临床微生物检验标本采集与运送ppt课件.ppt

临床微生物检验标本采集与运送,徐州市第六人民医院检验科 许峰,“正确的微生物学检验始于正确的标本采集。临床医师、护士及检验技师都必须通晓其要领。”,著名的临床微生物检验专著Manual of Clinical Microbiology 主编 Patrick Murray,目录,DIRECTORY,痰液标本采集与运送,02,PART,血液标本采集与运送,01,PART,尿液标本采集与运送,03,PART,其它标本采集与运送,04,PART,01,PART,血液标本采集与运送,血液标本采集与运送,01,PART,（一）、血培养检测采血指征,临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的患者：发热（38）或低温（36） 、2. 寒战3. 白细胞增多（10109/L，特别有“核左移”未成熟的或杆状核白细胞增多） 4. 粒细胞减少（成熟的多核白细胞1109/L）5. 血小板减少 6皮肤粘膜出血 7昏迷、休克 8多器官衰竭 9. CRP升高在评估可疑新生儿败血症时，除发热或低烧外，很少培养出细菌，应该补充尿液和脑脊液培养。 对入院危重感染患者未进行系统性抗菌药物治疗之前，应及时采集血培养。,血液标本采集与运送,01,PART,1. 皮肤消毒程序：严格执行三步法（防止皮肤寄生菌污染） （1）用75%酒精擦拭静脉穿刺部位30秒以上，待干； （2）然后10%碘伏作用60秒，从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达3cm以上，待干； （3）最后用75%酒精脱碘，待酒精挥发干燥后采血。 新生儿及对碘过敏的患者，只能用75%酒精消毒60秒，待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血。 2. 血培养瓶消毒程序： （1）用75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞，作用60秒。 （2）用无菌纱布或无菌棉签清除橡皮塞表面剩余的酒精，然后注入血液。,（二）、血培养检测消毒程序,要求： 严格无菌操作，不允许在皮肤消毒后用手按压静脉，除非带有无菌手套。 不推荐采血和接种血培养瓶更换注射器针头，采用真空采血装置能降低污染率。说明：无论采用何种采血方法，血培养可接受的污染率通常是3%。,血液标本采集与运送,01,PART,（三）血培养标本采集和运送要求,1.采集时间要求：对怀疑菌血症、真菌血症的患者，在考虑使用抗菌药物之前，应立即采集血培养标本。必须同时或间隔短时间内采集2套以上血培养标本。说明：实验数据表明细菌入血后约1小时，寒战和发烧开始出现2小时内，此时为采集血培养标本进行病原菌培养的最佳时机。在不同的时间点采血只有在以下情况才有必要：疑似感染性心内膜炎或其他血管内（如导管相关性感染）感染患者的连续性菌血症。,血液标本采集与运送,01,PART,（三）血培养标本采集和运送要求,2.采集部位 要求：从两侧上肢静脉采血，“双瓶双侧”采血培养。必要时从下肢静脉采血做第三套血培养。 说明：不建议采集：（1）动脉血，因其诊断价值没有比静脉血更大；（2）静脉留置导管，因其常伴有高污染率。如果必须从留置导管内采血（如怀疑导管相关性感染等），也应同时从外周静脉采集另外一个血培养标本，以帮助阳性结果的判读。 所谓“双瓶双侧”，是指从一个部位采血接种一套培养瓶，再从另一部位采血接种另一套培养瓶。（通常是双臂）一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单个血培养。,血液标本采集与运送,01,PART,（三）血培养标本采集和运送要求,3. 采血量要求： 成年患者推荐的采血量为每瓶8-10ml，儿童患者推荐的采血量为每瓶1-5ml，新生儿0.5ml，但不应超过患儿总血量的1%。说明：血标本采集的量是影响检出率的最重要的因素。成人血培养采血量在230ml之间，病原菌检出率与采血量成正比例增长。每增加1ml的血液，病原菌的检出率增加3.2%。儿童患者因为血液中病原菌浓度较高，血培养量无需等同于成人。对血液病患者或者血容量相对较低的患者建议使用儿童瓶来减少血液的采集量增加病原菌的检出率。,血液标本采集与运送,01,PART,（三）血培养标本采集和运送要求,4. 采集次数要求：对怀疑菌血症、真菌血症的成人患者，推荐同时采集23套（不同部位）血培养标本。（即双瓶双臂同时采集血培养标本）。婴幼儿患者，推荐同时采集2次（不同部位）血培养标本。说明：在采集血培养后的2-5天内，无需重复采集血培养。只有在怀疑感染性心内膜炎或其它血管内感染（如导管相关性感染）时，才有必要间隔多次采集血培养。,5. 运送要求要求：（1）采集后的血培养瓶应立即送往实验室，室温放置不要超过2小时。 （2）血培养瓶在接种前和接种后均不得冷藏和冷冻。说明：血培养瓶冷藏或冷冻会将一些微生物杀灭，将装着液体的容器冰冻也会使容器破裂。,02,PART,痰液标本采集与运送,痰液标本采集与运送,02,PART,（一）、痰液检测采集指征,1. 凡是发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性，并伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音，外周白细胞总数及中性粒细胞比例明显增高，X线检查提示肺部有炎性浸润或胸腔积液，甚至出现感染性休克和呼吸衰竭等患者，应采集痰液或下呼吸道标本。2.对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）患者采集检验标本时必须注意生物安全防护。,痰液标本采集与运送,02,PART,（二）、采集方法,自然咳痰法 以清晨第一口痰为好。用清水反复漱口后，用力咳出呼吸道深部的痰（或可轻拍背部），直接置于无菌容器中（采集量1ml），尽快送检。痰量极少或痰浓不易咳出者者可用4510%氯化钠液雾化吸入导痰。不能及时送检的标本，室温保存2小时。要求采到肺深部的痰液，切勿混入唾液及鼻咽分泌物。, 在抗生素应用前采集痰标本; 标本采集后12h内必须立即进行实验室处理； 取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口; 深咳，采集标本过程中要有专业的医务人员指导; 对于细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续23天；不建议24小时内多次采集，除非痰液外观性状改变； 怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰液送检。,痰液标本采集与运送,02,PART,（二）、采集方法,2. 小儿取痰法 用弯压舌板向后压舌，用棉拭子深入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部和气管分泌物，粘在棉拭子上送检。幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。3. 支气管镜采集法 -经支气管镜直接吸引 -支气管肺泡灌洗 -防污染样本毛刷,痰液标本采集与运送,02,PART,（三）、注意事项,1. 痰标本不能及时送检者，可暂存4冰箱。室温下耽搁数小时，定植于口咽部的非致病菌过度生长而肺炎链球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率则明显降低。2. 在临床上咳痰仍是诊断肺部感染最常用的标本，但咳痰也最易被口咽部正常菌群污染。痰液标本的细菌学检验，必须区分是病原菌还是来自上呼吸道的正常菌群。经过洗涤处理的痰液或自气管镜采集及气管穿刺所获标本，结果比较可靠。3. 由于口腔和咽部存在大量的革兰阳性和革兰阴性厌氧细菌，而且缺乏可靠的方法区分它们究竟是致病菌还是定植菌，因此不主张对痰液标本进行厌氧菌培养。4. 约有1/41/2肺部感染患者可能发生菌血症，建议同时做血培养。,03,PART,尿液标本采集与运送,尿液标本采集与运送,03,PART,（一）、尿培养标本送检指征,1. 有典型的尿路感染症状； 2. 有肉眼脓尿或血尿；3. 尿常规检查白细胞或亚硝酸盐阳性；4. 有不明原因的发热，无其他局部症状；5. 留置导尿管的患者出现发热；6. 膀胱排空功能受损； 7. 泌尿系统疾病手术前；8. 有尿路感染症状者，前次培养结果阴性或抗菌治疗48h后仍持续发热。9. 抗生素停药后，感染症状再次出现。,尿液标本采集与运送,03,PART,（二）、采集方法,标本采集应在使用抗生素之前，避免消毒剂污染标本。1清洁中段尿 留取清晨清洁中段尿标本，先用肥皂水仔细清洗会阴部及尿道口周围，再用清水冲洗；将前段尿弃去，留取中段尿10ml左右于无菌容器内，立即加盖送检，2h内接种。该方法简单、易行，是最常用的尿标本收集方法。,2. 直接导尿 按常规方法对会阴局部进行消毒后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，获取膀胱尿液，可减少尿液标本污染，准确地反映膀胱感染情况。但有可能下尿道细菌进入膀胱，导致继发感染，一般不提倡使用。,尿液标本采集与运送,03,PART,（二）、采集方法,3耻骨上膀胱穿刺 无菌操作，无菌取尿，使用无菌注射器直接从耻骨上经皮肤消毒穿入膀胱吸取尿液，是评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法，主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿尿标本的采集。4小儿收集包 无自控能力的小儿可用收集包收集尿液，这种装置由于很难避免会阴部菌群污染产生假阳性，所以只有在检验结果为阴性时才有意义。如果检验结果为阳性，应结合临床进行分析，必要时可使用膀胱上穿刺或导尿法留取标本进行复检。5留置导尿管收集尿液 用导尿管导取10-15ml尿液置灭菌容器内送检。长期留置导尿管者，应在更换新导尿管后留取尿标本。留置导尿患者应消毒导尿管外部及尿管口，采取无菌操作方法，用注射器通过导尿管吸取尿液。注意防止混入消毒剂，不能从尿液收集袋中采集尿液。,尿液标本采集与运送,03,PART,（三）、采集时间和标本运送,1.应选择在抗菌药物应用前或停用抗菌药物5天后采集尿液。2.通常采集清晨第1次尿液送检，确保尿液在膀胱内停留4小时以上，使细菌有足够时间繁殖，可以降低培养结果的假阴性率。嘱患者睡前少饮水，以免尿液稀释导致尿菌计数偏低。3.怀疑沙门菌感染时应在发病2周左右采集尿液培养。4.对无症状的患者应连续采集3天晨尿送检。5.怀疑结核分枝杆菌感染时，患者应停药1-2天后采集晨尿或24h尿的沉渣部分10-15ml送检。6. 标本采集后应立即送检、及时接种，室温下保存时间不得超过2小时（夏季保存时间应适当缩短或冷藏保存），冷藏保存标本不得超过24小时，且必须在6小时内进行接种，但冷藏保存的标本不能用于淋病奈瑟菌培养。,04,PART,其它标本采集与运送,其它标本采集与运送,04,PART,一、脑脊液标本采集与运送,1. 采集时间 怀疑为脑膜炎的病人，在使用抗生素前应立即采集脑脊液进行培养。,3. 采集量 细菌培养1ml，真菌培养2ml，抗酸杆菌培养2ml。,4. 注意事项 标本采集后应在常温下立即送检（15分钟内），以防细菌死亡。 疑似脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等苛养菌时，应注意保温（35），切勿置于冰箱保存。,2. 采集方法 病人应先禁食，由临床医师采用腰椎穿刺术无菌采集：用碘伏对穿刺部位（成人为第3、4腰椎间隙，小儿为第4、5腰椎间隙）进行局部皮肤消毒，插入带有管芯针的空针，进针至蛛网膜间隙，拔去管芯针，收集脑脊液置于无菌螺旋盖管中送检。,其它标本采集与运送,04,PART,二、体液（穿刺液）标本采集与运送,1. 采集时间 使用抗生素前，停止用药1-2天或以后，或下次用药前，或选择血药浓度较低时抽取。,2. 采集方法 用碘伏充分消毒皮肤，无菌操作用注射器以外科手术方法抽取或引流体内可疑感染部位的液体（胸水、腹水、胆汁、心包液、关节液、鞘膜液等），将取得的穿刺液以无菌操作直接注入血培养瓶内或无菌螺旋管中送检。,3. 采集量 细菌培养1ml，真菌培养10ml，抗酸杆菌培养10ml。,4. 注意事项 标本采集后应在常温下立即送检（15分钟内），4下保存24小时。 尽量以标本的原始状态送检，不要用拭子送检，也不要将拭子浸入液体标本中运送。,其它标本采集与运送,04,PART,三、化脓和创伤标本采集与运送,1. 采集时间 使用抗生素前，停止用药1-2天或以后，或下次用药前，或选择血药浓度较低时抽取。,2. 采集方法 用无菌生理盐水或75%乙醇擦拭病灶表面去除表面渗出物，组织或液体优于拭子；若必须使用拭子，应采集两份，一份用于培养，一份用于革兰染色。 开放性脓肿：尽可能抽取脓液置于无菌试管内，或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样，从脓肿底部或脓肿壁取样，效果最好。 封闭性脓肿：无菌操作，局部消毒后用针及注射器抽取脓液1ml，将脓液置于无菌试管内送检。,3. 注意事项 标本采集后应在常温下2小时内送检，保存24小时。,其它标本采集与运送,04,PART,四、粪便标本采集与运送,1. 采集时间 腹泻病人在急性期用药前采集。 沙门菌感染的肠热症患者在2周以后采样。 胃肠炎病人在急性期采集新鲜粪便，也就是在腹部痉挛发病6小时内采集脓血或液状便。,2. 采集方法 自然排便法：自然排便后，挑取有脓血、黏液部分的新鲜粪便2-3g，液体粪便取2-3ml，直接置于无菌容器内送检。 直肠拭子法：用生理盐水湿润后的无菌拭子插入肛门4-5cm（幼儿2-3cm），柔和地旋转拭子采集粪便，插入无菌管内立即送检。,3. 注意事项 除婴幼儿患者外，不推荐用拭子做常规病原菌培养；患者不能自行采集直肠拭子。 标本需1小时内送检，且标本不能混入尿液、消毒剂及其它化学药品。 建议连续3天，每天采集3次标本进行粪便微生物培养。,其它标本采集与运送,04,PART,五、生殖道标本采集与运送,1. 采集时间 使用抗生素前，停止用药1-2天或以后，或下次用药前，或选择血药浓度较低时抽取。,2. 采集方法 生殖道病变种类繁多，根据不同的病变特征和检测目的采集不同的标本： 阴道、子宫颈及前列腺等分泌物应由医师采集，严格无菌操作，女性可用双套管法留取标本，以减少杂菌污染。 尿道分泌物 女性尿道：患者排尿1小时后采集，首先拭去尿道口的渗出物；再用拭子通过阴道，靠着耻骨联合，按摩尿道，采集分泌物；如未获得分泌物，清洗外尿道，用灭菌纱布或棉球擦拭，用泌尿生殖道拭子插入尿道24cm，旋转拭子2秒。 男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔24cm，旋转拭子，至少停留20秒，使之容易吸收。 阴道分泌物：擦除过多的分泌物和排出液，用无菌棉拭子采取阴道口内4厘米内侧壁或后穹窿处分泌物，如果需要涂片，需再用一个拭子。 男性前列腺：用前列腺按摩法采集前列腺液。清洗尿道口，冲洗尿道膀胱，从肛门用手指按摩前列腺，使前列腺液溢出，用无菌容器收集。无肉眼可见脓液时，可用灭菌拭子轻轻伸入前尿道内，旋转拭子采集标本。,其它标本采集与运送,04,PART,五、生殖道标本采集与运送,3. 注意事项 生殖器是开放性器官，标本采集过程中应严格遵循无菌操作规程以减少杂菌污染。 由于阴道正常菌群的存在而使细菌的分离鉴定受到干扰，所以在采集女性生殖道标本时应注意尽量减少或避免正常菌群的污染。 疑有宫腔感染，如遇产妇需行剖宫产，待胎儿娩出后取宫腔分泌物，并同时取婴儿耳拭子一同送检。 淋病奈瑟菌检查时，取材的深度一定要够，因为淋球菌好发于柱状上皮细胞而不是复层鳞状上皮细胞。不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入尿道及子宫颈3cm深转动并停留10-30秒取样送检。 生殖道标本应在室温下2小时内送检；淋病奈瑟菌抵抗力低，对外界环境变化颇为敏感，对寒冷和干燥抵抗力很弱，并且有自溶性，因此，为了保证培养有足够的成功率，取材后要立即送检，运送时注意保温，接收后应立即接种，标本离体时间越短越好。,革兰染色涂片镜检下的淋病奈瑟菌,其它标本采集与运送,04,PART,六、医院环境卫生（院感）监测标本采集与运送,采集方法1. 空气标本：在消毒处理后、进行医疗活动前进行采样。采用沉降法采样：当室内面积30m2，设内、中、外一条对角线取3点，即中心1点，内、外布点部位距墙壁1m处；当室内面积30m2，设四角及中央5点，四角的布点部位均距墙壁1m处。采样时将普通营养琼脂平板（直径9cm）放置在室内各采样点处，采样高度为距地面80-150cm。采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露5分钟，盖上平板盖及时送检。注意：采样前关好门、窗，在无人走动的情况下，静止10分钟进行采样。,三点采样,五点采样,其它标本采集与运送,04,PART,六、医院环境卫生（院感）监测标本采集与运送,2. 物体表面标本：在消毒处理后4小时内进行采样。被采样物体面积100cm2，应取全部物体表面；物体面积100cm2，则取100cm2。用5cm5cm的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦5次，并随之转动棉拭子，连续采样4个规格板面积，然后剪去或折去采样人手接触部位，将棉拭子投入装有10ml无菌检验用洗脱液的试管内送检。门把手、键盘、水龙头等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦物体表面采样。,其它标本采集与运送,04,PART,六、医院环境卫生（院感）监测标本采集与运送,3. 手和皮肤、黏膜标本：一般要求在接触病人、从事医疗、护理活动前进行采样。手的采样：被检人五指并拢，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子1支，在双手指屈面从指根到指端往返涂擦各2次（一只手涂擦面积约为30cm2），并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入10ml含相应中和剂的采样液试管内送检。皮肤粘膜采样：用5cm5cm的标准灭菌规格板，放在被检皮肤处，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦5次，并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。不规则的皮肤黏膜用棉拭子直接涂擦采样。皮肤黏膜采样处，若表面不足5cm5cm可用相应面积的规格板采样。,其它标本采集与运送,04,PART,六、医院环境卫生（院感）监测标本采集与运送,4. 内镜标本：在消毒后使用前进行进行采样。用无菌注射器抽取50ml含相应中和剂的洗脱液，从待检内镜活检口注入冲洗内镜管路，并全量无菌收集，立即送检。,5. 透析标本：在透析用水和透析液制作好后即将进行透析前采样。用无菌注射器吸取透析用水或透析液2-5ml，放入无菌管中送检。,6. 使用中的消毒剂及灭菌剂标本： 采取更换前、使用中的消毒剂与灭菌剂。在无菌条件下，用无菌注射器抽吸1ml被检液加入9ml含相应中和剂的稀释液中混匀送检。 监测频率：消毒剂每季度监测一次；灭菌剂每月监测一次。 注意事项：采样后4小时内检测。,感谢聆听！,