生化干扰试验 ppt课件.ppt

实验十 VC对酶法测定（CHOD-PAP法）胆固醇 的干扰,临床生化教研室：雷 燕 邹家琼,干扰试验,是测定实验方法特异性误差和干扰引起的误差首先确定被试物质是否引起误差，再探讨误差的来源是方法特异性差还是干扰是衡量方法准确度的方法学评价试验之一，在加入一定浓度干扰物的条件下,形成恒定误差,干扰物浓度不同,误差大小不同.,目的要求,掌握：干扰试验的原理和用途熟悉：1.干扰试验的设计与具体操作 2.干扰值和干扰率的计算了解：注意事项和消除干扰的常用方法,检测原理,干扰试验对干扰物不作分析，只测定它对方法的 干扰作用，以评价分析方法的准确性。干扰物产生的误差属恒定系统误差，它的大小随 干扰物的浓度而异。常见干扰物有：血红蛋白、甘油三酯、胆红素、肌酐、防腐剂、抗凝剂、药物如 VC等。,本实验选用VC做酶法测定（CHOD-PAP法）的干扰试验，因VC可与CHOD催化生成的H2O2发生反应，使第二步POD的偶联反应显色强度减弱，产生负的测定误差。,检测原理,胆固醇酯+H2O CEH胆固醇+脂肪酸 胆固醇+O2 COD 4胆甾烯酮+H2O2 2 H2O2+4-AAP+酚 POD 醌亚胺+4H2O,特异性,胆红素、维生素C、尿酸、Hb负干扰,实验准备,标本：肝素抗凝血浆,校准品：胆固醇标准液 5.17 mmol/L 干扰物：VC溶液 1.浓度50.0mg/dl 2.浓度100.0mg/dl 3.浓度200.0mg/dl,仪器：半自动生化分析仪(型号),【器材】半自动生化分析仪、试管、吸管、加样器,【试剂】1.试剂组成R1：酚 12mmolL 胆酸钠 1.20mmolL 抗坏血酸氧化酶 1.0KUL POD 12.0KULR2：CEH 1.0KUL COD 0.5KUL 4-AAP 1.20mmolL,样品制备,基础样品：血浆450ul+H2O50ul干扰样品1：血浆450ul+浓度1VC50ul干扰样品2：血浆450ul+浓度2VC50ul干扰样品3：血浆450ul+浓度3VC50ul,实验操作,取6支试管分别标明空白管、标准管、基础 样品、干扰样品1、干扰样品2、干扰样品3 分别吸取相应的样本各10ul向各管加工作液1.0ml，混匀置37恒温10min505nm波长测定各管的吸光度,计算,干扰试验的数据处理,结果判断,当干扰物引起的偏差1/4 总允许误差（TEA）时，则不会影响测定结果的临床应用价值，可近似地认为当干扰物浓度低于该浓度时不影响测定结果。注明:TC的TEA：10（参照美国CLI88标准）,注意事项,加入量要准确。加入物体积应只占很小的比例（小于1/10）。可疑干扰物浓度，加入的干扰物的浓度明显干扰常见浓度上限，尤其是达到病理标本最高值。分析物溶液可使用标准液，最好采用病人标本。增加测定次数，减少随机误差。,消除干扰的常用方法,设立试剂空白和标本空白用物理或化学方法，除去干扰物双波长或多波长检测排除干扰误差较大又无法消除，则需对方法进行改进或更换,思考题,1.什么是干扰试验？怎样理解干扰试验是测定恒定系统误差？2.为什么不能计算不同浓度下的平均干扰率？,谢谢,