DNA琼脂糖凝胶电泳ppt课件.ppt

DNA琼脂糖凝胶电泳,姓名：徐秀倩 学号：3160481 导师：吴小芹,实验原理,琼脂糖为链状多糖 绳状琼脂糖束大网孔型 凝胶 分离、鉴定、纯化DNA影响DNA迁移率的因素：DNA分子的大小、构 象，凝胶浓度，电压，电泳缓冲液的组成缓冲液pHDNA Pi，DNA带负电荷，迁移率与 分子量对数成反比DNA分子构象影响迁移率：共价闭环DNA线 状DNA开环DNA,不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围,琼脂糖浓度（%）分离范围（kb）0.3 5-60 0.6 1-20 0.7 0.8-10 0.9 0.5-7 1.2 0.4-6 1.5 0.2-4 2.0 0.1-3,琼脂糖凝胶中DNA的观察,溴化乙锭（EB）DNA：紫外光下 红色荧光,主要实验器材,电泳槽结构,操作步骤,琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB凝胶板的制备：加梳子，倒胶样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝加样：加样端为负极（黑）电泳：5V/cm观察：紫外灯下观察，照相,溶 胶,准备胶槽,凝胶冷却至50C，加EB至终浓度0.5g/ml,铺 胶,凝胶凝固后取出梳子,加缓冲液,准备样品,点 样,电 泳,注意观察溴酚蓝染液的迁移,紫外灯下观察电泳结果,照 相,相关实验,对琼脂糖凝胶电泳分离DNA 片段的有效性的再认识,琼脂糖凝胶电泳分离DNA 片段的基本原理,DNA 为多元酸，在中性或弱碱性缓冲液中带负电荷而向阳极泳动 由于不同DNA 分子在同一凝胶中迁移速率不一样，电泳一段时间后可将其分开。,材料,铜绿假单胞菌噬菌体PaP1 基因组DNA，按常规提取，置-20 保存备用。Agarose、限制性内切酶EcoR为上海生工生物工程有限公司产品。从凝胶中小量回收DNA 片段的试剂盒为上海华舜生物工程有限公司产品，1 kb DNA Ladder为MBI 产品。,方法,琼脂糖凝胶电泳 用1TAE 配制0.8%琼脂糖凝胶，电泳缓冲液为1 TAE，电压为5 V/cm，电泳1 h，用溴化乙锭或LIGHTBLUE Dye 显色。,结果,电泳后在日光下(LIGHTBLUE Dye 染色)或在紫外灯下(溴化乙锭染色)切取含“单一”目的DNA 分子的胶条并称重，用小量胶回收试剂盒回DNA。,在3 个大的目的DNA 片段1、2 和3(分别约为10、7、4.5 kb)之后有很多的较小片段(从大约3.5 kb 到100 bp不等)。在日光下(用LIGHTBLUE Dye 显色)分别切取含有单一目的片段1、2、3 的胶条用试剂盒回收DNA 分子，为了获得足够量的目的DNA 而同时上样4 条泳道。,谢谢观看,