浮游菌及表面菌检测课件.ppt

浮游菌（Airborne Microbe）,讲解目录,工作流程,备料单,1,2,3,4,5,6,此处添加目录标题,7,菌落计数,洁净室污染源,浮游菌,表面菌,培养基成分,接受指令,结果观察、记录,填写记录写报告,采样,菌落计数,恒温箱培养,制作平板,灭菌,备料,制定计划,查阅依据,工作流程,备料单,平皿 2套消毒剂(75%酒精)采样仪棉花镊子大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)1520ml/皿X2,污染物种类,通常所指的空气污染物主要有以下三类 悬浮在空气中的固态、液态微粒 霉菌、致病菌等悬浮在空气中的微生物；各种对人体或生产过程有害的气体。由于空气净化的目的与对象不同，净化的内容、方法和衡量标准也不同。以洁净室为对象的空气净化的目的，就是最大可能地把空气介质中的悬浮微粒除掉，对于生物洁净室，还要控制有生命微粒。,2.2 污染物传播途径,危害生产工艺的主要污染源主要有： 人员；送风；机器及其他生产设备；原材料与经过加工的原材料；包装材料；生产工艺用各种介质及洁净用化学品；服装与其他设备中的纺织物；办公设备与办公材料；参观人员；维修人员，特别是那些来自洁净区外部的人员。与产品接触的污染物有两种来源生产工艺之内产生；从外部环境传入生产环境之中。,污染源,洁净室污染源 新风带入的尘粒和微生物；作业人员发尘和散菌；建筑围护结构、设施的产尘；设备及产品生产过程的产尘。,室内空气的主要污染物质,人体各部位的带菌数,着无菌服时的人体散发细菌量,GB/T 162931996 洁净室（区）clean room (area) 对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介质、产生和滞留的功能。洁净室的定义洁净室是指空气洁净度达到规定级别的可供工作的空间。其功能是控制各种微粒（主要是尘埃粒子）的污染，来达到满足精密产品的生产与科学实验活动。洁净室绝不是仅限于“洁净”，不同的行业与部门对温度、湿度、照明、噪声、静电、微振都有相当要求，是集建筑装饰（与大气相对隔断的密闭装修）、净化空调、动力电、照明电、工艺管道等多种专业技术于一体的多功能的综合整体产物.,浮游菌（Airborne Microbe）,悬浮在空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。,本标准规定了医药工业洁净室和洁净区中浮游菌测试条件、测试方法。本标准适用于医药工业洁净室和洁净区，无菌室或无菌区域（包括洁净工作台）的浮游菌的测定和环境的验证。,参考标准：,2.4 洁净室分类,2.4.1 按用途分类 工业洁净室；生物洁净室一般生物洁净室；生物安全洁净室。2.4.2 按气流流型分类 单向气流洁净室；非单向流洁净室；混合流洁净室；辐（矢）流洁净室。,采样器原理撞击法 impacting method撞击式空气微生物采样器采样，通过抽气动力作用，使空气通过狭缝或小孔而产生高速气流，从而使悬浮在空气中的带菌粒子撞击到琼脂平板上，经 35 ，48 h培养后，计算每立方米空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。,最小采样量,采样点的位置,采样点位置可以同悬浮粒子测试点。工作区测点位置离地0.81.5m左右（略高于工作面）。送风口测点位置离开送风面30cm左右。可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。采样注意事项对于单向流或送风口，采样器采样管口朝向应正对气流方向；对于非单向流，采样管口向上。布置采样点时，至少应离开尘粒较集中的回风口1m以上采样时，测试人员应站在采样口的下风侧,并尽量少走动采取一切措施防止采样过程的污染和其他可能对样本的污染。,采样点布置,台,台,台,阴性对照,台,采样超净台,每个测点的浮游菌平均浓度的计算,浮游菌平均浓度（个/m）=菌落数/采样量示例1：某测点采样量为400L,菌落数为1，则：浮游菌平局浓度=1/0.4=2.5个/m示例2：某测点采样量为2m，菌落数为3，则：浮游菌平局浓度=3/2=1.5个/m,测试规则,测试条件在测试之前，要对洁净室（区）相关参数进行预先测试，这类测试将会提供悬浮粒子的环境条件，例如：这种预先测试可包括：温度和相对湿度的测试，洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时），温度在1826，相对湿度在45%65%为宜室内送风量或风速的测试，或压差的测试高效过滤器的泄漏测试,GB/T 162931996 单向流unidirectional air flow（曾称为层流laminar flow）沿着平行流线，以单一通路以一定流速向单一方向流动的气流。,GB/T 1629319963.9 非单向流nonunidirectional air flow（曾称为乱流turbulent flow） 具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流。,大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）,酪蛋白胰酶消化物 15g 提供氮源、维生素和生长因子大豆粉木瓜蛋白酶消化物 5g 提供氮源、维生素和生长因子氯化钠 5g 调节渗透压琼脂 15g 凝固剂纯化水 1000mL,3035,48h,测试步骤,测试前仪器、培养皿表面必须严格消毒。采样器进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，用于100级洁净室的采样器宜一直放在被测房间内。用消毒剂擦净培养皿的外表面。 采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面，采样结束，再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。 采样口及采样管，使用前必须高温灭菌。如用消毒剂对采样管的外壁及内壁进行消毒时，应将管中的残留液倒掉并晾干。采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。 狭缝式采样器的采样程序仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并调好流量、转盘转速。 关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样器缝隙高度。置采样口于采样点后，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样量设定采样时间。,沉降菌和浮游菌的区别是什么？只是捕捉时的形态差异。沉降菌指落在地面或物体表面的灰尘中携带的细菌；浮游菌指在空气中漂浮的尘埃所携带的细菌 。见相关国家标准沉降菌 GB/T 16294-2010浮游菌 GB/T 16293-2010,表面菌,附在人体表皮或设备表面的微生物,接受指令,结果观察、记录,填写记录写报告,采样与制作平板,菌落计数,恒温箱培养,实验准备,灭菌,备料,制定计划,查阅依据,工作流程,查阅依据：,表面微生物,微 生 物 在表面附着的程度受表面特性、微生物自身和存在的其他材料(如润滑剂)的影响。污染源也会影响到附着程度。为获取微生物，所进行的处理包括漂洗(同时施以物理力)或直接表面取样。表面活性剂可以用于提高回收，但应认识到，较高浓度的表面活性剂可能会抑制微生物在 相 当 一部分材料中，有些微生物可能以生物膜的形式出现，在生物膜的结构中，微生物在牢固附着于材料表面上的被囊状包围。生物膜状微生物可能会表现更强的抗灭菌性,采样方法：袋蠕动超声洗脱搅动(带或不带玻琅珠)涡旋式混合 冲洗搅切(碎解)擦拭一步到位型接触板 、 琼脂覆盖,擦拭含有可吸收取样材料的棉拭子通常被固定于杆或把手上。样品材料是不是可溶性的都行。通常的使用方法是用缓冲液或液体培养基湿润棉拭，用棉拭擦拭界定好的取样表面。在有些情况下，可以先湿润样品表面，然后用干棉拭擦拭，这样可以提高回收效率。随后将棉拭放至缓冲溶液或液体培养基中，并搅动以从棉拭上取下微生物。另外，有时也可用可溶性棉拭，使棉拭溶解于缓冲液或液体培养基中。则用过滤、平板计数或其他方法分析所得到的悬液,擦拭 是 从不规则形状产品或相对难以接近的区域取样的有效方法，该方法对取样面积必须大时也有效但 该 方 法因擦拭方式的不同而更易出错。而且，通过擦拭不太可能将样品上所有的微生物都收集到。有些微生物可能会被棉拭本身吸附，从而不会被测到。棉 拭 中 不应有微生物杀灭剂或微生物抑制剂,在 生 物 负载估计过程中，洗脱液可用于从产品上取下微生物;传送培养基可用于将取下的微生物移去计数;稀释液可用于获得含有可计数微生物的悬液。洗 脱 液 和稀释液的特性对所用方法的效率有显著影响。在选择稀释液或洗提液时，应注意它们的成分(如组成、浓度、渗透性和pH) 这些成分不应使微生物增殖或失活当 用 液 体从固体表面取下微生物时，可考虑使用表面活化剂。,洗脱液、稀释液和转送培养墓,洗脱液的稀释液示例,阴性对照,生理盐水,生理盐水,擦拭采样,25cm2,101,102,103,3035722小时,用灭过菌的镊子沾湿棉球,把棉球放入试管内，摇匀（洗脱）,1ml,1ml,备料单,镊子 1个 平皿 7套棉球 2个 试管 4支刻度吸管 1ml 2支大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)1520ml/皿X70.9生理盐水 10ml/支 x4,Thank You !,