实验二腹腔巨噬细胞吞噬功能检测方法ppt课件.ppt

任课教师：吴雨龙 任课班级：07级学生,实验九 腹腔巨噬细胞吞噬功能检查,实验九 腹腔巨噬细胞吞噬功能检查,掌握巨噬细胞体外吞噬异物能力的测 定方法，观察机体的非特异性免疫现象。,在机体的免疫过程中，巨噬细胞承担着噬菌、杀菌、清除机体内被损伤和衰老的细胞，以及传递抗原信息；巨噬细胞将捕获的抗原进行加工处理后，把降解的抗原信息传递给T、B淋巴细胞。巨噬细胞又是天然杀伤细胞(NK细胞)的激活剂，且对B淋巴细胞的激活、增殖和分化具有调节作用。,巨噬细胞在机体的非特异性免疫中具有重要作用，其吞噬异物的能力在一定程度上反映了机体免疫水平的高低。本实验采用测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数，来评价免疫抑制剂环磷酰胺(CYP)对机体免疫状态的抑制作用。,1. 仪器设备：显微镜、保温箱、解剖盘、吸管、试管架、剪刀、解剖刀、解剖镊、载玻片、盖玻片。,2. 实验试剂： Alsevers溶液 Hanks液 0.9%生理盐水(灭菌), Giemsa染液 甲醇 肝素钠溶液 0.6%环磷酰胺溶液,2. 1%鸡红细胞悬液： 自健康鸡采血5ml，放入盛有20ml Alsever溶液瓶中，混匀后置4冰箱保存备用。使用前，取用Alsevers 液保存的新鲜鸡血5ml ， 加入8ml 的0.85% 的生理盐水，小心混匀，1500 r/min 离心10min，如此洗涤2次，最后用生理盐水配成1%的鸡红细胞悬液。,1. 小白鼠。,1.实验前二天，给实验组小鼠腹腔注0.6%的环磷酰胺(0.2ml/只)，对照组小鼠注射灭菌生理盐水0.2ml/只，然后每只小鼠注射pH7.2 的Hank液 2m1。,2.实验当天给小鼠腹腔注射5%鸡红细胞0.5ml/只。23h后立即由腹腔注入lml生理盐水,脱颈法处死小鼠。,3. 轻揉小鼠腹部约lmin，剪开腹部皮肤,肌肉层上开口，将滴管伸入腹腔吸出腹腔液，置于滴有肝素钠的离心管中（同一组小鼠腹腔液放入同一管中）混匀。,4.把腹腔液滴加在洁净的载玻片上，每片0.10.2ml，每组重复作片3 5片；将载玻片置于带盖解剖盘中(盘底部放23盒湿沙布)，37培养箱孵育30min。,5.取出玻片，漂洗去上清液和末粘附在玻片上的细胞。,6.室温下晾干或用吹风机吹干载玻片，Giemsa染液染色5l0min，冲洗去多余染液，晾干。,7.高倍镜或油镜下观察并计数100200个巨噬细胞中有多少个巨噬细胞吞噬了鸡红细胞，计算出吞噬百分率和吞噬指数。,1. 37孵育后的漂洗标准是：在显微镜下检查无重叠细胞层，且水流不要过急以免将贴附在玻片上的巨噬细胞冲掉。,2. 腹腔注射时进针勿过深，否则易伤害其内脏，使血管破损出血，影响实验取材。,根据你的观察和计数，计算巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数。,1.制片过程中，为什么要把滴有小鼠腹腔液的载玻片，在润湿条件下置37 温箱孵育30min？,2.简述本实验的关键步骤。,吞噬百分率= 100,吞噬指数=,巨噬细胞正在吞噬红细胞(电镜）,巨噬细胞吞噬细菌（电镜）,肺巨噬细胞吞噬大肠杆菌（电镜）,