生物化学实验基本技能训练课件.ppt

生物化学实用技术,主讲老师：刘名江生物与生态工程学院,四、生物化学实验室基础知识,（一）化学试剂及其取用（二）化学溶液及其配制（三）常用仪器机器操作,（一）化学试剂及其取用,1、化学试剂的分类根据化学试剂的纯度和杂质含量，国内将化学试剂分为五个等级，我国国家标准还规定了不同等级试剂标签的颜色和应用范围。,2、化学试剂的包装,盛装固态、液态化学剂的容量一般有玻璃、塑料和金属的三类。玻璃容器可以盛装各种化学试剂，包括可燃性的高纯度的试剂。而塑料和金属容器虽不适宜于盛装各种化学试剂，但比玻璃容器不易破裂。化学试剂所采用的包装容器是根据试剂的性质和纯度来确定的。,3、化学试剂的取用,1.固体试剂的取用规则（1）要用干净的药勺取用。用过的药勺必须洗净和擦干后才能使用，以免沾污试剂。（2）取用试剂后立即盖紧瓶盖，防止药剂与空气中的氧气等起反应。（3）称量固体试剂时，必须注意不要取多，取多的药品，不能倒回原瓶。因为取出已经接触空气，有可能已经受到污染，再倒回去容易污染瓶里的其它药剂。（4）一般的固体试剂可以放在干净的纸或表面皿上称量。具有腐蚀性、强氧化性或易潮解的固体试剂不能在纸上称量，应放在玻璃容器内称量。如氢氧化钠有腐蚀性，又易潮解，最好放在烧杯中称取，否则容易腐蚀天平。（5）有毒的药品称取时要做好防护措施。如戴好口罩、手套等。,2.液体试剂的取用规则（1）从滴瓶中取液体试剂时，要用滴瓶中的滴管，滴管绝不能伸入所用的容器中，以免接触器壁而玷污药品。从试剂瓶中取少量液体试剂时，则需使要专用滴管。装有药品的滴管不得横置或滴管口向上斜放，以免液体滴入滴管的胶皮帽中，腐蚀胶皮帽，再取试剂时受到污染。（2）从细口瓶中取出液体试剂时，用倾注法。先将瓶塞取下，反放在桌面上，手握住试剂瓶上贴标签的一面，逐渐倾斜瓶子，让试剂沿着洁净的管壁流入试管或沿着洁净的玻璃棒注入烧杯中。取出所需量后，将试剂瓶扣在容器上靠一下，再逐渐竖起瓶子，以免遗留在瓶口的液体滴流到瓶的外壁。（3）在某些不需要准确体积的实验时，可以估计取出液体的量。例如用滴管取用液体时，1ml相当于多少滴，5ml液体占容器的几分之几等。倒入的溶液的量，一般不超过其容积的1/3。（4）定量取用液体时,用量筒或移液管取。量筒用于量度一定体积的液体，可根据需要选用不同量度的量筒，而取用准确的量时就必须使用移液管。（5）取用挥发性强的试剂时要在通风橱中进行，做好安全防护措施。,3、化学试剂的取用,二、化学溶液及其配制,1、一般溶液的配制及保存方法 根据配制溶液的准确度要求来确定以下内容：（1）哪一级别的天平；（2）何种容器定容；（3）记录数据准确到哪几位有效数字；配制及保存溶液时可遵循下列原则：（1）配制溶液时，要合理选择试剂的级别，不许超规格使用试剂，以免造成浪费。（2）若经常并大量使用的溶液，可先配置浓度约大10倍的储备液，使用时取储备液稀释10倍即可。（3）若试剂溶解时有放热现象，或以加热促使其溶解的，应待其冷却后，再移至试剂瓶或容量瓶中。（4）对易水解的固体试剂如FeCl3等，配置其溶液时，可先用适量的酸或碱溶解，再用蒸馏水定容。（5）配制稀硫酸溶液时，应特别注意，试剂稀释应在不断搅拌下将浓硫酸缓慢倒入盛水的容器内，切不可颠倒操作顺序。,（6）配好的溶液盛装在试剂瓶中，应贴好标签，注明溶液的浓度、名称及配置日期。（7）易侵蚀或腐蚀玻璃的溶液，不能盛放在玻璃瓶中，如含氟的盐类，苛性碱等应保存在聚乙烯塑料瓶中。（8）易挥发、易分解的试剂及溶液及有机溶剂等都应存放在综合瓶中，密封好后放在暗处阴凉地方，避免光的照射。2、标准溶液的配制方法,标准溶液及基准物质定义 标准溶液是指已知准确浓度的溶液，它是滴定分析中进行定量计算的依据之一。能用于直接配制标准溶液的物质，称为基准物质或基准试剂，它是用来确定某一溶液准确浓度的标准物质。,作为基准物质必须符合下列要求：（1）试剂必须具有足够高的纯度，一般要求其纯度在99.9%以上，所含的杂质应不影响滴定反应的准确度。（2）物质的实际组成与它的化学式完全相符，若含有结晶水（如硼砂Na2B4O7.10H2O），其结晶水的数目也应与化学式完全相符。（3）试剂应该稳定。例如，不易吸收空气中的水分和二氧化碳，不易被空气氧化，加热干燥时不易分解等。（4）试剂最好有较大的摩尔质量，这样可以减少称量误差。常用的基准物质有纯金属和某些纯化合物，如Cu,Zn,Al,Fe和K2Cr2O7，Na2CO3,MgO,KBrO3 等，它们的含量一般在99.9%以上，甚至可达99.99%。,注意：有些高纯试剂和光谱纯试剂虽然纯度很高，但只能说明其中杂质含量很低。由于可能含有组成不定的水分和气体杂质，使其组成与化学式不一定准确相符，致使主要成分的含量可能达不到99.9%，这时就不能用作基准物质。,标准溶液的配制与标定的一般规定：1配制及分析中所用的水及稀释液，在没有注明其它要求时，系指其纯度能满足分析要求的蒸馏水或离子交换水。2工作中使用的分析天平、滴定管、容量瓶及移液管等均需较正。3标准溶液规定为20时，标定的浓度为准（否则应进行换算）。4在标准溶液的配制中规定用“标定”和“比较”两种方法测定时，不要略去其中任何一种，而且两种方法测得的浓度值之相对误差不得大于0.2，以标定所得数字为准。5标定时所用基准试剂应符合要求，含量为99.95-100.05%，换批号时，应做对照后再使用。基准试剂需定期的进行期间核查。6配制标准溶液所用药品应符合化学试剂分析纯级。7配制0.02（M）或更稀的标准溶液时，应于临用前将浓度较高的标准溶液，用煮沸并冷却水稀释。8碘量法的反应温度在1520之间。,配制标准溶液的方法,1.直接配制法 用分析天平准确地称取一定量的物质，溶于适量水后定量转入容量瓶中，稀释至标线，定容并摇匀。根据溶质的质量和容量瓶的体积计算该溶液的准确浓度。例如：氯化钠、葡萄糖、K2Cr2O7、KBrO3等。很多仪器分析中用到的标准物质配制的标准溶液，如三聚氰胺、苯甲酸、维生素类，这些都是通过直接配制法进行制备相应的标准溶液。,配制步骤：溶解-转移-洗涤-定容-摇匀,2.间接配制法（标定法）需要用来配制标准溶液的许多试剂不能完全符合上述基准物质必备的条件。例如：NaOH极易吸收空气中的二氧化碳和水分，纯度不高；市售盐酸中HCl的准确含量难以确定，且易挥发；KMnO4和Na2S2O3等均不易提纯，且见光分解，在空气中不稳定等。因此，这类试剂不能用直接法配制标准溶液，只能用间接法配制，即先配制成接近于所需浓度的溶液，然后用基准物质（或另一种物质的标准溶液）来测定其准确浓度。这种确定其准确浓度的操作称为标定。,在常量组分的测定中，标准溶液的浓度大致范围为0.01 mol/L至1 mol/L，通常根据待测组分含量的高低来选择标准溶液浓度的大小。例如：配制0.1mol/LHCl标准溶液，先用一定量的浓HCl加水稀释，配制成浓度约为0.1mol/L的稀溶液，然后用该溶液滴定经准确称量的无水Na2CO3 基准物质，直至两者定量反应完全，再根据滴定中消耗HCl溶液的体积和无水Na2CO3 的质量，计算出HCl溶液的准确浓度。大多数无法通过直接配制的标准溶液的准确浓度是通过标定的方法确定的。,间接法配制的标准溶液标定过程：,为了提高标定的准确度，标定时应注意以下几点：标定单人应平行测定，至少重复4次，并要求测定结果的相对偏差不大于0.2%，双人8平行测定。为了减少测量误差，称取基准物质的量不应太少，最少应称取0.15以上；同样滴定到终点时消耗标准溶液的体积也不能太小，最好在30-40L之间。配制和标定溶液时使用的量器，如滴定管，容量瓶和移液管等，在必要时应校正其体积，并考虑温度的影响。标定好的标准溶液应该妥善保存，避免因水分蒸发而使溶液浓度发生变化。(5)有些不够稳定，如见光易分解的gNO3和 KMnO4等标准溶液应贮存于棕色瓶中，并置于暗处保存。(6)能吸收空气中二氧化碳并对玻璃有腐蚀作用的强碱溶液，最好装在塑料瓶中，并在瓶口处装一碱石灰管，以吸收空气中的二氧化碳和水。,化学常见仪器使用,化学仪器在化学中的地位,化学（Chemistry）是研究物质的组成、结构、性质、以及变化规律的科学。世界是由物质组成的，化学则是人类用以认识和改造物质世界的主要方法和手段之一，它是一门历史悠久而又富有活力的学科，它的成就是社会文明的重要标志。化学是一门以实验为基础的学科，实验又不得不依赖仪器实现，所以仪器在化学学科中具有非常重要的地位，能否正确，规范的使用各种仪器是学好化学的关键。,化学仪器的简单分类,从功能及用途：合成仪器，分离仪器，检测仪器，联用仪器等；从材料：玻璃仪器，非玻璃仪器（含大型仪器）仪器来源：虚拟仪器和现实仪器,化学常见仪器的规范使用,（一）、容器与反应器（二）、计量仪器（三）、干燥仪器（四）、其他常用化学仪器,（1）试管 主要用途：常温或加热条件下，用作少量试剂的反应容器。收集少量气体和气体的验纯。盛放少量药品。使用方法及注意事项：可直接加热，用试管夹夹住距试管口1/3处。试管的规格有大有小。不加热时，试管内盛放的液体不超过容积的1/2，加热时不超过1/3。加热前外壁应无水滴；加热后不能骤冷，以防止试管破裂。加热时，试管口不应对着任何人。给固体加热时，试管要横放，管口略向下倾斜。不能用试管加热熔融NaOH等强碱性物质。,1、可直接加热,（一）、容器与反应器,（2）蒸发皿 主要用途：溶液的蒸发、浓缩、结晶。干燥固体物质。使用方法及注意事项：盛液量不超过容积的2/3。可直接加热，受热后不能骤冷。应使用坩埚钳取放蒸发皿。,（3）坩埚 主要用途：用于固体物质的高温灼烧。使用方法及注意事项：把坩埚放在三脚架上的泥三角上直接加热。取放坩埚时应用坩埚钳。加热后可放在干燥器中或石棉网上冷却。应根据加热物质的性质不同，选用不同材料的坩埚。,2、垫石棉网可加热,（1）烧杯 主要用途：用作固体物质溶解、液体稀释的容器。用作较大量试剂发生反应的容器。用于过滤、渗析、喷泉等实验，用于气密性检验、尾气吸收装置、水浴加热等。冷的干燥的烧杯可用来检验气体燃烧有无水生成；涂有澄清石灰水的烧杯可用来检验CO2气体。使用方法及注意事项：常用规格有50mL、100mL、250mL等，但不用烧杯量取液体。应放在石棉网上加热，使其受热均匀；加热时，烧杯外壁应无水滴。盛液体加热时，不要超过烧杯容积的2/3，一般以烧杯容积的1/2为宜。溶解或稀释过程中，用玻璃棒搅拌时，不要触及杯底或杯壁。,（2）烧瓶 主要用途：可用作试剂量较大而有液体参加的反应容器，常用于各种气体的发生装置中。蒸馏烧瓶用于分离互溶的、沸点相差较大的液体。圆底烧瓶还可用于喷泉实验。使用方法及注意事项：应放在石棉网上加热，使其受热均匀；加热时，烧瓶外壁应无水滴。平底烧瓶不能长时间用来加热。不加热时，若用平底烧瓶作反应容器，无需用铁架台固定。,（3）锥形瓶 主要用途：可用作滴定反应的反应器。代替试管、烧瓶等作气体发生的反应器。在蒸馏实验中，用作液体接受器，接受馏分。使用方法及注意事项：滴定时，只振荡不搅拌。加热时，需垫石棉网。,（1）集气瓶（瓶口边缘磨砂）主要用途：与毛玻璃片配合，可用于收集和暂时存放气体。用作物质与气体间反应的反应容器。使用方法及注意事项：不能加热。将瓶口与毛玻璃片涂抹一层薄凡士林，以利气密。进行燃烧实验时，有时需要在瓶底放少量水或细沙。,3、不能加热,2）广口瓶、细口瓶（瓶颈内侧磨砂）主要用途：广口瓶用于存放固体药品，也可用来装配气体发生器（不需要加热）。细口瓶用于存放液体药品。使用方法及注意事项：一般不能加热。酸性药品、具有氧化性的药品、有机溶剂，要用玻璃塞；碱性试剂要用橡胶塞。对见光易变质的要用棕色瓶。,（3）滴瓶 主要用途：用于存放少量液体，其特点是使用方便，使用方法及注意事项：滴管不能平放或倒立，以防液体流入胶头。盛碱性溶液时改用软木塞或橡胶塞。不能长期存放碱性试剂。,（4）启普发生器 主要用途：固液不加热制气体反应的反应器（氢气，硫化氢，二氧化碳）特点：随开随用、随关随停。使用方法及注意事项：不可加热，也不能用于剧烈放热的反应，使用前应先检查装置的气密性。,1、粗量仪器（1）量筒 主要用途：粗略量取液体的体积（其精度可达到0.1mL）。通过量取液体的体积测量固体、气体的体积。使用方法及注意事项：有10mL、25mL、50mL、100mL、200mL、500mL等规格的，量筒规格越大，精确度越低。量筒无零刻度。量液时，量筒必须放平，视线要跟量筒内液体的凹液面的最低处保持水平。,（二）、计量仪器,2、精密量度仪器（1）滴定管主要用途：准确量取一定体积的液体（可精确到0.01mL）。中和滴定时计量溶液的体积。使用方法及注意事项：酸式滴定管不能盛放碱性试剂；碱式滴定管不能盛放酸性试剂、具有氧化性的试剂、有机溶剂等。使用前要检验是否漏水。,（2）容量瓶 主要用途：配制一定体积浓度准确的溶液（如物质的量浓度溶液）。使用方法及注意事项：颈部有一环形标线，瓶上标有温度和容器，常用规格有50mL、100mL、250mL、500mL等。使用前要检验是否漏水。不用来量取液体的体积。,（3）移量管 主要用途：移取一准确体积的溶液。使用方法及注意事项：管体上标有温度，常用规格有01ml、02ml、05ml、lml、2ml、5ml及10ml等，供量取10ml以下任意体积的液体之用。使用前要检查管口是否破损；在精密分析中使用的移液管和吸量管都不允许在烘箱崐中烘干；移液管与容量瓶常配合使用,因此使用前常作两者的崐相对体积的校准；为了减少测量误差,吸量管每次都应从最上面刻度为起始点,往下放出所需体积,而不是放出多少体积就吸取多少体积。,（4）移液管 主要用途：移取一确定体积的溶液。使用方法及注意事项：管体上标有温度，常用规格有0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL等。使用前要检查管口是否破损，写着要吹就吹,没有写就不用吹；放液要挨着瓶壁,液体放完15秒后才拿出。,（5）比色管（6）移液枪,（1）托盘天平主要用途：用于粗略称量物质的质量，其精确度可达到0.1g。使用方法及注意事项：称量前调“0”点：游码移零，调节天平平衡。称量时，两盘垫纸，左物右码。易潮解、有腐蚀性的药品必须放在玻璃器皿里称量。称量后：砝码回盒，游码回零。,3、计量器,（2）温度计 主要用途：用于测量液体或蒸气的温度。使用方法及注意事项：应根据测量温度的高低选择适合测量范围的温度计，严禁超量程使用。测量液体的温度时，温度计的液泡要悬在液体中，不能触及容器的底部或器壁。蒸馏实验中，温度计的液泡在蒸馏烧瓶支管口略下部位。不能将温度计当搅拌棒使用。,1、干燥管 主要用途：内装固体干燥剂（高氯酸镁、氯化钙、五氧化二磷吸收水份；碱石灰、烧碱石棉或浸有苛性钠溶液的石棉用于吸收二氧化碳气体），用于气体的干燥或接入容器，防止物质吸收水汽或CO2等。使用方法及注意事项：球体和细管处一般要垫小棉花球或玻璃绒，以防止细孔被堵塞气体从口径大的一端进入，从口径小的一端流出用干燥管之前，务必检查一下干燥管是否是通的。,（三）、干燥仪器,2、干燥器 主要用途：用于存放干燥的物质，或使潮湿的物质干燥。使用方法及注意事项：很热的物体稍冷后放入。开闭器盖时要水平推动。不能使用液体干燥剂（如浓硫酸），一般用无水氯化钙或硅胶等。,1、酒精灯 主要用途：化学实验室中的常用热源。使用方法及注意事项：盛酒精的量不得超过容积的3/4，也不得少于容积的1/4。绝对禁止向燃着的酒精灯中添加酒精，以免失火。熄灭时用灯帽盖灭，不能用嘴吹灭。需要获得更高的温度，可使用酒精喷灯（1000摄氏度）。,（四）、其他常用化学仪器,2、洗气瓶 主要用途：用以洗涤气体，除去其中的水分或其他气体杂质。使用方法及注意事项：使用时要注意气体的流向，一般为“长进短出”。瓶内加入的液体试剂量以容积的1/3为宜，不得超过。,（3）漏斗 主要用途：（1）普通漏斗向小口容器中注入液体。用于过滤装置中。用于防倒吸装置中。（2）长颈漏斗向反应器中注入液体。组装气体发生装置。（3）分液漏斗分离互不相溶的液体。向反应器中滴加液体。组装气体发生装置。使用方法及注意事项：不能用火直接加热。长颈漏斗下端应插入液面以下。分液漏斗使用前需检验是否漏水（4）热漏斗：趁热分离过滤使用。,（4）玻璃棒 主要用途：常用于搅拌、引流，在溶解、稀释、过滤、蒸发、物质的量浓度溶液配制等实验中应用广泛。使用方法及注意事项：搅拌时避免与器壁接触（重结晶实验例外）。,结晶皿,气体干燥塔,干燥器,布式漏斗,离心试管,其他常见仪器：,化学仪器的现状及发展动向,化学仪器正向智能化方向发展；发展趋势主要表现是：基于微电子技术和计算机技术的应用实现分析仪器的自动化，通过计算机控制器和数字模型进行数据采集、运算、统计、处理，提高分析仪器数据处理能力，数字图像处理，系统实现了分析仪器数字图像处理功能的发展；分析仪器的联用技术向测试速度超高速化、分析试样超微量化、分析仪器超小型化的方向发展；仪器微型化，检测实时化，样品无损化，使用智能化要求；（实时，无损，在线的检测技术）,傅里叶红外光谱仪,荧光光谱仪,拉曼散射光谱仪,原子吸收光谱仪,原子发射光谱仪,原子荧光光谱仪,电化学仪器 分类：电化学工作站（国产上海，美国BAS系统）；电极：常规电极，离子电极，修饰电极（纳米电极，离子液体电极）；,银电极,玻碳电极,pH电极,pH复合电极,金电极,(三)常用仪器及其操作,1、量筒2、移液管和吸量管3、容量瓶4、滴定管5、可调式微量移液管6、PH计,量 筒,量筒是用来量取液体体积的一种玻璃仪器，一般规格以所能度量的最大容量（mL）表示，常用的有10mL，20mL，25mL，50mL，100mL，250mL、500mL，1000mL等多种规格。,一、量筒的使用要点,1、量筒的规格,2、量筒的选择方法,量筒外壁刻度都是以mL为单位。10mL量筒每小格表示0.1mL，而50mL量筒有每小格表示1mL或0.5mL的两种规格。可见，绝大多数的量筒每小格是量筒容量的1/100，少数为1/50。量筒越大，管径越粗，其精确度越小，由视线的偏差所造成的读数误差也就越大。所以，实验中应根据所取溶液的体积，尽量选用能一次量取的最小规格的量筒。分次量取会引起较大误差。如量取70mL液体，应选用100mL量筒一次量取，而不能用10mL量筒量取7次。,3、液体的注入方法,向量筒里注入液体时，应用左手拿住量筒，使量筒略倾斜，右手拿试剂瓶，标签对准手心。使瓶口紧挨着量筒口，让液体缓缓流入，待注入的量比所需要的量稍少（约差1mL）时，应把量筒水平正放在桌面上，并改用胶头滴管逐滴加入到所需要的量。,4、量筒的刻度,量筒没有“0”刻度，“0”刻度即为其底部。一般起始刻度为总容积的110或120。例如：10mL量筒一般从0.5mL处才开始有刻度线，所以，我们使用任何规格的量筒都不能量取小于其标称体积数的120以下体积的液体，否则，误差太大。应该改用更小的合适量筒量取。在实验室做化学实验时，量筒的刻度面不能背对着自己，这样使用起来很不方便。因为视线要透过两层玻璃和液体，不容易看清。若液体是浑浊的，就更看不清刻度，而且看刻度数字也不顺眼，所以刻度面正对着自己为好。,5、读取液体的体积方法,注入液体后，要等一会，使附着在内壁上的液体流下来，再读取刻度值。否则，读出的数值将偏小。读数时，应把量筒放在平整的桌面上，观察刻度时，视线、刻度线与量筒内液体的凹液面最低处三者保持水平，再读出所取液体的体积数。否则，读数会偏高或偏低。,6、关于量筒仰视与俯视的问题,在看量筒的容积时是看液面的中心点 仰视时视线斜向上 视线与筒壁的交点在液面下所以读到的数据偏低，实际值偏高。俯视时视线斜向下 视线与筒壁的交点在液面上所以读到的数据偏高，实际值偏低。,7、注意事项,量筒面上的刻度是指室内温度在20时的体积数。温度升高，量筒发生热膨胀，容积会增大。由此可知，量筒是不能加热的，也不能用于量取过热的液体，更不能在量筒中进行化学反应或配制溶液。量筒一般只能用于要求不是很严格时使用，通常可以应用于定性分析和粗略的定量分析实验，精确的定量分析是不能使用量筒进行的，因为量筒的误差较大，此时可用移液管或滴定管来代替。,从量筒中倒出液体后是否要用水冲洗要看具体情况而定。如果是为了使所取的液体量更准确，似乎要用水洗涤后并把洗涤液倒入所盛液体的容器中，这是不必要的。因为在制造量筒时已经考虑到有残留液体这一点；相反，如果洗涤反而使所取体积偏大。如果是用同一量筒再量别的液体，这就必须用水冲洗干净并干燥，为防止相互污染。,10mL的量筒一般不需读取估读值。因为量筒是粗量器，并且又是量出仪器,在倒出所量取的液体时，总会有12滴（1滴相当于0.05mL）附着在内壁上而无法倒出，其相差的体积大小已经和其最小刻度差相同，所以估读值再准确也无多大意义，只需读取到0.1mL。规格大于10mL的量筒一般需要读取估读值，若不读取，误差反而更大。因此，无论多大规格的量筒，一般读数都应保留到0.1mL。,移液管和吸量管（刻度吸管）,分类：10ml,5ml,2ml,1ml,0.5ml,0.2ml,0.1ml（吹?）,移液管,吸量管,刻度吸管的操作方法,1使用前：首先要看刻度吸管标记、刻度标线位置等。2吸液：用右手的拇指和中指捏住刻度吸管的上端，将管的下口插入欲吸取的溶液中；左手拿洗耳球，将洗耳球内空气排出，接在管的上口把溶液慢慢吸入至刻度以上，立即用右手的食指按住管口。3调节液面：将刻度吸管向上提升离开液面，略为放松食指（有时可微微转动吸管）使管内溶液慢慢从下口流出，直至溶液的弯月面底部与标线相切为止（看刻度时，应将刻度吸管的刻度与眼睛平行），立即用食指压紧管口。将尖端的液滴靠壁去掉，移出刻度吸管，插入承接溶液的器皿中。4放出溶液：刻度吸管下端紧靠锥形瓶内壁，稍松开食指，让溶液沿瓶壁慢慢流下，流完后管尖端接触瓶内壁停留数秒后，再将刻度吸管移去；若刻度吸管上标有“吹”，则需将管内残余液体吹出。,法国GILSON 芬兰Labsystems 日本NICHIRYO 美国TOMOS 德国Brand 德国 Eppendorf 美国JENCONS 芬兰雷勃 Finnpipette,工欲善其事，必先利其器,二、微量可调式移液器（micropipette,俗称“加样枪”）的构造和使用方法,微量可调式移液器的规格,用途规格：5 ml移液器(1000-5000ul)1ml移液器(200-1000)200ul移液器(20-200)100ul移液器(20-100ul)10ul移液器(0.5-10ul)2 ul移液器(0.1-2ul),移液器及配套吸嘴（俗称枪头，tip）,0.5-20l,20-200l,100-1000l,1.5ml,0.2ml,2ml,移液器常用的盛接容器,酶标板,离心管,微量可调式移液器的构造,扭动转轴，即可调整和改变移液器容量,手指把手,吸头的排出器,容量指示,吸头排出器套筒,吸头圆锥体,微量可调式移液器的原理,1956年，由德国生理化学研究所的科学家Schnitger发明.活塞冲程加样活塞冲程(空气垫)加样器的结构是空气垫、活塞。空气垫的作用是将吸于塑料吸头内的液体样本与加样器内的活塞分隔开来；活塞在加样器内作弹簧样运动，通过空气垫带动液体进入吸头中。,移液器的操作方法-1,1.量程的调节：千万不要将按钮旋出量程以外（！），否则会卡住内部机械装置而损坏了移液枪。,移液器的操作方法-2,2.枪头（吸头）的装配 将加样枪垂直插入枪头（pipette tips）中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。注意：不要使劲地在枪头盒子上敲，这样会导致移液枪的内部配件（如弹簧）因敲击产生的瞬时撞击力而变得松散，甚至会导致刻度调节旋钮卡住。,Example of tip sizes:,移液器的操作方法-3,3.吸液 吸取液体前，先用大拇指将按钮按下至第一停点，移液器保持竖直状态，将枪头插入液面下23毫米。然后慢慢松开按钮回原点，取出加样枪。,移液器的操作方法-4,4放出溶液 将加样枪加入盛接溶液的器皿中，将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点（终点）吹出残余的液体。最后松开按钮。,移液器的操作方法-5,5.弃枪头 按下加样枪上的枪头推出杆，将枪头打入指定位置。,Press ejector button to discard tip.,移液器的完整操作步骤,1.量程的调节：千万不要将按钮旋出量程（！），否则会卡住内部机械装置而损坏了移液枪。2.枪头（吸头）的装配 将加样枪垂直插入枪头（pipette tips）中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。不要使劲地在枪头盒子上敲，这样会导致移液枪的内部配件（如弹簧）因敲击产生的瞬时撞击力而变得松散，甚至会导致刻度调节旋钮卡住。3.吸液 吸取液体前，先用大拇指将按钮按下至第一停点，移液器保持竖直状态，将枪头插入液面下23毫米。然后慢慢松开按钮回原点，取出加样枪。4放出溶液 将加样枪加入盛接溶液的器皿中，将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点（终点）吹出残余的液体。最后松开按钮。5.弃枪头 按下加样枪上的枪头推出杆，将枪头打入指定位置。,注意事项,移液器的正确放置 当移液器枪头里有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞弹簧。维护保养时的注意事项（1）如不使用，要把移液枪的量程调至最大值的刻度，使弹簧处于松弛状态以保护弹簧；（2）最好定期清洗移液枪，可以用肥皂水或60 的异丙醇，再用蒸馏水清洗，自然晾干。（3）校准是可以在20-25度环境中，通过重复几次秤量蒸馏水的方法来进行。,容量瓶上标有温度和容积，表示在所指温度下，液体的凹液面与容量瓶颈部的刻度线相切时，溶液体积恰好与瓶上标注的体积相等。常用的容量瓶有100mL、250 mL、1 000 mL等多种。,容量瓶瓶塞须用结实的细绳系在瓶颈上，以防止损坏或丢失。,容量瓶瓶口内壁与瓶塞的质地都是磨口的。使用时，塞子塞入瓶口后，轻轻一旋，即能起到很好的密封效果,容量瓶使用前,应先检查：瓶塞是否漏水；标线位置距离瓶口是否太近。如果漏水或标线距离瓶口太近，则不宜使用。,检查的方法是：加自来水至标线附近，盖好瓶塞后，一手用食指按住塞子，其余手指拿住瓶颈标线以上部分，另一手用指尖托住瓶底边缘（图1），倒立两分钟。如不漏水，将瓶直立，将瓶塞旋转180后，再倒过来试一次。在使用中，不可将扁头的玻璃磨口塞放在桌面上，以免沾污和搞错。操作时，可用一手的食指及中指（或中指及无名指）夹住瓶塞的扁头（图2），当操作结束时，随手将瓶盖盖上。也可用橡皮圈或细绳将瓶塞系在瓶颈上，细绳应稍短于瓶颈。操作时，瓶塞系在瓶颈上，尽量不要碰到瓶颈，操作结束后立即将瓶塞盖好。,图 1,图 2,容量瓶的使用,1、配置溶液,（1）称量,A.如果是固体试剂，应先在台秤上称出所需质量的试剂。并转移至烧杯中，加少量蒸馏水溶解,B.如果是液体试剂，应用量筒量出所需体积的液体先移入烧杯中，加入适量蒸馏水稀释,（2）.溶解,注意，搅拌时玻璃棒不要与烧杯碰撞,用玻璃棒缓缓搅拌，加速溶解,2.转移,用玻璃棒引流 A.引流时玻璃棒伸入容量瓶内的一端紧靠容量瓶内壁 B.烧杯口紧靠玻璃棒倾倒。注意离容量瓶口不能太远,3.洗涤,用蒸馏水冲洗烧杯内壁及玻璃棒2-3遍，,并将洗液也转移至容量瓶中,4.定容,继续向容量瓶中加蒸馏水，,到刻度线以下1 cm2 cm处，改用滴管滴加水到刻度（小心操作，切勿超过刻度）。,5.摇匀,（1）塞好瓶塞，用食指摁住瓶塞，用另一只手托住瓶底,（2）把容量瓶反复倒转（约10次），使溶液混合均匀,容量瓶的洗涤,（1）先用自来水洗几次，倒出水后，内壁如不挂水珠，即可用蒸馏水洗好备用。否则就必须用洗液洗涤。（2）先尽量倒去瓶内残留的水，再倒入适量洗液，倾斜转动容量瓶，使洗液布满内壁，同时将洗液慢慢倒回原瓶。然后用自来水充分洗涤容量瓶及瓶塞，每次洗涤应充分振荡，并尽量使残留的水流尽。最后用蒸馏水洗三次。应根据容量瓶的大小决定用水量，如250mL容量瓶，第一次约用30mL，第二、第三次约用20mL蒸馏水。,滴定管,滴定管用于精确量取一定体积的溶液，由内径均匀的并带有刻度的细长玻璃管，下部有用于控制流量的玻璃活塞(或由橡皮管玻璃球组成的阀)组成。,一、酸式滴定管,在上部有如下的标注信息：,温度,容积,0刻度,一、酸式滴定管,在下部有如下的结构：,活塞,玻璃尖嘴,一、酸式滴定管,主要规格有：,25ml、50ml,无色与棕色两种,读数误差：0.01ml,二、滴定管的正确使用,1、检查是否漏液,正常,漏液,二、滴定管的正确使用,2、洗涤,先用适量的蒸馏水洗涤2-3次洗液从下部放出。（见右图所示）,再用3-5毫升标准溶液润洗2-3次。（见下图所示）,二、滴定管的正确使用,3、加标准溶液到0刻度以上2-3ml处。,4、排净尖嘴内的气泡。,5、调整液面高度到0刻度或0刻度以下。,二、滴定管的正确使用,6、滴液,准确量取一定体积溶液时,滴液先快后慢，接近所取体积时逐点滴入，见右图。,三、误差分析,仰视时读数偏高,俯视时读数偏低,平视是正确的读数位置,四、使用注意事项,酸式滴定管可装强氧化剂（高锰酸钾、双氧水等）和酸性溶液（硫酸、盐酸等），不能装碱性溶液，原因：,SiO2+2OH-=SiO32-+H2O从而粘接活塞,五、碱式滴定管,刻度与酸式滴定管一样，但不能装强氧化剂（高锰酸钾、双氧水等）和酸性溶液（硫酸、盐酸等），这些溶液可腐蚀橡胶管。,五、碱式滴定管,排除气泡的方法,可调式微量移液器,一、移液器的类型,常见类型：手动单道、手动多道、电动单道、电动多道,单道移液器规格型号,量程：单道（0.1-1，0.5-10，2-20，5-50，10-100，20-200，25-250，100-1000，500-5000uL）消毒（蒸汽）:整支消毒、半支消毒、普通。,多道移液器规格列表,八道手动：（0.5-10，2-20，2.5-25，5-50，10-100，20-200，30-300uL）八道电子：（0.5-10，1-20，5-100，10-200，15-300uL）十二道手动：（0.5-10，2-20，2.5-25，5-50，10-100，20-200，30-300uL）十二道电子：(0.5-10，1-20，5-100，10-200，15-300uL),二、移液器的品牌,Gilson(吉尔森):法国吉尔森所开发的产品具有耐用性、灵活性和易用性的特点。吉尔森移液器生产已经具有25年以上的历史，其移液器和吸嘴已被世界公认为精确度，准确度及可信度的标准,Eppendorf(艾本德):德国艾本德公司于1945年成立，总部设在德国汉堡，在全球范围内拥有员工超过1800名，在一些战略重点国家设有子公司，而在其它市场均通过与当地分销商合作的方式。2003年1月德国艾本德股份公司上海代表处成立，2004年北京代表处即将成立,Thermo（赛默飞）：赛默飞世尔科技是全球科学服务领域的领导者，致力于帮助客户使世界更健康，更清洁，更安全。我们努力为客户提供最为便捷的采购方案，为科研的飞速发展不断地改进工艺技术，提升客户价值，帮助股东提高收益，为员工创造良好的发展空间,BioHit(芬兰百得)：芬兰百得公司是一家致力于研发并专业生产移液器的公司。成立于1988年,并于99年在芬兰首都赫尔辛基上市。芬兰百得（BIOHIT）公司的Biohit品牌移液器拥有将近20年的移液器研发及生产历史，同时也是全球首支电动移液器的生产者,大龙（dragon）：大龙医疗设备有限公司，创立于1992年,生产基地坐落在中国最大的商业城市-上海，拥有多家分公司和数百家代理公司，集科研、生产、贸易于一体。大龙医疗设备有限公司生产的Dragonmed移液器是目前国际市场热销的型号，采用了芬兰移液器的专业技术，产品规格齐全,三、移液器的使用,1.容量设定,通常的量程一般在10%100%量程范围内可操作-在10%量程操作需要较高的操作技巧最佳的量程选择35%100%量程范围进行操作-对操作技巧依赖更少-保证移液的准确性和精度,最佳的量程,选择合适的量程，可提高1%移液准确性！,1.容量设定,设定的原则由大到小-当由小量程到大量程时，朝所需量程方向连贯旋转，旋转到达超过所需量程1/3圈处，回调到所需量程处注意事项在量程设定过程中,不要将旋钮旋出最大量程,否则可能会卡住内部机械装置而损坏了移液器,量程的设定,正确的量程设定可以提高0.5%的移液准确性！,2.安装吸头,安装的方法将移液器端垂直插入吸头，左右转动，上紧即可注意事项用力不可过猛，否则会导致内部零部件松散，甚至会导致调节刻度的旋钮卡死或造成移液器套柄弯曲,3.预洗吸头,用同一样品对吸头进行润洗先吸取样品，然后排回样品容器或废液槽有助于提高吸头多次相同移液操作的一致性,润洗吸头可提高0.5%的移液准确性!,在吸取有机溶剂或高挥发液体时，挥发性气体会在套筒室内形成负压，从而产生漏液。预洗46次，让套筒室内的气体达到饱和，负压就会自动消失,当样品温度很高或者很低时，不要润洗吸头！,4.吸液,正向吸液（一档 二档）,反向吸液（二档 一档）,用于粘稠液体、易挥发液体,以正确角度进行吸液操作可提高0.5%的移液准确性(微量程移液器可达2.5%),垂直吸液,以正确吸头浸入深度进行吸液操作可提高1%的移液准确性(微量程移液器可达5%),注意事项慢吸慢放，控制好吸液速度-速度太快会产生反冲和气泡，影响准确性-样品液进入套筒，对活塞和密封圈造成损伤-带入气雾，造成样品交叉污染,将移液器提离液面，停约一秒。观察是否有液滴缓慢的流出。若有流出，说明有漏气现象-可能吸头未上紧；移液器内部气密性不好,不正确的吸液速度会导致至少5%的准确性下降！,5.排液,将吸嘴口贴到容器内壁并保持1040倾斜平稳地把按钮压到一档，略停后，二档排出剩余液体；排放致密或粘稠液体时，停留时间稍长一些压住按钮，同时提起移液器，使吸嘴贴容器壁擦过松开按钮按弹射器除去移液嘴（如吸取不同液体，必须更换吸头，防止交叉污染）,常规的排液方法,6.卸去吸头,稍用力下按吸液头推出器即可卸掉吸液头-如吸液头安装过紧，则可用手卸除将吸液头丢弃到合适的废物收集器中,摆放整齐,四、移液器的校准,(205);蒸馏水水温与室温温差2将移液器调至拟定校准体积,选择合适的吸头万分之一天平上放置一个小三角烧杯来回吸吹蒸馏水3次,使吸头湿润,纱布拭干移液器垂直,吸头浸入液面2mm3mm处,缓慢地吸取蒸馏水将吸头离开液面,去掉外部的液体以30放入称量杯中,缓慢地将移液器压到第1档,等待1s3s,再压到第2档,使吸头里的液体完全排出记录称量值擦干吸头表面，按上述操作称量10次,以均值作为最后移液器的蒸馏水质量,根据当时条件下蒸馏水的密度计算体积,然后按校准结果调节移液器10次标定称量均在要求的质量范围内为合格,贴上合格标签,注明标定日期,不合格移液器要请生产厂家进行校准，填写校准记录,五、移液器的维护,设定的移液量不得超过其标称的容量范围,以免损坏移液器移液器吸液后严禁倒置、平放,以免溶液流入内腔,损坏活塞移液器使用前,观察排放杆是否有弯曲;按动排放按钮,感觉是否顺畅移液器不用时,应在专用支架上竖直放置,五、移液器的维护,移液器长时间不用时，将刻度调至最大量程，让弹簧恢复原形，延长移液器的使用寿命保持移液器外表面的清洁。当液体接触移液器时,可用75%酒精进行擦拭最好定期清洗移液枪，可以用肥皂水或60的异丙醇清洗，再用蒸馏水清洗，自然晾干,