的蛋白质，占TP的40%60%内源性氨基酸源的营养源，具有缓冲酸碱的能力血浆中重要的载体（胆红素、胆汁酸盐、前列腺素、类固醇激素，金属离子等）维持血浆胶体渗透压，其在体液中的 浓度可作为各种膜屏障完好的指标（分子量较小66400）,32,测定方法:,溴钾酚绿法（BCG法）：溴钾酚绿是一种阴离子染料，在PH4.2的缓冲液中，在非离子去垢剂聚氧乙烯月桂醚存在时，可与白蛋白结合成蓝绿色复合物，溶液由黄色变成蓝绿色，在660nm时比色参考值：3550g/L,33,临床意义:,受饮食中蛋白质的摄入量影响，可在一定程度上作为个体营养状态的评价指标增高：严重脱水减低：合成降低：急、慢性肝病 营养或吸收不良 分解或代谢增加：大面积组织损伤或 炎症 消耗性疾病：严重感染、恶性肿瘤等 异常丢失：肾病综合症、慢性肾炎 分布异常：门静脉高压腹水,34,球蛋白及其与白蛋白的比例,球蛋白增高：多见于炎症、免疫系统疾病 和肿瘤 细菌、病毒、寄生虫引起的急慢性 感染，如结核、麻风病、血吸虫 病、病毒性肝炎等 自身免疫性疾病：系统性红斑狼 疮、风湿、类风湿等 多发性骨髓瘤和淋巴瘤,35,球蛋白降低：见于血液稀释、严重营养不良、胃肠道疾病白蛋白与球蛋白比值（A/G）参考值：12:1 临床上常用来衡量肝脏疾病的严重程度 比值倒置：A/G1时，是慢性 肝炎或肝硬化的特征之一,36,前白蛋白（P-ALB）测定,由肝细胞合成，在电泳分离中（PH8.6）移速比白蛋白快，半寿期很短，仅12小时。除可作为组织修补的材料,还是一种运载蛋白，可以和T3、T4结合，还可以和视黄醇结合而具有运载维生素A的作用。,37,检测原理：血清中的PA与抗PA抗体在液相中反应成抗原抗体复合物，使反应液呈现浊度。当一定量抗体存在时，浊度与血清中PA（抗原）的含量成正比，利用散射比浊或透射比浊技术，与同样处理的PA标准比较，求得样品中PA 含量。参考值：散射比浊法：22 40 mg/dL,38,临床意义：诊断和监测营养不良：血清P-ALB在无感染的情况下，是儿童营养不良的灵敏指标。诊断肝病：在肝炎早期，其浓度下降往往早于其他血清蛋白成分的改变。有研究表明，动态随访测定血清P-ALB对重型肝炎预后有较大的参考价值。P-ALB明显上升，往往预后良好，P-ALB持久下降，预后险恶。是一种负性急性时相反应蛋白，急性时相反应时下降。有研究表明，P-ALB可以作为癌症的筛 选指标。,39,附注：,血清蛋白质的浓度用“g/L”表示，因为血清中各种蛋白质的相对分子质量不同，所以不能用mol/L 表示。本法属浊度反应，试剂有任何可见的混浊，应弃去不用，否则对结果有较大影响。血清标本如不能及时测定，应置28 冰箱保存，可稳定2天。,40,碱性磷酸酶（ALP）的测定,一组在pH 910.5的碱性环境中能催化有机磷酸酯水解的酶。血清ALP主要来源于肝脏、骨骼，少部分来自小肠和妊娠期胎盘组织。肝细胞产生的ALP一般从胆道排入小肠。,41,测定方法（酶动力法）：以磷酸对硝基酚为底物，2-氨基-2-甲基丙醇为缓冲液对硝基酚磷酸盐在ALP的作用下产对硝基酚和磷酸盐，在405nm除检测对硝基酚的吸收峰，计算出血清中的浓度。参考值：1 12 岁 500 U/L;12 15 岁 750 U/L;25 岁以上 40 150 U/L。,42,临床意义：生理性增高：妊娠3个月 即可产生ALP 9个月 到达高峰（可为同龄妇女的3-4倍）分娩后1个月 恢复正常 新生儿、儿童、青少年骨骼生长期比成人要高 15岁（第一个高峰）是成人的23倍 1018岁（第二个高峰）是成人的45倍 肝胆管梗阻：ALP升高。（ALP分布在肝细胞的血窦侧和毛细胆 管侧的微绒 毛上，经胆汁排入小肠。梗阻性黄疸时，由于肝内、外梗阻胆 汁排出不畅，再加上胆汁具有表面活 性剂作用可洗脱ALP返流入血，使血 中浓度升高）,43,肝炎或肝硬化：可轻度升高，但很少超 过上 限3倍 原发或继发性肝癌：明显升高。（肿瘤组织或炎症刺激肝细胞产生ALP）骨骼系统疾病：可有不同程度的升高（骨折恢复 期、佝偻病转移性骨肿瘤）其他疾病：甲亢、肢端肥大症等可轻度 升高,44,附注：,血清置室温(25)ALP活性显示轻度升高。例如室温6 h，酶活性约增高1%，置1-4天，酶活性增高3%-6%。血清贮存冰箱(4)酶活性亦出现缓慢地升高。冰冻血清ALP 活性降低，但当血清复温后，酶活性会慢慢恢复。质控血清或冻干质控血清亦呈现类似的ALP 活性升高现象一般用血清或肝素抗凝血浆测定 ALP 活性。抗凝剂如草酸盐、柠檬酸盐和EDTANa2 能抑制ALP 的活性，不能使用这类抗凝剂的血浆做ALP的活性测定ALP 活性与血清在反应液中所占体积分数有关。已发现当血清体积分数从1/26 降低到1/51时，所 测出的酶活性随之增高;但低于1/51 后，酶 活性没有进一步增加。这一效应的原因还 不清楚，可能是因为在高稀释度下ALP 多 聚体解聚所致,45,-谷氨酰转肽酶的测定,-谷氨酰转肽酶是在氨基酸吸收中，参与-谷氨基循环的一个重要的酶。血清中GGT主要来自肝脏，少量来自肾脏、胰腺。GGT在肝脏中主要由肝细胞的线粒体产生，90%为膜结合型。,46,测定原理：以-谷氨酸-3-羧基-4-对硝基苯胺和双甘肽为底物，GGT作用于-谷氨酸-3-羧基-4-对硝基苯胺和双甘肽产生-谷氨酸双甘肽和5-氨基-2-硝酸苯甲酸盐，在450nm处检测吸收峰，计算GGT的浓度。-谷氨酸-3-羧基-4-对硝基苯胺+双甘肽-谷氨酸双甘肽+5-氨基-2-硝酸苯甲酸盐参考范围：男性：11U/L50U/L 女性：7U/L32U/L,GGT,47,临床意义：生理性变化：新生儿至6个月以内的小婴儿明显高于成人35倍。病毒性肝炎：急性肝炎肝细胞可合成和释放GGT，是其在血清中的浓度轻度升高，变化一般与ALT平行，但是幅度较低。（若在恢复期其他肝功能指标都已正常，但GGT仍未复原，提示肝炎尚未痊愈，若反复波动或长期维持较高水平，则应考虑肝炎有慢性化趋势）,48,原发性或转移性肝癌：增高。GGT和AFP同样具有癌胚抗原的性质，特别是在结节性增生时出现强活性，能够反映肝内占位性病变。监测血中的GGT浓度可观察肿瘤疗效和预后。梗阻性黄疸：血中GGT升高明显，可达正 常的530倍。是胆汁淤积、胆道梗阻最敏感的酶。（梗阻时间越长、程度越重，GGT上升幅度越大）,49,急、慢性酒精性肝炎：血清浓度升高，但是GGT升高幅度跟饮酒量没有明显的相关性。肝硬化：代偿期正常，若失代偿期或伴有炎症、进行性纤维化则GGT升高，其升高程度与纤维化成正比。,50,其他：如系统性红斑狼疮（SLE）、单核细胞增多症等可使GGT轻度升高。注：测定ALP、GGT有助于鉴别ALP的来源：GTT与ALP同时增高常源于肝脏疾病，而GGT正常，ALP升高常源于肝外疾病，如骨骼疾病。,51,附注：,红细胞中L-谷氨酰基移移酶含量低，溶血标本对测定结果影响不大血清中GGT 的活力，在室温或4 可稳定7d;在冷冻状态下可稳定2 个月,52,胆碱酯酶（CHE）的测定,胆碱酯酶分为两大类：真性胆碱酯酶，也叫乙酰胆碱酯酶（ACHE），存在于红细胞、肺、脑组织、交感神经节等处。主要是水解乙酰胆碱。假性乙酰胆碱（PCHE）存在于血清或血浆中，出可作用于乙酰胆碱，还可作用于其他胆碱类化合物。PCHE是一种糖蛋白，由肝脏合成。含有机 磷的杀虫剂能抑制红细胞内的真性胆 碱酯酶和血清中的假性胆碱酯酶。,53,测定原理:CHE作用于硫代丁酰胆碱，最后生成5,5-二硫双2-硝基苯甲酸是黄色化合物，动态检测410nm除的最大吸收峰，计算出血清胆碱酯酶的浓度硫代丁酰胆碱+CHE 硫代胆碱+丁酸硫代胆碱+二硫代双硝基苯甲酸5-巯基-2-硝基苯甲酸+2-硝基苯甲酸-5-硫基硫代胆碱 参考范围：4000 12600U/L,54,临床意义：肝脏疾病：在病情严重的肝炎患者中，PCHE降低与肝病变程度成正比。慢性肝炎、肝硬化、肝癌时如PCHE持续降低则提示预后不良。口服避孕药或雌激素时，血清PCHE会降低营养不良、有机磷中毒血清PCHE会降低肥胖、脂肪肝、甲亢等血清PCHE会升高,55,附注：,用血清或肝素血浆。轻度溶血不干扰，但必须离心去除红细胞及影细胞。标本如无菌，PCHE 在室温可稳定数十天,-20稳定3 年血清经稀释后，PCHE 易失活，如需稀释必须在用前进行。,56,总胆汁酸（TBA）的测定,胆汁酸在肝内合成、分泌、加工、转化。是胆汁的主要成分，当肝细胞损伤或胆道阻塞时，会引起胆汁酸代谢障碍，出现血清胆汁酸增高。测定血清中总胆汁酸可以作为判断肝胆系统正常与否的重要信息。血清中TBA的诊断价值已得到广泛重视，它不仅用于临床诊 断，而且还能反映病情和估计疾病 预后。,57,测定原理：循环酶法（第五代）胆汁酸被3-羟基类固醇脱氢酶及-硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸氧化型特异性的氧化，生成的3-酮类固醇在3羟基类固醇脱氢酶及-硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸还原型存在下，生成胆汁酸及-硫代烟酰胺嘌呤二核苷酸氧化型。参考值：015mol/L,58,临床意义：急性肝炎：在肝实质细胞病变时，患者的胆汁酸水平升高慢性活动性肝炎：血清胆汁酸水平升高（由于门-腔静脉旁路的形成，胆汁酸不再局限于肝肠循环中,胆汁酸可以直接进入腔静脉导致分布异常。）胆汁淤积综合症：血清胆汁酸升高（肝内外胆汁淤积，胆汁分泌障碍，不能有效的排 出胆汁酸）,59,附注：,由于血清中TBA 含量低，样品中存在干扰物质的影响相对较大，其中主要为乳酸脱氢酶(LDH)。由LDH 生成的NADH 往往比TBA 生成的量要大得多。因此，测定前除去血清中LDH 的影响至关重要。方法有血清67 加温30 min加草氨酸作为LDH 封闭剂碱或酸处理用丙酮酸钠抑制LDH 活性。上述四类方法中，以丙酮酸钠抑制法最好，可免去前处理步骤，直接加 入反应体系，不影响体系的pH，且对 反应无干扰,60,谢谢！Thank you!,