长链非编码RNADSCAM-AS1与吸烟和肺腺癌相关性研究.docx

长链非编码RNADSCAM-ASl与吸烟和肺腺癌相关性研究马腾I郭宗培，胡迎春，顾永清，朱茂祥，周平坤*军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京市放射生物学重点实验室(.；*责任作者：)摘要：【目的】研究长链非编码RNADSCAM-AS1在吸烟和肺腺癌中的功能和分子机制。【材料和方法】生物信息学分析DSCAM-ASl的表达；用香烟提取物处理细胞，观察DSCAM-ASl表达；生物信息学分析DSCAM-ASl功能相关通路；蛋白质组学方法分析DSCAM-ASl相互作用蛋白；DSCAM-ASl功能研究(线粒体呼吸功能分析)【结果】通过分析DSCAM-AS1在各种正常组织和肿痛组织中的表达谱，发现其中肺腺癌高表达；通过进一步分析分析DSCAM-AS1在未吸烟肺腺癌患者，最近吸烟肺腺癌患者和过去吸烟肺腺癌患者的基因芯片表达谱，发现DSCAM-ASl表达在过去吸烟者的肺腺癌组织中有表达增高趋势。并且我们用香烟提取物处理A549细胞系，实时定量PCR检测DSCAM-ASl表达变化，发现香烟提取物处理后DSCAU-ASl表达升高。提示DSCAu-ASl与吸烟相关。通过基因集富集分析(GeneSetEnrichmentAnalysis,GSEA),我们发现DSCAM-ASl与线粒体功能相关基因表达呈正相关。提示DSCAM-ASl可能参与线粒体功能调节或者吸烟导致的线粒体功能失调过程。进一步通过在细胞内过表达DSCAM-AS1,我们发现细胞的氧化磷酸化水平升高，糖酵解水平降低。将体外转录的DSCAM-ASiRNA与细胞裂解物孵育后，进行洗脱。再将洗脱产物进行质谱分析，我们发现在DSCAM-ASisenseRNA洗脱组分中HnRNP1.(heterogeneousnuclearribonuc1eoprotein1.)蛋白被富集最多。因此我们用WeSternblot进一步验证了两者的结合。反之亦然，我们使用RNA免疫沉淀的方法富集细胞内的HnRNP1.蛋白，然后实时定量PCR检测到DSCAM-ASl被HnRNP1.蛋白富集。本课题通过系统地研究新的长链非编码RNADSCAM-AS1在吸烟和肺腺癌中的功能和分子机制，有助于阐明吸烟引起细胞内基因突变和恶性转化的分子机制，阐明肺腺癌发展转移的分子机制，从而为肺腺癌的精准医疗奠定理论和应用基础，为有吸烟史的肺腺癌患者提供理论依据和新的治疗策略。