免疫实验技术培训课件.ppt
免疫实验技术,免疫实验技术,利用免疫学原理来检测抗原、多种免疫分子(抗体、补体、细胞因子和粘附分子等)及免疫细胞的实验过程。有助于疾病的辅助诊断、治疗及预后判断 。,2,免疫实验技术,利用免疫学原理来检测抗原、多种免疫分子(抗体、补体、细胞因子,一、 凝集反应 颗粒性抗原（细胞、细菌等）或吸附于免疫无关载体上的可溶性抗原与相应抗体，在适量电解质的存在下，形成肉眼可见的凝集团块。 1、直接凝集反应 （1）玻片凝集试验 ABO血型鉴定 （2）试管凝集试验 肥达试验效价（滴度）：以出现明显抗原抗体反应现象的最高稀释度作为待检抗原（或抗体）的含量。,3,免疫实验技术,一、 凝集反应 3免,凝集反应（agglutination),颗粒型抗原细菌、细胞,抗体（凝集素）,电解质（生理盐水）,3750数小时,凝集反应（凝集成团）,4,免疫实验技术,凝集反应（agglutination)颗粒型抗原抗体电解质,1. 直接凝集试验,玻片法,试管法,含有已知抗体的诊断血清,待检菌液,生理盐水,特点,简便、快速不能定量,UUUU,待检血清,盐水,简便、快速能定量,肥达氏试验（widal test),伤寒、副伤寒,已知抗原,5,免疫实验技术,1. 直接凝集试验玻片法试管法含有已知抗体待检菌液生理盐水特,6,免疫实验技术,ABO血型鉴定红细胞表面抗原 抗A抗体,免疫实验技术培训课件,8,免疫实验技术,8免疫实验技术,二、沉淀反应 可溶性抗原与相应抗体结合，当两者比例合适，并有适量电解质存在时，形成肉眼可见的沉淀物或沉淀线。,9,免疫实验技术,二、沉淀反应9免疫实,沉淀试验（precipitation test）,可溶性抗原细胞裂解液,抗体（沉淀素）,电解质（生理盐水）,3750数小时,沉淀反应（清澄液中出现混浊沉淀）,10,免疫实验技术,沉淀试验（precipitation test）可溶性抗原,沉淀反应分类（1）琼脂扩散试验 a.单向琼脂扩散试验 b.双向琼脂扩散试验（2）免疫电泳试验 对流免疫电泳：原理：在阴极孔内加抗原，阳极孔内加抗体。通电后，抗原带负电荷较多，分子较小，向阳极泳动；抗体分子带负电荷较少，加上分子量大，在琼脂的电渗作用下向阴极泳动。 （3）环状沉淀试验,11,免疫实验技术,沉淀反应分类11免疫实验技术,（1）单向扩散试验（Single redial diffusion test）,预先混有抗体,12,免疫实验技术,（1）单向扩散试验预先混有抗体12免疫实验技术,（2）双向扩散试验（Double diffusion test）,13,免疫实验技术,（2）双向扩散试验13免疫实验技术,（3）对流免疫电泳,作用及特点：抗体球蛋白移向阴极，抗原分子移向阳极，当两者在适当比例处相遇，即形成灰白色沉淀线。检查乙型肝炎抗原及甲胎蛋白，敏感度比双向扩散法高约10倍，只需12小时即可获得检验结果。不能定量测定。,Ag,Ab,_,+,14,免疫实验技术,（3）对流免疫电泳作用及特点：AgAb_+14免疫实验技术,三、 免疫标记技术 原理： 利用酶、荧光素、胶体金、发光物质以及放射性核素等标记物来标记抗原或抗体，再与标本中的抗体或抗原反应，最后测定复合物中的标记物。 优点：特异、敏感、快速，可作定性、定量或定位测定。,15,免疫实验技术,三、 免疫标记技术15免疫实验技术,依据检测物分两类： 1.免疫组化技术(immunohistochemical technique)，用于组织/细胞中抗原或抗体的定位； 2.免疫测定(immunoassay)，用于液体标本中抗原或抗体的检测。 依据标记物的不同，可分为： 酶免疫技术、荧光免疫技术、金免疫技术、化学发光免疫技术和放射免疫技术。 1、酶免疫技术 酶免疫技术是以酶标记的抗体或抗原进行抗原抗体反应。,16,免疫实验技术,依据检测物分两类：16免疫实验技术,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA) 属固相酶免疫测定 ELISA原理： 把待测标本(含有未知抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的顺序与固相抗原或抗体起反应，再洗涤固相载体，随后加入酶的底物，底物受酶催化转变为有色产物。根据颜色的深浅对待测物质定性或定量。,17,免疫实验技术,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immuno,三种试剂：固相抗原或抗体 即把抗原或抗体用合适的方法连接到固相载体表面，同时保留它们的免疫活性；酶标抗原或抗体 即把某些酶用合适的方法连接到抗原或抗体表面，同时保留它们的免疫活性以及酶的催化活性。常用的酶是辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)；酶作用的底物 常用的底物是邻苯二胺,18,免疫实验技术,三种试剂：18免疫实验技术,ELISA的类型： (1)双抗体夹心法 测抗原 1）已知抗体包被 2）洗板 3）加待检抗原标本 4）洗板 5）加酶标记抗体 6）洗板 7）加底物显色，测定,19,免疫实验技术,ELISA的类型：19免疫实验技术,（2）间接法 测抗体 1）己知抗原包被 2）洗板 3）加待检病人血清 4）洗板 5）加酶标记抗人IgG 6）洗板 7）加底物显色，测定（3）竞争法 测抗原或抗体 测定抗原：在待测管中加入受检抗原和酶标抗原，使它们同固相抗体进行竞争性结合。,20,免疫实验技术,（2）间接法 测抗体20免疫实验技术,酶联免疫吸附试验（ELISA）,间接法,Ag,待检血清,酶标抗抗体,检测抗体,双抗体法,Ag,检测抗原,待检抗原,抗原竞争法,Ag,待检抗原,酶标抗原,Ag,检测抗原,21,免疫实验技术,酶联免疫吸附试验（ELISA）间接法Ag待检血清酶标抗抗体检,2、胶体金免疫技术 以胶体金为标记物的抗原抗体反应。常与膜载体技术结合，包括斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验等。斑点金免疫层析试验(dot gold immunochromatographic assay，DICA) 以硝酸纤维素膜为载体 如早早孕试验,22,免疫实验技术,2、胶体金免疫技术22免疫实验技术,23,免疫实验技术,23免疫实验技术,荧光免疫技术 化学发光免疫技术 细胞免疫功能测定 流式细胞测定技术及HLA分型技术 请同学们参看免疫实验视听教材和CAI课件,24,免疫实验技术,荧光免疫技术 化学发光免疫技术 细胞,
