分子诊断在病理诊断中的应用培训课件.ppt
分子诊断在病理诊断中的应用,分子诊断在病理诊断中的应用,肿瘤的发生根本原因是由于基因的异常改变引起。随着分子生物学的发展，特别是人类基因组计划的顺利实施、人类基因组序列的剖析、相关基因功能的识别，对肿瘤的发生、发展及转归机制有了更深入的了解，使人类除了能更早期发现及诊断肿瘤外，还可预测人群或个体发生肿瘤的风险（肿瘤易感性）、病因检测、肿瘤的恶性特征、对特定治疗手段的反应（疗效预测）、转移复发的可能与早期发现等，进行肿瘤诊断、分类、判断预后及指导治疗。,分子诊断在病理诊断中的应用,2,肿瘤的发生根本原因是由于基因的异常改变引起。随着,如今检测癌患者的基因状态有很多方法： IHC，FISH，CISH，Southern Blot，PCR，Real Time PCR。现如今FISH技术已应用于实体瘤、血液肿瘤、产前产后多个领域。,分子诊断在病理诊断中的应用,3,如今检测癌患者的基因状态有很多方法：分子诊断在病理诊断中的,荧光原位杂交Fluorescence in situ hybridization原理利用DNA碱基对的互补性，将直接标记了荧光的单链DNA(探针)和与其互补的目标样本的DNA(玻片上的标本)杂交,通过观察荧光信号在染色体上的位置反映相应染色体的情况,FISH,分子诊断在病理诊断中的应用,4,荧光原位杂交FISH分子诊断在病理诊断中的应用4,分子诊断在病理诊断中的应用,5,分子诊断在病理诊断中的应用5,FISH检测类型,基因过表达的检测基因突变及其检测基因的易位与重排染色体数目的检测端粒酶与肿瘤的关系检测,分子诊断在病理诊断中的应用,6,FISH检测类型基因过表达的检测分子诊断在病理诊断中的应用6,一.基因过表达检测,1.对HER2的检测,其中FISH是FDA批准的方法，被誉为“金标准”。,分子诊断在病理诊断中的应用,7,一.基因过表达检测1.对HER2的检测检测方法检测指标优点缺,ICH,赫赛汀,分子诊断在病理诊断中的应用,8,ICH赫赛汀分子诊断在病理诊断中的应用8,FISH技术对HER2基因的检测HER-2基因为致癌基因，位于17q11.2-q12可编码跨膜蛋白，基因有扩增的乳腺癌对三苯氧胺不敏感。HER-2基因扩增是决定Herceptin是否有效的关键性指标。,分子诊断在病理诊断中的应用,9,FISH技术对HER2基因的检测分子诊断在病理诊断中的应,赫赛汀(Herceptin)抗肿瘤机制,阻断异常信号转导增强抗体依赖性细胞毒作用,分子诊断在病理诊断中的应用,10,赫赛汀(Herceptin)抗肿瘤机制阻断异常信号转导分子,乳腺癌和胃癌中HER2基因的扩增比率,所做乳腺癌中HER2基因检出阳性率为65%；胃癌中HER2基因检出阳性率为35.7%。,分子诊断在病理诊断中的应用,11,乳腺癌和胃癌中HER2基因的扩增比率 所做乳腺癌中HER2,2.非小型细胞肺癌中EGFR基因扩增的检测,EGFR扩增,EGFR无扩增,分子诊断在病理诊断中的应用,12,2.非小型细胞肺癌中EGFR基因扩增的检测EGFR扩增EGF,NSCLC中EGFR基因扩增,鳞癌扩增为80%左右，腺癌与大细胞癌为60%左右基因扩增能引起EGFR酪氨酸激酶活化，激发其下游一系列信 号传导途径，促进肿瘤发生发展，基因扩增与酪氨酸激酶抑制 剂的敏感性相关基因扩增病人用药有效率达38.9%，无扩增的病人用药有效率在9.8%,分子诊断在病理诊断中的应用,13,NSCLC中EGFR基因扩增鳞癌扩增为80%左右，腺癌,EGFR功能 EGFR在多种上皮性肿瘤高表达, 其过表达与肿瘤细胞的增殖、活动性、粘连性、侵袭性、凋亡抑制和血管生成相关, 最终导致细胞的转化、增殖, 抵抗细胞凋亡、促进细胞生存, 与肿瘤的发生、发展、临床分期、生存期、预后和对治疗反应相关。,分子诊断在病理诊断中的应用,14,EGFR功能分子诊断在病理诊断中的应用14,TK,Gene transcriptionCell Cycle Progression,抗凋亡,Cancer,ATP,EGFR变异,分子诊断在病理诊断中的应用,15,TKGene transcription抗凋亡CancerA,目前应用于NSCLC的靶向治疗药物,吉非替尼(gefitinib, ZD-1839,商品名Iressa 2003 FDA approved)厄洛替尼 (erlotinib,OSI-774,商品名Tarceva 2004 FDA approved)西妥昔单抗: (cetuximab FDA 2004 approved),分子诊断在病理诊断中的应用,16,目前应用于NSCLC的靶向治疗药物吉非替尼(gefitini,分子诊断在病理诊断中的应用培训课件,EGFR基因突变,突变率在33%左右，其中腺癌高达48%（董强刚等 2006）东方亚裔明显高于高加索人种、女性高于男性、非吸烟高于吸烟EGFR19、21外显子的突变占95%左右EGFR 变异使EGFR 酪氨酸激酶ATP结合位点的某些关键基团发生重构, 使得小分子酪氨酸激酶抑制剂更易与之结合，增强了与ATP竞争性抑制剂的相互作用 全球突变型NSCLC用Iressa/Tarceva有效率约80%； 无突变NSCLC用ressa/Tarceva有效率约10%。,分子诊断在病理诊断中的应用,18,EGFR基因突变突变率在33%左右，其中腺癌高达48%（董强,Real-time检测 EGFR 19、21突变,分子诊断在病理诊断中的应用,19,Real-time检测 EGFR 19、21突变分子诊断在病,K-RAS基因突变的检测,KRAS基因属于RAS家族的一员，包括K-RAS,N-RAS,H-RAS具有GTP酶活性，活化状态与GTP结合，失活与GDP结合，绝大部分细胞是与GDP结合的非活化状态参与调节细胞生长、增殖、分化与凋亡15-20%的NSCLC存在RAS基因突变，其中90%以上是K-RAS突变，12号密码子的突变占80%以上。而腺癌的病人突变占30%，K-RAS突变与吸烟密切相关，终生未吸烟的未发现K-RAS基因突变与EGFR基因突变存在排斥性是Gefitinib与Erlotinib原发耐药的分子标记之一,分子诊断在病理诊断中的应用,20,K-RAS基因突变的检测KRAS基因属于RAS家族的一员，包,在直肠癌中K-ras基因突变的患者不会从EGFR单抗靶向治疗中获益，K-ras野生型患者对cetuximab/Erbitux（爱必妥）和panitumumab/Vectibix（维克替比）单药或与基础化疗联合治疗的反应率显著大于突变型患者。,野生型,分子诊断在病理诊断中的应用,21,在直肠癌中K-ras基因突变的患者不会从EGFR单抗靶向,现临床通常将EGFR和K-RAS基因联合检测，来针对非小细胞肺癌进行靶向治疗，对拟行TKI治疗的患者，可以首先检测KRAS突变状态，排除阳性后对KRAS阴性者进行EGFR突变检测；若EGFR突变阳性，选择TKI治疗。,分子诊断在病理诊断中的应用,22,现临床通常将EGFR和K-RAS基因联合检测，来,三.基因的易位与重排,分子诊断在病理诊断中的应用,23,三.基因的易位与重排分子诊断在病理诊断中的应用23,1.慢性淋巴细胞白血病（CLL）检测 通过对P53、RB1、D13S25、ATM基因以及12号染色体检测来判断预后。,分子诊断在病理诊断中的应用,24,1.慢性淋巴细胞白血病（CLL）检测分子诊断在病理诊断中的应,2.慢性粒细胞白血病（CML）检测BCR/ABL融合基因1.辅助诊断CML2.指导格列卫用药3.药物使用效果评估4.骨髓移植效果评估,BCR/ABL基因融合,正常细胞,分子诊断在病理诊断中的应用,25,2.慢性粒细胞白血病（CML）检测BCR/ABL融合基因BC,3.急性早幼粒细胞白血病（M3）检测PML/RARA融合基因。 指导全反式维甲酸(All trans-retinoic acid，ATRA) 用药ATRA治疗机制是靶向降解PML/RARA融合蛋白，促进阻滞在早幼粒细胞阶段的白血病细胞分化成熟。,PML/RARA融合基因,正常细胞,分子诊断在病理诊断中的应用,26,3.急性早幼粒细胞白血病（M3）检测PML/RARA融合基因,3.性染色体骨髓错配移植检测 用于监测性染色体错配的骨髓移植效果,女性患者骨髓移植前 女性患者骨髓移植后,分子诊断在病理诊断中的应用,27,3.性染色体骨髓错配移植检测 女性患者骨髓移植前,四.染色体数目的检测,不明原因流产中较为常见的有X单体，发生率约为20%；16号三体，发生率约为16%；18号三体，发生率约为3%；21三体，发生率约为5%；22三体，发生率约为5%。进行染色体检测可以为下一胎妊娠遗传咨询提供资料。,21三体,13三体,分子诊断在病理诊断中的应用,28,四.染色体数目的检测 不明原因流产中较为常见的有X单体，发,其它项目,一.基因重排在淋巴瘤诊断中的应用它在淋巴瘤的分型、疗效评价、预测复发和预后评估等方面有重要的临床意义。二.端粒酶与肿瘤的关系检测 由于TERC（telomerase of RNA component ）基因编码端粒酶的RNA组分，维持端粒的长度，该基因的扩增使得端粒稳定，阻止细胞凋亡，导致肿瘤产生。 当病理检测不能明确患者分级的情况下： 如果TERC基因扩增阳性，患者处在CIN2及以上级别的可能性为90% 如果TERC基因扩增阴性，患者处在CIN1及以下级别的可能性为90%,分子诊断在病理诊断中的应用,29,其它项目一.基因重排在淋巴瘤诊断中的应用分子诊断在病理诊断,结束语,分子检测是具有划时代意义的手段，在生物医学领域正发挥着巨大的作用，在肿瘤基础和临床研究中也显示了极大地优越性和应用前景。,分子诊断在病理诊断中的应用,30,结束语 分子检测是具有划时代意义的手段，在,谢 谢！,分子诊断在病理诊断中的应用,31,谢 谢！分子诊断在病理诊断中的应用31,
