常见的微生物育种方法ppt课件.ppt

常见的微生物育种方法,2,主要内容,一、微生物育种简介二、紫外线诱变选育 （1）诱变机理 （2）DNA损伤修复 （3）紫外线诱变育种程序 （4）实例：酸性-淀粉酶高产菌株选育（重点介绍测定方法及结果）,Thank you!,4,一、微生物育种简介,为什么要发展微生物育种技术 微生物育种：是以提高微生物菌株生产性能为目标，人为改造微生物菌株的遗传性能的过程。主要微生物育种技术 诱变育种 基因重组育种 基因工程育种 代谢调控育种,返回,5,（1）诱变机理,紫外线诱变的主要生物学效应是由于DNA 变化而造成的，DNA对紫外线有强烈的吸收作用，尤其是碱基中的嘧啶，它比嘌呤更为敏感。 它能引起DNA双链之间或同一条链上两个相邻的胸腺嘧啶形成二聚体，从而导致基因突变，从而引起微生物突变或死亡。经紫外线损伤的DNA，能被可见光复活。,6,返回,7,返回,8,（2）DNA损伤修复,返回,9,（3）紫外线诱变育种程序,返回,10,接种枯草芽孢杆菌,37 24h,活化菌株,100mL无菌水,取2环,加无菌玻璃珠置摇床上振荡20min,106 -108 个/mL 菌悬液,各取5 mL菌悬液,置于处磁力搅拌器上紫外灯 照射1min,先打开皿盖 开启磁力搅拌器,照射0s、50s、60s、70s、80s 、90s、100s、110s、120s,暗光条件下,分别取经紫外线诱变的菌悬液0.1mL,进行涂布,固体鉴别培养基,倒置于37恒温培养箱中避光培养36h,计算致死率,喷洒碘液,挑选单菌落变色圈直径与菌落直径比值H/C的菌株18棵,摇瓶发酵实验，测定其产酶能力,选取酶活最高的菌株进行复筛,1,11,返回,12,酶活测定,5ml 2%可溶性淀粉,5ml 0.02mol/L pH6.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液,60恒温水浴中预热45min,酶液1ml,立即记录时间充分摇匀,用滴管取反应液约0.5ml,预先充满比色稀碘液(约1.5ml）,当与标准终点色相同时（穴内颜色反应由紫色逐渐变为红棕色），即为反应终点，并记录时间t(min),2ml标准终点色溶液，作为比较颜色的标准,发酵液经5000rpm离心10min，取上清作为供试酶液,2,13,计算酶活,酶活用1ml酶液于60，pH6.0的条件下，1h液化可溶性淀粉的克数来表示g可溶性淀粉/mlh 酶活力单位= 60/t52%,3,14,实验结果分析,致死率与诱变剂剂量存在正相关,1、紫外诱变规律：,4,15,2、 筛选结果,经过紫外线诱变的菌株大部分酶活力有所提高,5,16,二次紫外线诱变结果,经二次紫外诱变后酶活提高不显著，菌株UV12 对紫外线表现出一定的耐受性,返回,