寄生虫全面版课件.pptx

1,寄生虫6,第1页/共86页,1寄生虫6第1页/共86页,革兰阳性球菌,是指革兰染色为阳性的一群球菌，与医学 有关的兼性厌氧球菌有9属通常引起化脓性感染，故又称化脓性球菌（pyogenic cocci）本章主要介绍葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属。专性厌氧球菌在第十六章厌氧菌中介绍。,第2页/共86页,革兰阳性球菌是指革兰染色为阳性的一群球菌，与医学第2页/共8,第一节 葡萄球菌属,葡萄球菌属（Staphylococcus）在自然界广泛分布。存在于人和动物的皮肤黏膜上的菌株可致多种化脓性感染疖、痈、脓肿、菌血症等烫伤样皮肤综合症毒性休克综合症,第3页/共86页,第一节 葡萄球菌属葡萄球菌属（Staphylococcu,一、分类,葡萄球菌属目前有35个种、17个亚种凝固酶凝固酶阳性葡萄球菌凝固酶阴性葡萄球菌 （Coagulase negative staphylococcus, CoNS ）噬菌体分型可将金黄色葡萄球菌分成45群26型质粒分型、血清学分型、抗生素分型和细菌DNA的RFLP或PFGE分型，用来研究细菌的致病性、耐 药性、流行病学特点和细菌鉴别的关系,第4页/共86页,一、分类葡萄球菌属目前有35个种、17个亚种第4页/共86页,分类,引起人类疾病的重要菌种有金黄色葡萄球菌（）表皮葡萄球菌（）头状葡萄球菌（）人葡萄球菌（）腐生葡萄球菌（）其余尚有一些能在人体中分离到溶血葡萄球菌、沃氏葡萄球菌、模仿葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施氏葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、耳葡萄球菌、孔氏葡萄球菌、木糖葡萄球菌、解糖葡萄球菌、山羊葡萄球菌、普氏葡萄球菌、中间葡萄球菌等。,第5页/共86页,分类引起人类疾病的重要菌种有第5页/共86页,无菌体液如脑脊液和关节穿刺液可使用涂二、触酶阴性的革兰阳性球菌兼性厌氧，最适生长温度35，10和45均能生长葡萄球菌属目前有35个种、17个亚种不含细胞色素氧化酶和触酶凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌是人类重要致病菌无乳链球菌是新生儿菌血症和脑膜炎的常见菌B群链球菌对成人侵袭力较弱根据伯杰鉴定细菌手册第9版，链球菌目前分为40个种和亚种与Fmm可确定为米勒链球菌,二、临床意义,凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌是人类重要致病菌可引起社区和医院感染感染常以急性、化脓性为特征，如果未经有效治疗，感染可扩散至周围组织或经菌血症转移至其他器官常见的感染疖、痈、外科切口、创伤等局部化脓性感染和骨髓炎、化脓性关节炎、肺炎、心内膜炎、脑膜炎、菌血症等全身性感染,第6页/共86页,无菌体液如脑脊液和关节穿刺液可使用涂二、临床意义凝固酶阳性的,临床意义,致病性主要与各种侵袭性酶类和多种毒素有关肠毒素引起食物中毒，表现为急性胃肠炎噬菌体II群产生的剥脱毒素（或称表皮溶解素）可引起人类烫伤样皮肤综合征多见于新生儿、幼儿和免疫功能低下的成人皮肤呈弥漫性红斑和水疱形成，继以表皮上层大量脱落由噬菌体群产生的毒性休克综合征毒素-I（Toxic shock syndrome toxin I, TSST-1）属超抗原家族，刺激T细胞诱发TNF和IL-1可致机体多个器官的功能紊乱或引起毒性休克综合征(TSS),第7页/共86页,临床意义致病性主要与各种侵袭性酶类和多种毒素有关第7页/共8,临床意义,CoNS是人体皮肤黏膜正常菌群之一是医院感染的主要病原菌表皮葡萄球菌人工瓣膜性心内膜炎、静脉导管感染、腹膜透析性腹膜炎、血管移植物感染和人工关节感染等腐生葡萄球菌女性尿路感染的重要病原菌其他凝固酶阴性葡萄球菌重要的条件致病菌和免疫受损患者的感染菌产生荚膜多糖或糖萼有关增强细菌与外来物质（生物性瓣膜、导管等）表面的粘附或在其表面形成一层生物膜而保护细菌对抗杀菌物质作用。,第8页/共86页,临床意义CoNS是人体皮肤黏膜正常菌群之一第8页/共86页,三、生物学特性,m、革兰阳性球菌呈单个、成双、短链（液体培养基或脓汁中）或成簇排列呈葡萄串样，无鞭毛和芽胞，某些菌株能形成荚膜在金黄色葡萄球菌的细胞壁有葡萄球菌A蛋白，具有抗原性大多为兼性厌氧菌,对营养要求不高，最适生长条件3537，pH7.47.6。普通培养基上形成直径23mm不透明的圆形凸起菌落产生金黄色、白色、柠檬色等非水溶性色素附着在菌落上。,第9页/共86页,三、生物学特性m、革兰阳性球菌第9页/共86页,生物学特性,金黄色葡萄球菌血琼脂平板上菌落周围有透 明溶血环。能在含10%15% NaCl琼脂中生长该菌的抵抗力比其他无芽胞细菌强，耐干燥近年来耐药性增强，对多种抗菌药物不敏感生化反应活泼、能分解多种糖类和蛋白质， 触酶阳性该属细菌DNA G+C mol% 为3039,第10页/共86页,生物学特性金黄色葡萄球菌血琼脂平板上菌落周围有透第10页/共,酶和毒素,葡萄球菌属产生多种酶和毒素产生2种血浆凝固酶结合凝固酶或聚集因子是结合在菌体表面的凝固酶，能与血浆中的纤维蛋白原交联使菌体快速凝集游离凝固酶是细菌分泌到菌体外的凝固酶，能被血浆中的协同因子（cofactor）激活形成复合物，再使纤维蛋白原转变成纤维蛋白，而使血浆凝固,第11页/共86页,酶和毒素葡萄球菌属产生多种酶和毒素第11页/共86页,酶和毒素,耐热核酸酶葡萄球菌溶素有、等破坏红细胞、白细胞、血小板以及肝细胞等肠毒素是一组对热稳定的可溶性蛋白质，耐热100 30min ,分子量为2630kDa，能够抵抗胃肠液中蛋白酶的水解作用根据抗原性和等电点的不同可分为A、B 、C1、C2、 C3、D、E、G和H等9个血清型，以A、D 型多见编码肠毒素基因大多位于染色体上（D型由质粒编码）,第12页/共86页,酶和毒素耐热核酸酶第12页/共86页,酶和毒素,毒性休克综合征毒素透明质酸酶、磷脂酶、触酶、杀白细胞 素和表皮剥脱毒素等携带诱导性的青霉素酶和乙酰基转移酶质粒，通过转导进行质粒的转移部分菌株通过获得外源性的macA基因而 产生青霉素结合蛋白2a（PBP2a），导致对所有内酰胺类抗生素耐药,第13页/共86页,酶和毒素毒性休克综合征毒素第13页/共86页,四、微生物检验 （一）检验程序,第14页/共86页,四、微生物检验 （一）检验程序 第14页/共86页,（二）标本采集,根据感染的部位，采集不同的标本。该属细菌广泛分布在人体皮肤和黏膜，采取时避免病灶周围正常菌群污染。,第15页/共86页,（二）标本采集根据感染的部位，采集不同的标本。第15页/共8,（三）标本直接检查,无菌体液如脑脊液和关节穿刺液可使用涂 片、革兰染色后直接显微镜检查，查见细菌 具有重要临床价值。其他体液标本如同时伴有炎性细胞时则直接 显微镜检查结果也具有参考价值。涂片检查发现有形态相似的革兰阳性球菌， 则可初步报告“查见类似葡萄球菌属革兰阳性 球菌”，并进一步进行分离和鉴定予以证实。,第16页/共86页,（三）标本直接检查无菌体液如脑脊液和关节穿刺液可使用涂第1,（四）分离培养与鉴定,脓液、分泌物等接种于血琼脂平板有污染的标本如粪便等应接种在选择平板上，如甘露醇高盐平板、哥伦比亚多粘菌素奈啶酸平板血液标本则用肉汤增菌培养基,第17页/共86页,（四）分离培养与鉴定脓液、分泌物等第17页/共86页,葡萄球菌属内各菌种鉴定方法,第18页/共86页,葡萄球菌属内各菌种鉴定方法 第18页/共86页,1.菌落性状,金黄色葡萄球菌直径68mn，金黄色或橙色，菌落周围出现或不出现透明溶血环表皮葡萄球菌直径为56mm，某些产粘液菌株能粘附在琼脂平板表面，无色或白色溶血葡萄球菌直径59mm，不透明，无色素或奶油色、黄色里昂葡萄球菌直径47mm，边缘整齐稍扁，奶色、黄色和沃氏葡萄球菌相似腐生葡萄球菌直径58mm，白色或柠檬色菌落外观疑为葡萄球菌者应进行革兰染色证实甘露醇高盐平板上金黄色葡萄球菌菌落为黄色,第19页/共86页,1.菌落性状 金黄色葡萄球菌第19页/共86页,2凝固酶试验,有玻片法和试管法两种玻片凝固酶试验-测定结合型凝固酶试验时挑取少数菌落培养物（不能用生 长高盐琼脂上的菌落）加入1滴血浆，10 秒内观察细菌聚集和凝块形成金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌呈现 阳性反应,第20页/共86页,2凝固酶试验 有玻片法和试管法两种第20页/共86页,2凝固酶试验,试管凝固酶试验-测定分泌型凝固酶以孵育过夜的牛心脑浸液肉汤培养物和血浆在37水浴中孵育4h，观察凝块形成。如试验结果为阴性者再置室温1824h，因某些菌种（中间葡萄球菌、猪葡萄球菌）的凝集出现所需时间长于4h必须注意某些菌株产生的葡激酶在延长孵育时间后可使凝块溶解使之产生假阴性若使用的不是无菌血浆可产生假阳性或假阴性结果；细菌不是纯培养物或污染可导致假阳性,第21页/共86页,2凝固酶试验试管凝固酶试验-测定分泌型凝固酶第21页/共8,3耐热核酸酶试验,大多数金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌、猪葡萄球菌能产生耐热核酸酶。表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄球菌含微弱耐热核酸酶。,第22页/共86页,3耐热核酸酶试验 大多数金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间,4磷酸酶试验,大多数的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌和猪葡萄球菌为阳性。将待测菌种点种在加有硝基酚磷酸盐的pH5.66.8 MH琼脂上，孵育1824h，菌落周围出现黄色为阳性。,第23页/共86页,4磷酸酶试验 大多数的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌、施氏,5吡咯烷酮芳基酰胺酶试验,溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施氏葡萄球菌和中间葡萄球菌为阳性。将孵育24h斜面培养物接种在含吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR）肉汤中，使细菌浓度调整为2号麦氏管浊度，35孵育2h，加入PYR试剂后2分钟内呈现深紫红色为阳性。,第24页/共86页,5吡咯烷酮芳基酰胺酶试验 溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施,6其他鉴定试验,常用的葡萄球菌属种间细菌的鉴定生化试验鸟氨酸脱羧酶试验、脲酶试验、-半乳糖苷酶、3-羟基丁酮酸试验、新生霉素敏感试验、多粘菌素B耐药试验、糖产酸试验,第25页/共86页,6其他鉴定试验 常用的葡萄球菌属种间细菌的鉴定生化试验第2,（五）肠毒素检测,动物学试验经典的方法是采用幼猫腹腔注射(肉汤培养物或呕吐物)，4h 内发生呕吐腹泻和体温升高或死亡等现象者，提示金黄色葡萄球菌肠毒素存在 琼脂扩散试验或ELISA法测定用琼脂扩散试验测定待测标本中的金黄色葡萄球菌肠毒素与相应抗毒素在琼脂糖中进行双相扩散，观察有无沉淀线产生将抗毒素包被在固相载体中以双抗体夹心ELISA法检测样本中的肠毒素,第26页/共86页,（五）肠毒素检测动物学试验第26页/共86页,第二节 链球菌属,链球菌属（Streptococcus）细菌种类多，分布广其中某些菌种为毒力强的致病菌另一些则是作为正常菌群栖居于宿主的呼吸道、消化道、泌尿生殖道还有一些是皮肤上的过路菌和黏膜上的定居菌,第27页/共86页,第二节 链球菌属链球菌属（Streptococcus）第2,一、分类,链球菌属的分类较为复杂传统分类以血平板上溶血现象Lancefield抗原血清分型种系分类法链球菌属的分类较以前的分类有较大的变化,第28页/共86页,一、分类链球菌属的分类较为复杂第28页/共86页,传统分类,根据链球菌属各种细菌在血平板上的溶血现象甲型（）溶血性链球菌乙型（）溶血性链球菌不出现溶血的丙型（）链球菌根据Lancefield抗原血清分型分为A、B、C、D、等20群血清群与溶血特性没有相关性。对人类致病的主要是A群,第29页/共86页,传统分类根据链球菌属各种细菌在血平板上的溶血现象第29页/共,种系分类法,根据种系分类法的研究结果原来归属为D群链球菌的肠球菌和N群链球菌已分别独立为肠球菌属（Enterococcus）和乳球菌属（lactococcus）遗传学和血清学分型不能统一在遗传学上相关的同种细菌其抗原可出现异质性毫无相关的菌种可出现同一抗原。根据伯杰鉴定细菌手册第9版，链球菌目前分为40个种和亚种,第30页/共86页,种系分类法根据种系分类法的研究结果第30页/共86页,传统的分类方法,溶血性链球菌A、C、G群抗原mm A群的化脓性链球菌（S. pyogenes）、C群、G群的马链球菌（）和似马链球菌（）mm具A、C、G群抗原，统称米勒链球菌（）咽喉炎链球菌、中间型链球菌和星座链球菌还有溶血和不溶血的细菌B群抗原无乳链球菌（）,第31页/共86页,传统的分类方法溶血性链球菌第31页/共86页,传统的分类方法,溶血性链球菌包括肺炎链球菌（）草绿色链球菌群（Viridans streptococci）不溶血D群链球菌牛链球菌（S.bovis）,第32页/共86页,传统的分类方法溶血性链球菌第32页/共86页,二、临床意义,化脓性链球菌是致病力最强的一种链球菌能产生多种毒素链球菌溶素O和S红疹毒素M蛋白、脂磷壁酸酶（链激酶、链道酶、透明质酸酶等）可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、脓疱病、 软组织感染、心内膜炎和脑膜炎等产毒株还可引起猩红热可致感染后的变态反应性疾病如急性肾小球肾炎、 风湿热等近年来报道引起毒素休克综合征,第33页/共86页,二、临床意义化脓性链球菌是致病力最强的一种链球菌第33页/共,临床意义,无乳链球菌是新生儿菌血症和脑膜炎的常见菌该菌定居于妇女生殖道能导致新生儿感染早发型新生儿感染多发病于出生后24h，以肺炎为主晚发型为产后7天至3月内，以脑膜炎和菌血症为主B群链球菌对成人侵袭力较弱主要有肾盂肾炎、子宫内膜炎糖尿病、泌尿生殖道功能失调、肿瘤和免疫机能低下者易受B群链球菌感染,第34页/共86页,临床意义无乳链球菌是新生儿菌血症和脑膜炎的常见菌第34页/共,临床意义,C、G群溶血性链球菌与化脓性链球菌有相似的毒力因子，引起上述相似的感染米勒链球菌是人体口腔、上呼吸道、消化道、泌尿生殖道正常菌群尽管在化脓性感染病灶中能分离到该菌，但大都是手术和创伤引起的内源性感染,第35页/共86页,临床意义C、G群溶血性链球菌第35页/共86页,临床意义,肺炎链球菌大叶性肺炎、支气管炎中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎和菌血症肺炎链球菌的荚膜在细菌的侵袭力上起着重要作用肺炎链球菌的溶血素、神经氨酸酶也是其主要致病物质,第36页/共86页,临床意义肺炎链球菌第36页/共86页,临床意义,草绿色链球菌人体口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群，可引起心脏瓣膜异常患者的亚急性细菌性心内膜炎从血液中分离出该菌常被认为是污染的细菌血液链球菌、温和链球菌、格氏链球菌、 口腔链球菌、中间型链球菌常分离自深部脓肿，特别是肝和脑的脓肿,第37页/共86页,临床意义草绿色链球菌第37页/共86页,三、生物学特性,第38页/共86页,三、生物学特性第38页/共86页,1形态,链球菌是直径小于2m的球形或卵圆形革兰阳性球菌，呈链状排列，链的长短和细菌的种类及生长环境有关,肺炎链球菌呈矛尖状，宽端相对尖端向外，成双排列，无芽胞、无动力，但能形成荚膜和粘液层,第39页/共86页,1形态链球菌是直径小于2m的球形或卵圆形革兰阳性球菌，呈,2培养特性,兼性厌氧菌肺炎链球菌和草绿色链球菌某些种需要CO2营养要求高须在培养基中加入血液、血清。最适生长温度3537，血平板上形成灰白色小菌落不同菌种的菌落可形成、三种特征性溶血现象液体培养基中表现为絮状和颗粒沉淀肺炎链球菌荚膜多糖使菌落呈粘液状产生自溶酶，培养48h后出现“脐窝状”菌落,第40页/共86页,2培养特性兼性厌氧菌第40页/共86页,3生化特性和抵抗力,发酵葡萄糖和多种糖，不产气，乳酸为代谢终末产物，触酶阴性链球菌基因DNA中G+C mol%为3446抵抗力本菌属大多数细菌对干燥和消毒剂敏感本菌属细菌较少引起细菌耐药性近年对青霉素耐药甚至多重耐药的肺炎链球菌的出现并在全球播散，引起高度关注,第41页/共86页,3生化特性和抵抗力发酵葡萄糖和多种糖，不产气，乳酸为代谢终,抗原结构,抗原结构复杂多糖抗原位于细胞壁以此可将链球菌分类为A、B、C、D、F、G等20群蛋白抗原主要有M蛋白、F蛋白和G蛋白等,第42页/共86页,抗原结构抗原结构复杂第42页/共86页,四、微生物检验,检验程序,第43页/共86页,四、微生物检验检验程序 第43页/共86页,（二）标本采集,咽拭子、痰液、脓汁和血液等标本采集后在2h内运送到实验室，立即进行检查和接种对B群溶血链球菌的检查，用无菌棉签采集第35周37周妊娠妇女的阴道分泌物，置于含多粘菌素(10g/ml)和萘啶酸(15g/ml)选择性培养肉汤中孵育1824h，再作分离培养,第44页/共86页,（二）标本采集咽拭子、痰液、脓汁和血液等标本采集后在2h内运,（三）标本直接检查,直接显微镜检查 标本涂片、革兰染色、显微镜检查见链状排列革兰 阳性球菌有助于无正常菌群污染标本的诊断荚膜肿胀试验用于检查肺炎链球菌直接检测抗原咽拭标本的A群链球菌和女性生殖道标本的B群链 球菌可用抗原检测用凝集试验或用ELISA方法等检测该方法特异性和敏感度高，当标本所含的菌数太少 可出现假阴性,第45页/共86页,（三）标本直接检查直接显微镜检查 第45页/共86页,（四）分离培养与鉴定,用羊血琼脂平板培养有助于识别溶血特性和进一步 鉴定初代分离需用5%CO2环境，3537孵育24h观察菌落性状菌落周围呈现透明溶血环的为mmmm。草绿色溶血环的为溶血性链球菌。有些菌落灰白色不出现溶血环革兰染色为革兰阳性球菌，链状或短链状排列触酶试验阴性，6.5%NaCl不生长者可确定为链球菌属细菌,第46页/共86页,（四）分离培养与鉴定用羊血琼脂平板培养有助于识别溶血特性和进,链球菌属内的鉴定试验,第47页/共86页,链球菌属内的鉴定试验第47页/共86页,溶血性链球菌鉴定,溶血性链球菌鉴定Lancefield群特异性抗原鉴定根据Lancefield分群的要求提取各菌落的抗原，与相应的分群血清进行凝集试验。与B群抗血清凝集的菌株可直接确认为无乳链球菌与Fmm可确定为米勒链球菌与A、C、G群抗血清凝集的菌株不能确定种类，还需根据菌落大小和生化反应进一步鉴定,第48页/共86页,溶血性链球菌鉴定溶血性链球菌鉴定第48页/共86页,溶血性链球菌鉴定,PYR试验化脓性链球菌产生的吡咯烷酮芳基酰胺酶水解吡咯烷酮-萘基酰胺，加入N，N-二甲氧基肉桂醛试剂后产生桃红色杆菌肽（bacitracin）敏感试验化脓性链球菌为阳性，有别于其他PYR阳性的溶血性细菌（猪链球菌、海豚链球菌）和A群小菌落溶血性链球菌（米勒链球菌）此法可作为筛选试验,第49页/共86页,溶血性链球菌鉴定PYR试验第49页/共86页,以孵育过夜的牛心脑浸液肉汤培养物和血浆在37水浴中孵育4h，观察凝块形成。须在培养基中加入血液、血清。重要的条件致病菌和免疫受损患者的感染菌CoNS是人体皮肤黏膜正常菌群之一本菌属细菌较少引起细菌耐药性若送检标本中含革兰阴性杆菌可选用选择鉴别培养基，常用的有：具有重要临床价值。第二群:分解甘露醇和水解精氨酸中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎和菌血症肺炎链球菌呈矛尖状，宽端相对尖端向外，成双排列，无芽胞、无动力，但能形成荚膜和粘液层主要有M蛋白、F蛋白和G蛋白等可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、脓疱病、表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄球菌含微弱耐热核酸酶。生长缓慢的菌株容易与生活力缺损菌属混B群链球菌对成人侵袭力较弱可将金黄色葡萄球菌分成45群26型无菌体液如脑脊液和关节穿刺液可使用涂,溶血性链球菌鉴定,VP试验挑取平板上孵育过夜菌落置于2ml VP肉汤中，孵育6h后加入VP试剂，摇匀30秒，出现桃红色者为阳性该试验可鉴别A、C、G群溶血的大、小两种不同菌落CAMP试验无乳链球菌能产生CAMP因子，它可促进金黄色葡萄球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用本法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验,第50页/共86页,以孵育过夜的牛心脑浸液肉汤培养物和血浆在37水浴中孵育4h,溶血性链球菌鉴定,此外鉴别溶血链球菌还有BGUR（B-D葡糖糖醛酸酶试验）C、G群菌落为阳性反应，C、G群米勒链球菌则为阴性反应。,第51页/共86页,溶血性链球菌鉴定此外鉴别溶血链球菌还有BGUR（B-D葡,2非溶血链球菌鉴定,通过血清学测定抗原群，可将B群链球菌、非溶血的菌株和肺炎链球菌得以鉴定Lancefield的D群抗原可以存在于牛链球菌、肠球菌属和片球菌属，因此需要进行生化反应予以鉴别。,第52页/共86页,2非溶血链球菌鉴定 通过血清学测定抗原群，可将B群链球菌,草绿色链球菌鉴定,草绿色链球菌是人体正常菌群一部分，通常不致病，目前借助于常规方法鉴定到种有一定困难，通常将其鉴定到群。根据16SrRNA可分为温和链球菌群（mitis group）、米勒链球菌群（miller group）、变异链球菌群（mutans group）和唾液链球菌群（salivrius group）,第53页/共86页,草绿色链球菌鉴定 草绿色链球菌是人体正常菌群一部分，通常不致,商品化鉴定系统,API-Strep系统ID32 strep系统Microscan系统,第54页/共86页,商品化鉴定系统API-Strep系统第54页/共86页,抗链球菌溶素O抗体检测,常用于风湿热的辅助诊断活动性风湿热患者抗体效价一般超过400单位,第55页/共86页,抗链球菌溶素O抗体检测常用于风湿热的辅助诊断第55页/共86,肠球菌属Enterococus,广泛分布在自然界常栖居在人、动物的肠道和女性生殖道为医院感染的重要病原菌,第56页/共86页,肠球菌属Enterococus广泛分布在自然界第56页/共,一、分类,肠球菌属原归类于链球菌属于1984年将其命名为肠球菌属至今，经由16SrRNA序列分析和核酸杂交 等，证实肠球菌可分为5群19个种临床标本分离的肠球菌多属于第2群,第57页/共86页,一、分类肠球菌属原归类于链球菌属第57页/共86页,二、临床意义,肠球菌所致感染最多见于泌尿道感染,是重要的医院感染病原菌多与泌尿道器械操作、留置导尿、尿路结构异常有关腹腔和盆腔创伤时也是常见的感染菌肠球菌引起的菌血症常发生于有严重基础疾患的老年人、长期住院接受抗菌药物治疗的免疫功能低下患者,第58页/共86页,二、临床意义肠球菌所致感染最多见于泌尿道感染,是重要的医院感,二、临床意义,近年来不断上升的肠球菌感染率和广泛使用 抗菌药物出现的耐药性有关在临床诊断前应认真评估分离菌的临床意义临床标本中分离的80%90%是粪肠球菌屎肠球菌约占5%10%很少分离到肠球菌属的其它种,第59页/共86页,二、临床意义近年来不断上升的肠球菌感染率和广泛使用第59页/,三、生物学特性,形态： 肠球菌为革兰阳性球菌、呈单个，成对或短链状排列，琼脂平板上生长的细菌呈球杆状液体培养基中呈卵圆形、链状排列无芽胞和荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛,第60页/共86页,三、生物学特性形态： 第60页/共86页,培养特性,兼性厌氧，最适生长温度35，10和45均能生长营养要求不高。部分粪肠球菌菌株在含有兔血、马血或人血的平板上出现溶血，而在羊血平板上不出现。其它菌种出现溶血或不溶血所有菌株在含6.5%NaCl肉汤中能生长,第61页/共86页,培养特性兼性厌氧，最适生长温度35，10和45均能生长,生物学特性,在40%胆汁培养基中能分解七叶苷，多数菌种具有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR）不含细胞色素氧化酶和触酶但粪肠球菌培养于含血的培养基中，可合成细胞色素或触酶或两者皆有，因而某些菌株表现为触酶弱阳性含链球菌D群抗原。G+Cmol%为3745,第62页/共86页,生物学特性在40%胆汁培养基中能分解七叶苷，多数菌种具有吡咯,抵抗力,对头孢菌素类、林可霉素类和磺胺类抗菌药物耐药近年来获得性耐药菌株不断增多，表现为对氨基糖苷类耐药和对万古霉素耐药。对万古霉素的耐药是由van A、van B和van C等基因介导,第63页/共86页,抵抗力对头孢菌素类、林可霉素类和磺胺类抗菌药物耐药第63页/,四、微生物检验,（一）检验程序,第64页/共86页,四、微生物检验（一）检验程序 第64页/共86页,（二）标本采集,常规方法采集血、尿、创伤标本和其他拭子， 标本于1小时内接种完毕。,（三）标本直接检查,涂片染色显微镜检查可见单个、成双或短链 排列卵圆形革兰阳性球菌,第65页/共86页,（二）标本采集常规方法采集血、尿、创伤标本和其他拭子，（三）,（四）分离培养与鉴定,标本接种于含血琼脂平板若送检标本中含革兰阴性杆菌可选用选择鉴别培养基，常用的有：叠氮胆汁七叶苷琼脂，可抑制革兰阴性菌生长，而肠球菌分解七叶苷产生黑色菌落；哥伦比亚多粘菌素-萘啶酸琼脂(CAN)和苯乙基乙醇琼脂(PEA)由于耐万古霉素肠球菌发生率增高，为早期检出耐 药菌株，可使用含万古霉素琼脂筛选方法（详见第 三十五章）,第66页/共86页,（四）分离培养与鉴定标本接种于含血琼脂平板第66页/共86页,细菌鉴定方法如下,菌属的鉴定 肠球菌属细菌革兰染色阳性，卵圆形，单个、成双或短链排列。触酶阴性、胆汁七叶苷和PYR阳性、6.5% NaCl肉汤中能生长,第67页/共86页,细菌鉴定方法如下菌属的鉴定 菌属万古霉素分解葡萄糖产,肠球菌属间的菌种鉴定,根据对甘露醇，山梨醇和精氨酸的代谢分五群第一群:分解甘露醇、山梨糖产酸，不水解精氨酸第二群:分解甘露醇和水解精氨酸第三群:水解精氨酸，不分解甘露醇、山梨醇和山梨糖第四群:不分解甘露醇，山梨糖，不水解精氨酸第五群:分解甘露醇不分解山梨糖，不水解精氨酸,第68页/共86页,肠球菌属间的菌种鉴定根据对甘露醇，山梨醇和精氨酸的代谢分五群,触酶阳性的其它革兰阳性球菌,微球菌属（Micrococcus）巨球菌属(Macrococcus)动球菌属(Planococcus)考氏考克氏菌(Kocuria kristinae)触酶微弱阳性的差异球菌属(Alloiococcus)和粘性罗氏菌(Rothia mucilaginosa)这些菌属细菌在人体和动物体表广泛存在，常在临 床标本中分离到，一般认为是非致病菌。偶尔在某些免疫抑制或缺陷的患者中引起机会感染 如心内膜炎、脑膜炎、肺炎等。,第69页/共86页,触酶阳性的其它革兰阳性球菌微球菌属（Micrococcus）,微球菌属,以往曾将葡萄球菌属、微球菌属、口腔球菌属和动球菌属共同归类为微球菌科。m的球菌，常成对、四联或呈不规则排列在大多数临床标本中由于形态与葡萄球菌属相似，触酶阳性而混淆。本菌属氧化酶阳性，对杆菌肽敏感、呋喃唑酮耐药可以与葡萄球菌属区别。,第70页/共86页,微球菌属以往曾将葡萄球菌属、微球菌属、口腔球菌属和动球菌属共,差异球菌属,是需氧的革兰阳性球菌，成对或簇排列。触酶试验弱阳性，氧化酶试验阴性，常在中耳炎患者的标本中分离到。,第71页/共86页,差异球菌属是需氧的革兰阳性球菌，成对或簇排列。触酶试验弱阳性,粘性罗氏菌,是兼性厌氧菌，触酶可变的革兰阳性球菌，成簇排列，在5%NaCl琼脂上不能生长，可与葡萄球菌属、微球菌属区别。,第72页/共86页,粘性罗氏菌是兼性厌氧菌，触酶可变的革兰阳性球菌，成簇排列，在,巨球菌属,m，革兰阳性球菌，触酶、氧化酶阳性，对溶葡萄球菌素敏感。,第73页/共86页,巨球菌属m，革兰阳性球菌，触酶、氧化酶阳性，对溶葡萄球菌素,二、触酶阴性的革兰阳性球菌,临床标本中分离到的触酶阴性的革兰阳性球菌除了链球菌属和肠球菌属外，还经常分离到乳球菌属（Lactococcus）气球菌属（Aerococcus）片球菌属（Pediococcus）孪生球菌属（Gemella）白联球菌属（Leuconostoc）生活力缺损菌属（Abiotrophia）,第74页/共86页,二、触酶阴性的革兰阳性球菌临床标本中分离到的触酶阴性的革兰阳,乳球菌属,原归属于Lancefield N群链球菌BE、6.5%NaCl生长及PYR试验阳性，45 不生长可从血液、尿道及创口分泌物中分离到，在免疫缺陷患者中可引起菌血症,第75页/共86页,乳球菌属原归属于Lancefield N群链球菌第75页/共,气球菌属,为成簇四联排列，血平板上有溶血绿色气球菌（）常被认为是临床标本的污染菌，偶尔引起菌血症或心内膜炎，PYR阳性，6.5% NaCl生长，但不能在10或45生长，V-P阴性尿气球菌（）常从尿道感染的患者尿液中分离到并被认为是尿道炎的病原体，对磺胺类和氨基糖苷 类药物耐药，PYR阴性，LAP和BGUR阳性。,第76页/共86页,气球菌属为成簇四联排列，血平板上有溶血第76页/共86页,白联球菌属和片球菌属,万古霉素耐药革兰阳性、触酶阴性球菌，PYR阴性片球菌属具有Lancefield D群抗原虽有从免疫抑制患者血液中分离到的报 道，但临床意义有待进一步确认,第77页/共86页,白联球菌属和片球菌属万古霉素耐药第77页/共86页,孪生球菌属,溶血孪生球菌（）可从心内膜炎、脑膜炎患者中分离到在兔血平板上有溶血，有氧环境下生长较好。羊血平板上与草绿色链球菌相似生长缓慢的菌株容易与生活力缺损菌属混 淆，可通过“卫星”试验加以鉴别,第78页/共86页,孪生球菌属溶血孪生球菌（）第78页/共86页,生活力缺损菌属,在培养时，培养基中必须含有足够的维生素B6或硫醇衍生物才能生长。未添加维生素B6的血平板或巧克力平板营养不够，生长不良革兰染色呈现多形性，显微镜下同时可见阳性球菌及杆菌与金黄色葡萄球菌一起培养可出现“卫星”现象能发酵葡萄糖和蔗糖，不能水解七叶苷，6.5%NaCl不生长可从血液标本、脓液及胸腔积液中分离到。约有 5%6%的心内膜炎由此菌引起,第79页/共86页,生活力缺损菌属在培养时，培养基中必须含有足够的维生素B6或硫,临床意义,致病性主要与各种侵袭性酶类和多种毒素有关肠毒素引起食物中毒，表现为急性胃肠炎噬菌体II群产生的剥脱毒素（或称表皮溶解素）可引起人类烫伤样皮肤综合征多见于新生儿、幼儿和免疫功能低下的成人皮肤呈弥漫性红斑和水疱形成，继以表皮上层大量脱落由噬菌体群产生的毒性休克综合征毒素-I（Toxic shock syndrome toxin I, TSST-1）属超抗原家族，刺激T细胞诱发TNF和IL-1可致机体多个器官的功能紊乱或引起毒性休克综合征(TSS),第80页/共86页,临床意义致病性主要与各种侵袭性酶类和多种毒素有关第80页/共,（二）标本采集,根据感染的部位，采集不同的标本。该属细菌广泛分布在人体皮肤和黏膜，采取时避免病灶周围正常菌群污染。,第81页/共86页,（二）标本采集根据感染的部位，采集不同的标本。第81页/共8,传统的分类方法,溶血性链球菌A、C、G群抗原mm A群的化脓性链球菌（S. pyogenes）、C群、G群的马链球菌（）和似马链球菌（）mm具A、C、G群抗原，统称米勒链球菌（）咽喉炎链球菌、中间型链球菌和星座链球菌还有溶血和不溶血的细菌B群抗原无乳链球菌（）,第82页/共86页,传统的分类方法溶血性链球菌第82页/共86页,临床意义,无乳链球菌是新生儿菌血症和脑膜炎的常见菌该菌定居于妇女生殖道能导致新生儿感染早发型新生儿感染多发病于出生后24h，以肺炎为主晚发型为产后7天至3月内，以脑膜炎和菌血症为主B群链球菌对成人侵袭力较弱主要有肾盂肾炎、子宫内膜炎糖尿病、泌尿生殖道功能失调、肿瘤和免疫机能低下者易受B群链球菌感染,第83页/共86页,临床意义无乳链球菌是新生儿菌血症和脑膜炎的常见菌第83页/共,三、生物学特性,第84页/共86页,三、生物学特性第84页/共86页,生物学特性,在40%胆汁培养基中能分解七叶苷，多数菌种具有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR）不含细胞色素氧化酶和触酶但粪肠球菌培养于含血的培养基中，可合成细胞色素或触酶或两者皆有，因而某些菌株表现为触酶弱阳性含链球菌D群抗原。G+Cmol%为3745,第85页/共86页,生物学特性在40%胆汁培养基中能分解七叶苷，多数菌种具有吡咯,肠球菌属间的菌种鉴定,根据对甘露醇，山梨醇和精氨酸的代谢分五群第一群:分解甘露醇、山梨糖产酸，不水解精氨酸第二群:分解甘露醇和水解精氨酸第三群:水解精氨酸，不分解甘露醇、山梨醇和山梨糖第四群:不分解甘露醇，山梨糖，不水解精氨酸第五群:分解甘露醇不分解山梨糖，不水解精氨酸,第86页/共86页,肠球菌属间的菌种鉴定根据对甘露醇，山梨醇和精氨酸的代谢分五群,寄生虫全面版课件,