猪蓝耳病讲课材料分析课件.ppt
猪高致病性蓝耳病免疫效果评估河北省动物疫病预防控制中心2011年3月29日,主要内容,蓝耳病简介蓝耳病目前流行情况疫苗应用情况疫苗免疫策略及免疫评估ELISA实验介绍,蓝耳病 是由PRRSV引起的，以母猪繁殖障碍、早产、流产、死胎、木乃伊胎及仔猪呼吸综合征为特征的高度接触性传染病。高致病性蓝耳病 是由PRRSV变异株引起高度接触性、出血性、致死性传染病。特征是仔猪发病率可达100%、死亡率可达50%以上，母猪流产率可达30%以上。2008年新修订的一、二、三类动物疫病病种名录将其列为一类动物疫病。,蓝耳病（PRRS）简介,病 原,PRRSV 动脉炎病毒科动脉炎病毒属RNA病毒,图1. PRRSV病毒粒子结构示意图（结构蛋白）（引自The role of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus structural and non-structural proteins in virus pathogenesis. Anim Health Res Rev, 2010: p. 1-29）,主要蛋白的作用,结构蛋白 N蛋白是碱性磷酸蛋白；免疫原性最强，抗原域高度保守，感染PRRSV后N蛋白最早出现体液免疫应答，约为1周左右。但N蛋白抗体无中和作用。M蛋白是非糖基化蛋白；为跨膜蛋白，抗原域高度保守。也是感染PRRSV后出现免疫应答的主要抗原。gp5蛋白为囊膜糖蛋白，是PRRSV变异最大的结构蛋白之一。是病毒主要的免疫原性蛋白，具有病毒中和作用和机体保护作用。,主要蛋白的作用,非结构蛋白Nsp1、Nsp1、Nsp2Nsp8、Nsp9Nsp12。高致病性PRRSV（如JXA1株）在Nsp2区存在特异的30多个氨基酸缺失。因此可作为PRRSV变异的独特标记。,蓝耳病病毒分型,A.美洲型（NA-PRRSV） 1992年美国分离VR2332株 1996年北京分离BJ-4株和Ch-1a株 1997年美国分离JA-142株 2001年美国分离MN184B株 2006年 江西分离NVDC-JXA1株,B.欧洲型(EU-PEESV)1991年荷兰分离LV株2006年北京分离BJEU06-12006年立陶宛分离Eigir株2007年白俄罗斯分离Lena株,致病机理,PRRSV 猪 巨噬细胞中复制 淋巴器官及肺脏 肾脏、脑（JXA1）感染24h后，血液中病毒滴度迅速增加，造成病毒血症。7-14天在血清、淋巴结和肺脏中病毒滴度达到最大峰值。病猪主要通过呼吸道和消化道排毒。飞沫、唾液、粪便、血液和乳及精液均能检测到病毒。其中粪便是高致病性PRRSV的重要排毒途径之一。,蓝耳病（PRRS）流行现状,全球流行状况A.原因：引种、动物及其产品国际贸易、免疫接种。 据OIE疫情统计数据表明，PRRSV已蔓延全球大多数养猪国家。未发现的地区有新西兰及澳大利亚，阿曼和伊朗（不消费猪相关产品）。B.亚型分布情况美洲型分布范围大于欧洲型，前者主要分布于美洲和亚洲，后者主要集中于欧洲。新型变异株分布范围小于经典亚型。,2009年PRRSV全球分布图（OIE数据）,蓝耳病（PRRS）全球流行现状,高致病性猪蓝耳病（NA4型）全球分布图,蓝耳病（PRRS）流行现状,国内流行状况A.起源1995年 北京和广东引种。年末北京及周边地区大规模爆发PRRS。1996年分离PRRSV。B.流行状况经典PRRSV全国性分布。高致病性PRRSV爆发流行，除西藏外，其他省份均有分布。欧洲型目前仅发现于北京和内蒙。流行毒株多且毒株变异迅速。,国内PRRS疫苗使用情况,各国疫苗免疫策略,不免疫(瑞典、智利)灭活苗（英国）活苗（美国、中国等）中国的免疫策略：从争议到趋向统一强制免疫JXA1-R株,抗体监测免疫荧光实验（IFA）免疫过氧化物酶单层分析法（IPMA）中和实验（SN）感染后12个月产生。酶联免疫吸附试验（ELISA）免疫胶体金技术 效果有待评估,蓝耳病的抗体监测与免疫评估,ELISA特点,特异性强、敏感性高可进行批量样品的检测操作简便、节省时间结果客观准确安全性高,ELISA试剂盒的选用1、以核衣壳蛋白（N蛋白）作为主要包被抗原的PRRSV抗体间接ELISA检测试剂盒2、以GP蛋白作为包被抗原的PRRSV抗体间接ELISA检测试剂盒,蓝耳病的抗体监测与免疫评估,检测GP蛋白抗体？,有效！,检测N蛋白抗体？,包被不同蛋白试剂盒之间的区别,法国LSI蓝耳病抗体试剂盒特异性研究,选择2组母猪，各18头，gp抗体、N蛋白抗体与SN的相关性,包被不同蛋白的区别,试剂盒的选择,N 蛋白不能诱导产生病毒中和抗体，因此以N 蛋白作为包被抗原的ELISA 试剂盒无法反应机体的免疫状态，不适合用于对疫苗免疫效果监测。GP蛋白包被的试剂盒与其他检测中和抗体的方法，如IFA、IPMA 有很好的相关性。适合用于疫苗免疫效果的评估。,ELISA基本原理,以免疫学反应为基础，通过抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。,间接法,样品稀释方式: 1/200两步稀释：5 L 样品加入到 95 L 样品稀释液中（在稀释板中）混匀；取 5 L 已稀释好的样品加入 45 L 样品稀释液中（在包被板中）混匀。,孵育 60 min to 37C,孵育 60 min to 37C,操作步骤:,法国LSI蓝耳病抗体试剂盒介绍,试验有效性和判定 : ODm PC 0.600(ODm PC / ODm NC ) 4 判定标准 : IRPC = (ODm450S - ODm450 NC)/(ODm450 PC- ODm450 NC) x 100,法国LSI蓝耳病抗体试剂盒介绍,建立合理的免疫程序了解引进的猪只MDA的均一度阴性猪的筛选提示有野毒感染,蓝耳病抗体检测的意义,小结,病原检测-是否有野毒感染PCR检测-通用性-高致病性变异株-疫苗株,抗体监测-免疫评估GP蛋白ELISA试剂盒,谢谢大家！感谢北京天之泰生物科技有限公司提供材料。,
