药物的鉴别试验课件.ppt

第一节 概 述,药品检验工作的基本内容,5. 检验报告,检验,一、药物鉴别试验的意义与目的,药物的鉴别试验（identification test)是根据药物的组成、分子结构、理化性质,采用化学、物理化学或生物学方法来证明已知药物的真伪。而不是对未知物进行定性分析。是药检工作的首要任务，杂质检查、含量测定的前提。,二、药物鉴别试验的特点,1.为已知药物的确证试验，不是鉴定未知物的组成和结构，仅用于证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物，而非对未知物的鉴别。2.鉴别试验是个别分析，而不是系统分析。(采用灵敏度高专属性强的方法,试验项目少，一般只作一、二或三、四项试验。原料药鉴别项下试验项目为34有的仅12个，制剂鉴别项目一般比原料药少)。,3.通常采用不同方法鉴别，综合分析。（药物鉴别不只由一项试验就能完成，而是采用一组试验项目（2个或2个以上）全面评价一个药物，如选用药物的化学鉴别反应,光谱特征,色谱行为,物理常数等不同方法鉴别同一个供试品，力求使结论正确无误。）4、对药物制剂进行鉴别时，要注意消除制剂中辅料的干扰，对复方制剂尤其要注意消除各主要成分的干扰。,中国药典,鉴别项下规定的试验方法,仅反应药品某些物理、化学或生物学等性质的特征，不完全代表对该药品化学结构的确认。,第二节 鉴别试验项目,药物的鉴别试验包括：性状和鉴别（一般鉴别试验和专属鉴别试验）。一、性状 包括颜色、臭味等应有的外观以及溶解度和物理常数。 是质量重要表征之一,在一定程度上反映药品的纯度及疗效。,1、外观 指药物外表感观和色泽，包括聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。 如：维生素B1“本品为白色 结晶或结晶粉末； 有微弱的特臭，味苦； 干燥品在空气中迅即吸收约4%的水分” 如：中国药典对二巯基丁二钠的描述为“本品为白色至微黄色的粉末；有类似蒜的特臭”。,（色泽）,（聚集状态）,（臭）,（味）,2、溶解度 溶解度是药物的一种物理性质，在一定程度上反映了药品的纯度。 如磺胺嘧啶“在乙醇或丙酮中微溶，在水中几乎不溶；在氢氧化钠试液中易溶，在稀盐酸中溶解”。 尼莫地平 在丙酮、三氯甲烷或乙酸乙酯中易溶，在乙醇中溶解，在乙醚中微溶，在水中几乎不溶。,3物理常数：评价药品质量的重要指标，具有鉴别意义，也反映该药品的纯杂程度。 中国药典收载的物理常数包括： 相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。,二、一般鉴别试验,依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪。 特点为： 是证实药品是某一类药物的依据，要进一步证实是哪一种药物，还需要结合专属鉴别试验。 是根据药物所具有的性质或结构进行药物的真伪鉴别。 例：无机药物根据其组成的阴、阳离子的特殊反应，并以药典附录项下的一般鉴别试验为依据 。 有机药物采用典型官能团反应。,只能确定供试品为某一类药物，而不能证实它是哪一种药物,一般鉴别试验： 只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药物。 例如:钠盐的焰色试验,不能辨认是氯化钠、苯钾酸钠或者是其它某一种钠盐药物。 只适用于确认单一的化学药物，对多种药物的混合物或有干扰物存在时，不适用。,一般鉴别试验的项目-中国药典,丙二酰脲类、 托烷生物碱类、 芳香第一胺类、 有机氟化物类、 无机金属盐类（钠盐、钾盐、锂盐、钙盐、钡盐、铵盐、镁盐、铁盐、铝盐、锌盐、铜盐、银盐、汞盐、铋盐、锑盐、亚锡盐）、 有机酸盐（水杨酸盐、枸橼酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、酒石酸盐）、 无机酸盐（亚硫酸盐或亚硫酸氢盐、硫酸盐、硝酸盐、硼酸盐、碳酸盐与碳酸氢盐、醋酸盐、磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物）,1.有机氟化物,(1)原理 有机氟化物经氧瓶燃烧法破坏，为碱性溶液吸收成为无机氟化物，在pH 4.3溶液中无机氟化物与与茜素氟蓝、硝酸亚铈结合成蓝紫色的螯合物。 为了消除试剂和器皿可能带来的影响，应同时进行空白试验（blank test）以供对照。 空白试验：在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂均同样加入而进行的试验。,反应式为：,(2)鉴别方法,取供试品约7mg，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用水20ml 与氢氧化钠（0.01mol/L）6.5ml为吸收液，待燃烧完毕后，充分振摇；取吸收液2ml，加茜素氟蓝试液0.5ml，再加含有12%乙酸钠的稀乙酸溶液0.2ml，用水稀释至4ml，加硝酸亚铈试液0.5ml，即显蓝紫色；同时做空白对照试验。,2.芳香第一胺类,(1)原理 芳香族第一胺遇亚硝酸钠发生重氮化反应，生成重氮盐，再与碱性-萘酚偶合形成有色偶氮染料。反应式为：,-奈酚试液要现用现配,不同的供试品，会生成橙黄色到猩红色沉淀。,(2)鉴别方法,取供试品约50mg，加稀盐酸1ml，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加亚硝酸钠溶液（0.1mol/L）数滴，滴加碱性-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成橙黄到猩红色沉淀。如供试品为酰化芳香第一胺类，取供试品约0.1g，加稀盐酸2ml，煮沸水解，放冷，再照上法试验。,3.丙二酰脲类(P141),（1）与银盐的反应 1)原理 丙二酰脲类在碳酸钠试液中形成钠盐而溶解，再与硝酸银试液起作用，先生成可溶性的一银盐，继而产生不溶性的二银盐沉淀。 2）鉴别方法 取供试品约0.1g，加碳酸钠试液1ml与水10 ml ，振摇2min，滤过，滤液中逐滴加入硝酸银试液即发生白色沉淀，振摇沉淀溶解；继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。,与银盐反应,一银盐,一银盐,二银盐白色沉淀,（2）与铜盐的反应,1）原理 丙二酰脲分子中具有CONHCONHCO的结构，与铜盐作用，能产生类似双缩脲的显色反应，与吡啶和硫酸铜作用，显紫色。2）鉴别方法 取供试品约50mg，加吡啶溶液（110）5 ml，溶解后，加铜吡啶试液1ml ，生成有特征颜色的配合物，即显紫色或生成紫色沉淀。,与铜盐反应,4、托烷生物碱类,（1）原理 托烷生物碱类药物均显莨菪酸结构的反应，有Vitali（维他立）反应，供试品与发烟硝酸共热，生成黄色的三硝基（或二硝基）衍生物，冷后，加醇制氢氧化钾少许，生成醌型化合物，显深紫色。（2）鉴别方法 取供试品约10mg，加发烟硝酸5滴，置水浴上蒸干，即得黄色的残渣，放冷，加乙醇23滴湿润，再加固体氢氧化钾一小粒，即显深紫色。,反应式为：,莨菪酸,5.无机金属盐（钠盐、钾盐、铵盐）,钠盐、钾盐（1）测定原理钠的火焰光谱的主要谱线有589.0nm、589.6nm，故显黄色。钾盐的火焰光谱的主要谱线有766.49nm、769.90nm等，由于人眼在此波长附近敏感度较差，故显紫色。如有钠盐混存，因钠盐灵敏度很高，遮盖了钾盐的紫色，需透过蓝色钴玻璃将钠焰的黄色滤去，此时火焰显粉红色。,（2）鉴别方法钠盐：1）取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色。2）取供试品约100mg，置10ml试管中，加水2ml溶解，加15%碳酸钾溶液2ml，加热至沸，应不得有沉淀生成；加焦锑酸钾试液4ml，加热至沸；置冰水中冷却，必要时，用玻璃棒摩擦试管内壁，应有致密的沉淀生成。,钾盐： 1）取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显紫色；但有少量的钠盐混存时，须隔蓝色玻璃透视，方能辨认。2）取供试品，加热炽灼除去可能杂有的铵盐，放冷后，加水溶解，再加0.1四苯硼钠溶液与醋酸，即生成白色沉淀。若有NH4+离子存在，显相同反应，故必须预先加热炽灼除去，以免干扰 。,铵盐（1）取供试品，加过量的氢氧化钠试液后，加热，即分解，发生氨臭；遇用水湿润的红色石蕊试纸，能使之变蓝色，并能使硝酸亚汞试液湿润的滤纸显黑色。,（2）取供试品溶液，加碱性碘化汞钾试液1滴，即生成红棕色沉淀。 铵盐与碱性碘化汞钾作用生成 红棕色沉淀 若仅有痕量NH4+离子存在，则得黄色溶液。,6、无机酸根（ SO42- 、 Cl-或NO3- ）,（1）硫酸盐 1）取供试品溶液，加氯化钡试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。（硫酸盐与氯化钡反应生成硫酸钡白色沉淀。硫酸钡在稀盐酸或稀硝酸中不溶） SO42- + Ba2+ BaSO4 白色,2）取供试品溶液，加醋酸铅试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。（硫酸盐与醋酸铅反应生成硫酸铅白色沉淀。沉淀遇醋酸铵即生成电离度极小的醋酸铅而溶解。由于铅具两性，故该沉淀遇氢氧化钠溶解，再加稀硫酸酸化，沉淀复现。）,3）取供试品溶液，加盐酸，不生成白色沉淀(与硫代硫酸盐区别)。,（2）氯化物 1）：取供试品溶液，加硝酸使成酸性后，加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀；分离，沉淀加氨试液即溶解，再加硝酸，沉淀复生成。 Cl- + AgNO3 AgCl NH3H2O 沉淀溶解 +HNO3 沉淀生成 如供试品为生物碱或其他有机碱的盐酸盐，须先加氨试液使成碱性，将析出的沉淀滤过除去，取滤液进行试验。,一般鉴别实验,2) 取供试品少量，置试管中，加等量的二氧化锰,混匀,加硫酸湿润, 缓缓加热，即发生氯气，能使湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。 Cl- + MnO2 Mn2+ + Cl2,H2SO4,使湿润的KI_淀粉试纸变蓝,（3）硝酸盐：,1）取供试品溶液，置试管中，加等量的硫酸，小心混合，冷后，沿管壁加硫酸亚铁试液，使成两液层，接界面显棕色。 NO3-离子被FeSO4还原产生NO，NO与FeSO4作用形成棕色。,2）取供试品溶液，加硫酸与铜丝（或铜屑），加热，即发生红棕色的蒸气。 硝酸被金属铜还原放出NO，NO在空气中被氧化为NO2而显棕色。,3）取供试品溶液，滴加高锰酸钾试液，紫色不应褪去（与亚硝酸盐区别）。,7、有机酸盐(水杨酸盐),方法一、与三氯化铁的反应 （1）原理 水杨酸盐在中性或弱酸性条件下，和三氯化铁试液生成配位化合物，在中性时呈红色，弱酸性时呈紫色；若在强酸性中，配位化合物分解生成游离水杨酸。 （2）鉴别方法：取供试品的稀溶液，加三氯化铁试液1滴，即显紫色。,目前反应机制尚未确定，一般多以下式表示：,本反应极为灵敏，只需取稀溶液进行试验，如取用量大，颜色很深时，可加水稀释后观察。,方法二、其他鉴别反应,（1）原理 水杨酸不溶于水（0时溶解度为1g/1500L），故供试液加酸即析出游离水杨酸。由于水杨酸的酸性大于醋酸，故能与醋酸铵作用释出醋酸，而本身形成铵盐溶解。 （2）鉴别方法：取供试品溶液，加稀盐酸，即析出白色水杨酸沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。,三、专属鉴别试验,证实某一种药物的依据 它根据每一种药物化学结构的差异及其引起的物理化学性质不同,选用某些灵敏的定性反应,来鉴别药物真伪。区别各个药物单体，达到最终确证药物真伪的目的。一般鉴别试验依据某类药物共同的特点，区别不同类药物。专属鉴别试验在一般鉴别试验的基础上，利用各种药物的化学结构差异，鉴别各个药物单体。,共性丙二酰脲-CONHCONHCO- 可与某些金属离子（Ag+、Cu2+、Hg2+等）反应呈色或产生沉淀,巴比妥类药物,+2AgNO3,+2HNO3,一般鉴别试验,与Pb2+反应生成黑色PbS,甲醛硫酸反应,碘取代反应,专属鉴别试验,硫喷妥钠,司可巴比妥,苯巴比妥,第三节 鉴别方法,药物的鉴别方法要求专属性强，重现性好，灵敏度高，以及操作简便、快速等。常用鉴别方法有化学法，光谱法，色谱法和生物学法。 一、化学鉴别法 反应迅速、现象明显。 包括测定生成物的熔点，在适当条件下产生颜色、荧光，发生沉淀反应或产生气体。,三氯化铁呈色反应(Ar-OH, Ar- OCOCH3) 异羟戊酸铁反应(Ar-COOH;-COOR) 1. 显色反应鉴别法 茚三酮呈色反应(脂肪氨基，氨基酸） 重氮化-偶合呈色反应(Ar-NH2; Ar- NHCOR) 氧化还原显色反应及其它颜色反应 与金属离子的沉淀反应,2. 沉淀生成鉴别法 与硫氰化铬铵的沉淀反应 其它沉淀反应(如生物碱沉淀剂）,药物本身在可见光下发射荧光 药物溶液加硫酸后在可见光下发射荧光 3. 荧光反应鉴别法 药物与溴反应后，在可见光下发出荧光 药物与间苯二酚溴反应后，发射出荧光 药物其它反应后，发射出荧光 制备衍生物： 药物试剂 具有荧光的衍生物,胺类、酰脲类、酰胺类药物经强碱处理 生成氨气 ( NH3 ；NH(C2H5)2) 含硫药物经强酸处理后，加热，生成硫 4. 气体生成反应鉴别法 化氢气体(H2S+Pb2+ PbS +2H+) 含碘有机药物，加热。生成紫色碘蒸汽 含醋酸酯和乙酰胺类药物酸水解后，加 乙醇可产生乙酸乙酯,5.制备衍生物测定熔点法 药物试剂 新化合物有一定mp; 药物酸化或碱化生成游离酸或碱。操作繁琐费时间，应用较少。,二、光谱鉴别法 测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长 规定浓度的供试液在最大吸收波长测定吸收度1.紫外光谱鉴别法 规定吸收波长和吸收系数法 规定吸收波长和吸收度比值法 经化学处理后, 测定其反应产物吸收光谱特性,压片法2. 红外光谱鉴别法 糊法 膜法 溶液法,TLC 法 （Rf样Rf对） 三、色谱鉴别法 PC法 HPLC法 （tR样tR对） GC法 四、 生物学法 是利用微生物或实验动物鉴别法,五、药物鉴别方法新动向,（1）仪器分析应用数量增加，尤其是红外光谱法、气相色谱法和高效液相色谱法。 （2）制剂广泛采用IR法鉴别。与原料药相比，制剂需先分离再压片绘制图谱。,六、鉴别实验条件,鉴别试验必须在规定条件下完成，否则将会影响结果的判断。影响鉴别反应的因素主要有被测物浓度，试剂的用量，溶液的温度、 pH ，反应时间和干扰物质的存在等。,（1）溶液的浓度 溶液的浓度主要指被鉴别物质的浓度，其大小影响结果的判断。 （如化学法中要观察沉淀、颜色；UV法中max, A, E1%1cm)（2）溶液的温度 温度过高可使产物分解，导致颜色变浅，沉淀溶解，甚至观察不到结果，故试验中应注意温度的控制。,（3）溶液的酸碱度 许多鉴别反应都需要在一定酸碱度的条件下进行，溶液的酸碱度能够使各反应物有足够的浓度处于活化状态、使反应产物处于稳定和易于观察状态。 （4）试验时间 有机化合物的化学反应较慢，需要一定的反应时间和条件。 （5）干扰成分的存在 药物制剂的鉴别，其它成分则会干扰检查结果的现象观察，必须选择专属性更高的鉴别方法或将干扰成分分离后鉴别。,第四节 鉴别试验的灵敏度,一、反应灵敏度 在一定条件下，能在尽可能稀的溶液中观测出尽可能少量的供试品，反应对这一要求所能满足的程度，即称为反应的灵敏度（sensitivity）。它以两个相互有关的量来表示： 最低检出量（又称检出限量） （minimum detectable quantity) 最低检出浓度（又称界限浓度） （minimum detectable concentration),最低检出量（以m表示），就是应用某一反应，在一定的条件下，能够观测出试验结果的供试品的最小量，其单位通常用微克（g）表示。 最低检出浓度是应用某一反应，在一定条件下，能够观测出供试品的最低浓度，通常以1: V(或1:G）表示，其中V(或G)表示含有1g重某供试品的溶液的毫升（或克）数。,最低检出量和最低检出浓度之间的关系可以用下式表示： 式中V为鉴别试验时，所取供试品溶液的最小体积（ml）。 鉴别反应的灵敏度越高，产生可观测的结果所需要的药物越少。,二、空白试验,空白试验：在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂均同样加入而进行的试验。 在选用灵敏度很高的反应时，必须采用高纯度的试剂，非常洁净的器皿，才能保证鉴别试验结果的可靠性。为了消除试剂和器皿可能带来的影响，应同时进行空白试验（blank test）以供对照。,小结,药物的鉴别试验（identification test)是根据药物的分子结构、理化性质,采用化学、物理 化学或生物学方法来证明已知药物的真伪。而不是对未知物进行定性分析。是药检工作的首要任务，杂质检查、含量测定的前提。,小 结,一般鉴别试验依据某一类药物的化学结构或理化特性，通过化学反应来鉴别药物的真伪。 有机氟化物类、有机酸盐（水杨酸、酒石酸盐） 芳香伯胺类、托烷生物碱类、无机金属盐、无机酸根,性状：外观、溶解度、物理常数,专属鉴别试验在一般鉴别试验的基础上，区别同类药物的各个单体,鉴别试验的项目,小 结,化学鉴别法,仪器鉴别法,鉴别试验方法,呈色反应沉淀生成反应荧光反应气体生成反应,光谱法（UV、IR、NIRS、AAS、NMR）,色谱法（TLC、HPLC、GC）,X射线粉末衍射、MS,作业,P53课本同步测试,实验一 查阅中国药典中有关内容,一、实验目的1.掌握中国药典的查阅方法；2.熟悉中国药典的基本结构。二、实验原理（写出中国药典的基本内容、各部分的主要内容以及中国药典的查阅方法）,三、实验内容 按照下列项目，查阅中国药典2010年版，记录所在页码及括号中内容的查阅结果。,四、注意事项,（1）药品可在品名目次中，按药品名称笔画为序查阅(同笔画的字按起笔笔形一 的顺序)。也可在英文索引或中文索引(按汉语拼音的顺序)中查阅。（2）制剂通则、一般鉴别试验、物理常数测定法、一般杂质检查法、分光光度法、色谱法等多种分析方法以及试液、试纸、指示液与指示剂、缓冲液等的配制、滴定液的配制及标定和指导原则等其他内容在附录中查阅。,