免疫标记应用与评价课件.ppt

免疫标记的应用与评价,上海交通大学瑞金临床医学院,免疫标记的应用与评价上海交通大学,免疫标记的应用,干细胞的确定定量分析.移植治疗的日益普及.移植门槛的降低.干细胞采集的确定.有效干细胞的确定要求(、等),免疫标记的应用干细胞的确定,的分析： 未动员前外周血中细胞，细胞，细胞。 各家单抗不同、操作不一，结果难以比较。 内毒素、单纯化疗（骨髓抑制）、细胞因子、化疗联合细胞因子 等的动员。,的分析：,淋巴细胞和细胞确定和定量分析淋巴细胞分化增殖异常的信号淋巴细胞与髓系细胞的鉴别混合性白血病和未确定性(型)白血病的诊断造血干细胞病变的信号疾病的预后判断,淋巴细胞和细胞确定和定量分析,细胞标记 细胞及其亚群 祖细胞（）的表型为、未成熟细胞标志、和。在细胞发育过程中，是最早出现的细胞标志，且贯穿表达在整个细胞分化发育过程中。胸腺细胞要分化发育为有功能的成熟细胞，细胞表面标志需经历一定的变化过程。,细胞标,从、（即、双阴性）、（即、双阳性），最后发育成、和、单阳性的两群成熟胸腺细胞，然后进入外周淋巴器官和血液，执行免疫功能。,从、（即、双阴性）、（即、双,但在正常外周血中通常存在、（），、（）， 和 四种表型不同的细胞，它们分别占细胞总数的，。前三种表型细胞的主要为，而 细胞主要表达，他们都执行细胞免疫功能。,但在正常外周血中通常存在、（），、（）， 和 四种表,是绵羊红细胞受体和淋巴细胞功能相关抗原（），表达于人细胞、胸腺细胞和大颗粒淋巴细胞（）的表面。是细胞表面抗原，表达于成熟胸腺细胞、静息和激活的的外周血细胞，是鉴定细胞的重要标志，其胞浆和膜是早期和普通型细胞白血病的主要分型标记。,是绵羊红细胞受体和淋巴细胞功能相关抗原（），表达于人,、是细胞白血病较特异的标记，也是髓系白血病时最常见的伴随标记。、则是白细胞的共同标记抗体，在淋巴瘤的诊断中有一定的价值。而和主要分布于活化淋巴细胞表面，为活化淋巴细胞标志。胸腺细胞、静止细胞、静止细胞以及细胞表面无表达。主要用于淋巴细胞疾病的免疫分型。外周血淋巴细胞、占,、是细胞白血病较特异的标记，也是髓系白血病时最常见,末端脱氧核苷酸转移酶（）和类人类白细胞抗原（）的阳性表达对早期细胞白血病的诊断有重要价值。、的基因重排检测有利于恶性细胞疾病细胞异常克隆存在的确定。 另外，和以上的细胞表达和。用可定义细胞。,末端脱氧核苷酸转移酶（）和类人类白细胞抗原（）,细胞标记,细胞 细胞的分化主要分为祖细胞、前细胞、未成熟细胞、成熟细胞、活化细胞和浆细胞个阶段。 （）祖细胞（）：此期最早识别的细胞特异性抗原是，同时表达、细胞核、。 （）前细胞（）：和消失，出现、，（胞浆重链）。,细胞标记 细胞 细胞的分化主要分为祖细胞、前细胞、未,（）未成熟（早期）细胞（ ）：、消失，出现 、。、表达增加。其他新的抗原、相继出现。 （）成熟细胞（ ）：和同时表达，并出现、和丝裂原受体，上述细胞抗原继续存在。,（）未成熟（早期）细胞（ ）：、消失，出现 、。、,（）活化细胞（ ）：成熟细胞被抗原或丝裂原刺激后，成为活化细胞，继之增生和分化。在此过程伴随表达细胞激活抗原、和其他激活相关抗原如、等。膜结合型逐渐减少，分泌型逐渐增加，并可发现基因重链类型转换。 （）浆细胞（ ）：激活细胞进一步分化成为产生抗体的浆细胞，这时获得、和浆细胞特异抗原，表达增加，抗原再出现。而和上述抗原消失。仍可存在于胞质中。,（）活化细胞（ ）：成熟细胞被抗原或丝裂原刺激后，成,细胞上的抗原分为：细胞限制性（特异性）抗原： 、 、 和， 它们的表达只限于细胞上，在鉴别细胞系上是十分重要的标志。细胞相关性抗原： 、和。而细胞表面的受体，是细胞特异性识别抗原的受体，也是细胞重要的特征标志。,细胞上的抗原分为：细胞限制性（特异性）抗原： 、 、,、和都是细胞白血病和淋巴瘤最常用的标记抗体。对中国人而言，是特异性和敏感性最高的。是一种早期的、谱系特异的泛细胞表面抗原，从最早期细胞前体细胞阶段即表达，持续存在直至细胞终末阶段，分化为浆细胞时丢失。存在于外周血、脾脏、淋巴结或扁桃体中的细胞和近的骨髓细胞。在造血系统只表达于正常和恶性细胞。外周血细胞、单核细胞、粒细胞和血小板表面不表达。对细胞白血病细胞表达的敏感性接近，且有较高的特异性。和与和有相同的特异性，但敏感性不够，的表达往往伴随性的阳性而出现。,、和都是细胞白血病和淋巴瘤最常用的标记抗,、都是早期细胞的标记，其中的表达可出现在的系统的原始细胞上。一般来说，这类白血病患者有超过一半，甚至三分之二以上，在免疫表型中出现淋巴细胞分化的明显不协调，如，阳性与表达同时出现在白血病细胞上。而免疫球蛋白重链（）的基因重排更是细胞异常克隆性增生的标记。异常增生克隆性细胞也有呈现的基因重排。,、都是早期细胞的标记，其中的表达可出现在的系统的,髓系细胞标记,这类抗体包括、和等。这些免疫标记种类繁杂，缺乏特异性和敏感性（与淋巴细胞标记抗体相比）。很多情形下，上述标记也出现在正常的髓细胞表达上。,髓系细胞标记 这类抗体包括、和,.髓系标记 从髓系祖细胞终末分化的成熟细胞（粒细胞、单核细胞、血小板和红细胞）间各阶段细胞特征性标志还不十分清楚。根据粒细胞和单核细胞上的髓系抗原表达试将其大致分为七种类型 :（）粒细胞和单核细胞上都有较强表达的抗原有：、。其中在原粒细胞质中表达比膜上早，在诊断上十分重要。（）以粒细胞为主，但也存在于单核细胞的抗原有：和。是特异性髓系抗原，强表达在成熟粒细胞，弱表达在单核细胞上。 （）基本表达在粒细胞上的抗原有：和。,.髓系标记 从髓系祖细胞终末分化的成熟细胞（粒细胞、单核,（）以单核细胞为主，但也表达在粒细胞的抗原有：和。主要强表达在单核巨噬细胞，弱表达在粒细胞上。抗原分布只限于造血系统内，表达在髓系祖细胞、以及相应的白血病细胞上。约原粒细胞表达抗原，而终末分化的粒细胞抗原弱表达。先于表达，故在诊断上加十分有用。 （）基本只表达在单核细胞上的抗原有：、和。是目前发现可靠的检测造血系统内单核巨噬细胞系统的特异标志，用单抗可将与及区别开来。,（）以单核细胞为主，但也表达在粒细胞的抗原有：和。主要强表达,（）造血干、祖细胞抗原有：和。和虽列在髓系抗原中，但都属于造血干、祖细胞抗原 。除表达在早期造血干、祖细胞外，还表达在约的和的上，这些的白血病细胞可能来自具有多系性分化能力的分化不良的前身细胞。 （）其他髓系相关抗原：这些抗原主要存在于其他系细胞上，但在某些髓系细胞上也有表达，如：、等。,（）造血干、祖细胞抗原有：和。和虽列在髓系抗原中，但都属于造,巨核细胞系 在巨核细胞系发育过程中依次出现、（）、（）和（）、（）。还可表达（强）。血小板具有丰富的胞内颗粒，正常情况下血小板处于静止状态。目前研制出的抗血小板单抗如、 、，主要都针对静止的血小板。当血小板被激活时，血小板中颗粒内容物释放，整合到活化的血小板质膜内，成为一些激活抗原，如 （选择素）、及和。 红细胞系 血小板 （强）、血型糖蛋白、。,巨核细胞系 在巨核细胞系发育过程中依次出现、（）、（,.干祖细胞系 抗原选择性地表达在不成熟的造血干细胞、祖细胞上，是一个阶段特异而非系特异的抗原。多能造血干细胞（）和定向造血干细胞（，、）、祖细胞（）、祖细胞（）都在群内。抗原在早期造血祖细胞内呈高水平表达，随着细胞成熟其表达呈进化性下降，继而消失。目前已作为能识别人类最早造血干、祖细胞的重要标志。现知更早期的干细胞为。,.干祖细胞系 抗原选择性地表达在不成熟的造血干细胞、祖,、细胞在形态上缺乏分化特点，是更幼稚、能维持长期造血的启动细胞（）。细胞以、为主，多处于和期。、细胞则大多处于造血祖细胞阶段，可形成各系造血集落，但不能维持长期造血。故抗原是造血干细胞向多系定向分化的标志之一，并随一定的分化过程表达上调。鉴于抗原可以识别出造血干、祖细胞，结合其它相关分化抗原的表达可以作为造血细胞不同发育阶段的标志。如、细胞群为多能干细胞向髓系定向的标志。、多为多能干细胞向系定向的祖细胞。而、则被认为是向系定向的祖细胞。,、细胞在形态上缺乏分化特点，是更幼稚、能维持长期造血的启动细,最近发现（）是比更早的干、祖细胞标志，故现人们多把、，细胞视为造血干细胞的重要标志。,最近发现（）是比更早的干、祖细胞标志，故现人们多把、，细胞视,则在分化较好的中表达；血型糖蛋白表达在除红系祖细胞外的红系细胞上，占 患者的左右，可弥补血型糖蛋白的不足，在爆式红系细胞集落形成单位（）和红系细胞集落形成单位（）阶段的祖细胞亦可表达阳性；、和是常用的原始巨核细胞标记，但往往随、的阳性而表达。另外，作为神经细胞粘附分子（）通常在细胞和细胞上表达。在的中，表达阳性；在分化的单核细胞和（）、等核型改变时，也呈阳性表达。,则在分化较好的中表达；血型糖蛋白表达在除红系祖细,、和溶菌酶抗体在髓系细胞上也应用极广。其中，除原始单核细胞白血病、巨核细胞白血病和红系白血病外，其他髓系白血病细胞都有可能阳性；除早幼粒细胞白血病外，其他髓系白血病均可呈阳性；仅表达在极微分化的早期髓系细胞上；溶菌酶可部分弥补、对原始单核细胞的不敏感。,、和溶菌酶抗体在髓系细胞上也应用极广。其中，除原,特殊检验的应用,慢淋问题(活化的淋巴细胞标记)恶组问题(附带的细胞标记)慢性白血病的标记要慎重,特殊检验的应用慢淋问题(活化的淋巴细胞标记),() () ,() (),:,:,:,:,:,:,免疫标记应用与评价课件,:,( ) , ,:,:,:,: , , , : , , , : , , , : , , , : ,: , , ,()(); ()() ()(); ( ()(); (),()();,()();,() ( ),()(); (),()();, ,()();,()();,()();,()();,()();,()();,()();,()();,.,()();,()() ()();,( ),()() ()();,()() ()();,()() ()();,()() ()();,()() ()();,()() ()();,()() ()();,()();,()();,()(): ()() ; ()() ; ()(),() :,免疫标记应用与评价课件,( ) ( ),免疫标记的评价,必须进行的工作检测中的对照问题(与细胞化学有类似)协同(共同)表达问题筛选与快速检测问题抗体选择问题重复性和精确性检测问题,免疫标记的评价必须进行的工作,