基因组学与其他组学的关系课件.ppt
A,1,基因组学与其他组学的关系,医学院 董天祺 2016.10.12,A,2,基因组学（genomics）,基因组学主要是研究生物基因组和如何利用基因的一门综合学问,是涉及基因作图、测序和整个基因组功能分析的遗传学分支。,组学（-Omics）,近二十多年以来，基于高通量分析的系统生物学（system biology）研究飞速发展，从最初的基因组学（genomics）已经发展到到当前的多组学时代，围绕核酸、蛋白、代谢物（如糖、脂）、矿物元素（离子）、表型等，迄今已形成了基因组学、转录组学（transcriptomics）、蛋白质组学（proteomics）、代谢组学（metabonomics）、离子组学（ionomics）、生理组学以及表型组学，它们已成为系统生物学研究的重要方向。,A,3,genome,proteome,transcriptome,测序技术（sequencing）,基因芯片（DNA microarray）,二维凝胶电泳（2-DE）和质谱（MS）,A,4,The flow of the“omics”sciences:genomics,proteomics,and metabolomics,A,5,转录组学（transcriptomics）,转录组学是对细胞（生物体）在某种条件下所有转录产物（即转录组，transcriptome）进行系统研究，即在 RNA 水平研究基因表达的变化。转录组学的研究需要大规模的基因表达分析技术，应用于转录组学的研究技术有：差异显示（DD）、扩增片段长度多态性cDNA-AFLP）、抑制消减杂交（SSH）、基因表达序列分析（SAGE）、基因芯片（DNA microarray），RNA 测序（RNA-seq）等技术。其中RNA-seq优点突出，能对转录本进行大规模测序及表达水平的精确定量分析,A,6,应用于转录组分析的三种技术的比较,A,7,第一代测序法：sanger测序法,英国人Frederick Sanger 创建了双脱氧链末端合成终止法（chain termination method），简称Sanger法。他发现如果在DNA复制过程中掺入ddNTP，就会产生一系列末端终止的DNA链，并能通过电泳按长度分辨。不同末端终止DNA链的长度是由掺入到新合成链上随机位置的ddNTP决定的。,A,8,A,9,A,10,RNA-seq（RNA转录组测序）,RNA测序又称转录组测序，就是把mRNA，smallRNA和 non-coding RNA（ncRNA）全部或者其中一些用高通量测序技术进行测序分析的技术。,首先，我们获得细胞总RNA，然后对RNA进行片段化，然后反转录形成cDNA，获得cDNA文库，然后在cDNA片段的两端接上接头，最后用新一代高通量测序依进行测序。,A,11,第二代测序技术（高通量测序技术）,高通量测序技术是对传统测序一次革命性的改变，一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，因此在有些文献中称其为下一代测序技术(next generation sequencing)。自2005年以来,以 Roche公司的454技术、Illumina公司的Solexa技术和ABI公司的SOLiD技术为标志的新一代测序技术相继诞生。之后Helicos Biosciences公司又推出单分子测序(Single molecule sequencing,SMS)技术。,A,12,Principle of Pyrosequencing,基于酶级联反应的分析技术,A,13,每次向反应体系中加入一种dNTP，相应位置的峰代表该种dNTP的掺入情况，峰高与掺入的核苷酸数量成正比，多余的dNTP和ATP在加入下一种dNTP前就被降解。,A,14,蛋白质组学（proteomics）,蛋白质组学是研究细胞或生物体内的所有蛋白质（即蛋白质组，proteome）的存在及其活动方式的学科，是在蛋白质水平上的后基因组学研究。基因组计划的局限：无法解决“基因精细调控”问题大规模基因表达检测技术如：微阵列法、DNA 芯片无法反 映蛋白质的质与量。基因是遗传信息的源头，功能性蛋白是基因功能的执行体，以往人类对于蛋白质的研究只是针对生命活动中某一种或某几种蛋白质，难以形成一种整体观，难以系统透彻地阐释生命活 动的基本机制。所以大规模、全方位白质研究势在 必行,A,15,蛋白质组学的研究方法,A,16,二维凝胶电泳（2-DE）和质谱（MS）技术是蛋白质组研究的核心技术，分别针对样品的分离和鉴定双向凝胶电泳（two-dimensional electrophoresis，2-DE)利用蛋白质等电点和分子量差异，结合凝胶化学特性，分离各种蛋白质的方法。工作原理：根据蛋白质等电点的不同进行第一向等电聚焦电泳分离转移到二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶上，再根据相对分子量大小不同进行分离,A,17,第一向电泳：等电聚焦电泳（isoelectrophoresis focusing,IEF）聚丙烯酰胺凝胶内的缓冲液在电场作用下沿电场方向在凝胶内制造一个pH梯度。每种蛋白质都将迁移至与它的pI 相一致的pH处。,A,18,第二向电泳：聚丙烯酰胺凝胶电泳电泳（SDS-PAGE）根据蛋白质分子质量将样品分离 双向电泳后的凝胶经染色后蛋白呈现二维分布图：水平方向反映出蛋白在pI上的差异，垂直方向反映出它们在分子量上的差别。,A,19,质谱（MS）法：基本原理：样品分子离子化后，根据离子间质荷比（m/z）的差异来分离并确定样品的分子量。灵敏度高、快速、能同时提供样品的精确分子量和结构信息、既可定性又可定量、并能有效地与各种色谱联用来分析复杂体系。,A,20,代谢组学（metabonomics）,代谢组学：“是通过考察生物体系（细胞、组织或生物体）受到刺激或扰动后（如将某个特定的基因变异或者环境变化后），其代谢产物的变化或其随时间的变化，来研究生物体系的一门科学”许国旺 2008Analytical plat-forms：(1)Nuclear magnetic resonance(NMR);核磁共振仪(2)Gas ChromatographyMass Spectrometry(GC-MS);气相色谱-质谱联用仪(3)Liquid Chromatography-Mass Spectrometry(LC-MS);etc.液相色谱-质谱联用仪,A,21,代谢组指一个细胞、组织或器官中所有代谢组分的集合，尤其指分子质量为1,000以下的小分子物质。,A,22,质谱(MS)或与色谱联用技术具有普适性、高灵敏度和特异性等特点，已经在代谢组学研究中成为首选技术。核磁共振技术（NMR），能够对样品实现非破坏性、非选择性分析。它是唯一既能定性,又能在微摩尔范围定量有机化合物的技术。缺陷是灵敏度相对较低,不适合分析低浓度代谢物。代谢组学在肿瘤研究中的应用 近来的研究表明,不同肿瘤制备样品(比如培养细胞、组织切片、体内肿瘤块等)的代谢图谱与肿瘤类型、增殖、代谢活性以及细胞死亡有较强的相关性。对肿瘤代谢表型图谱的研究有助于人们了解肿瘤发生、发展以及致死的机制;在临床条件下,这些代谢图谱可以作为肿瘤诊断、预后以及治疗的评判标准。,A,23,谢谢观看，请各位指正！,
