产气肠杆菌课件.ppt

第七章 肠杆菌科,第一节 概述 肠杆菌科包括24个与医学有关的菌属, G+Cmol39-59。1. 四类引起人类腹泻和肠道感染的细菌：埃 希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌 属。 酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源 菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登 菌属和摩根菌属；,3. 其中鼠疫耶尔森菌、伤寒沙门菌对 人致病性较强。此外，许多细菌既 是正常菌群，也是条件致病菌。在 机体抵抗力下降，寄居部位的改变 或菌群失调时能引起机会感染。,二、临床意义 占临床分离菌总数的50和-总数的 80, 将近50的败血症70以上的泌尿 道感染和大量的肠道感染是由肠杆菌科 细菌引起的。 1. 人类肠道外感染 除志贺菌较少引起肠外 感染，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产 酸克雷伯菌、奇异变形杆菌、产气肠杆 菌、阴沟肠杆菌、粘质沙雷菌等均可引 起泌尿道、呼吸道、伤口和中枢神经系 统的感染;,且往往为医院感染。鼠疫耶尔森菌可 引起烈性传染病鼠疫。2. 人类肠道感染 埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属和耶 尔森菌属。主要引起各种急、慢性肠 道感染、食物中毒、旅行者腹泻及肠 热症等。,三、共同特性 (1) 1. 形态结构 -杆状或球杆状、无芽孢、多数有鞭 毛，能运动。致病性菌株有菌毛。 2. 抗原成分 抗原是细胞壁成分脂多糖。以核 心多糖为中心的三层结构，内侧是脂类 A, 为内毒素的毒性成分。外侧是由重复 的特异多糖，决定抗原的特异性。, H抗原是不耐热的蛋白质抗原，氨基酸 序列和空间构型决定H抗原的特异性。 表面抗原是包绕在抗原外侧的多糖抗 原，由多糖结构决定抗原特异性。大肠 埃希菌称K抗原、伤寒沙门菌称Vi抗原 和志贺菌称B抗原等。 O抗原和H抗原是肠杆菌科血清学分 群和分型的依据。表面抗原存在时可阻 断。抗原与相应抗体之间的反应，加热 处理能消除表面抗原的阻断作用。,共同特性 (2) 3. 变异性 S-R变异是初次分离的细菌，菌体 抗原上都有特异性多糖链，菌落为光滑 型。在人工培养基中反复传代时，细胞 壁上特异性多糖链消失而核心多糖仍保 留，菌落变为粗糙型。 H-O变异是有鞭毛的细菌, 失去鞭 毛，动力也随之消失，称H-O变异, 有 时见于新分离的菌株中。,4. 培养和生化特性 营养要求不高，在普通培养基上生长 良好；兼性厌氧，主要生化特性包括发 酵葡萄糖(产酸或产酸产气)，触酶阳性, 氧化酶阴性，可将硝酸盐还原至亚硝酸 盐。5. 抵抗力 抵抗力不强，加热6030min即被杀 死，不耐干燥，对一般化学消毒剂均敏 感。对低温有耐受力。能耐胆盐，能抵 抗染料的抑菌作用。,四、微生物检验 1. 标本采集 肠外标本:采自不同的感染部位如血液 、体液、呼吸道、伤口、尿液及其他各 种标本。 肠道标本:疾病早期留取新鲜粪便，挑 取粘液脓血部分进行培养。应在2h内进 行，以利志贺菌等检出。如不能及时培 养应冷藏待检。 2. 直接镜检 -杆菌，形态及染色性无鉴别 意义。,3分离培养鉴定 (1) 肠外标本:采自无菌部位的标本用血 琼脂，血培养时可用肉汤增菌。其他 标本中含有杂菌，需用选择性培养基 以增加分离率，常用伊红美蓝(EMB) 琼脂，因为EMB能促进肠杆菌科细 菌生长并抑制其他-菌。,(2) 肠道标本：常用的选择鉴别培养基(如EMB)和针对沙门菌和志贺菌的强选择鉴别培养基，(如SS琼脂)。如疑耶尔森菌感染可用耶尔森菌选择琼脂(CIN)。,肠杆菌科细菌鉴定1) 常规生化鉴定:为实验室最常用的方 法。各菌属(种)主要生化特性有助 于鉴定细菌。2) 鉴定试剂盒:选用标准化和商品化的 微生物鉴定试剂盒，特点是质量可 靠稳定鉴定能力强，并与编码技术 结合，可用仪器读取结果，实现自 动化，并提高了工作效率。,3) 血清学鉴定：用特异性抗血清进 行血清学分型鉴定后才能作出最 终报告。4) 分子生物学鉴定：可鉴定至科、 属 、种、血清型和肠毒素基因 等。甚 至可区分致病菌株和非 致病菌株。,耐药性问题日趋严重。粘质沙雷菌对青霉素G等抗生素天然耐药，而大多数是形成的获得性耐药。有染色体或质粒介导的超广谱-内酰胺酶或AmpC酶而产生的耐药性。已出现了耐多种抗菌药物的多重耐药菌株，因此必须根据抗菌药物敏感试验选用抗生素，并作好耐药性监控工作。同时细菌的耐药谱还可成为医院感染流行病学调查中的标志。,(五) 抗菌药物敏感试验,一、分 类 埃希菌属包括5个种： 大肠埃希菌是肠道中G-杆菌的主要 成员， 常引起肠内外的感染，是腹 泻和泌尿道感染的主要病原菌。 蟑螂埃希菌偶而检出并有潜在的致 病性。,第二节 埃希菌属, 弗格森埃希菌； 赫尔曼埃希菌； 伤口埃希菌。 最近还发现称为不脱胺凝聚埃 希菌 G+Cmol为 4852。,二、临床意义 1. 致病因素 侵袭力 K抗原能抗吞噬，并有抵抗抗体和 补体的作用。菌毛能帮助细菌粘附于 粘膜表面称定殖因子，能使细菌定殖 产生毒素而引起相应的症状，直接侵 犯粘膜引起炎症。, 内毒素 具有发热、休克、DIC等病理作用。 肠毒素 产生不耐热和耐热肠毒素两种肠 毒素：均可使肠道细胞中cAMP 的水平升高，引起肠液大量分泌 而导致腹泻。,二、临床意义 2. 所致疾病 肠道外感染 是临床分离的G-杆菌中最常见的 菌种，可引起泌尿系等各种类型的感染。 引起泌尿系感染的菌株以血清型01、 2、6为多见，本菌还可引起菌血症、 胆囊炎、肺炎及新生儿脑膜炎等。 常 见于腹腔内脓肿、肠穿孔继发腹膜炎、 肠道手术后继发感染或大面积灼伤创面 感染。,有时与类杆菌、粪肠球菌混合感染。产 生的脓液粘稠，有粪臭味。该菌对一般 抗生素敏感，易产生超广谱-内酰胺酶，而导致对第三代头孢菌素耐药。 肠道内感染 其中有些菌株能引起轻微腹泻至霍乱 样严重腹泻，并能引起致死性并发症如 溶血性尿毒综合征。,(1) 肠毒素型大肠埃希菌(ETEC)： 引起儿童腹泻和旅行者腹泻，类似轻型 霍乱样腹泻。该菌产生耐热肠毒素(ST) 和不耐热肠毒素(LT)。(2) 肠致病性大肠埃希菌(EPEC)： 引起婴幼儿肠道感染, 血清型是055、 0111等, 是婴儿腹泻的重要病原菌。(3) 肠侵袭型大肠埃希菌(EIEC)： 类似于志贺菌，侵犯肠粘膜细胞，引起 菌痢样症状，出现脓血粘液便。,引起肠道感染的大肠埃希菌,(4) 肠出血型大肠埃希菌(EHEC)，多为食 源性感染，通过粪-口途径传播。致病 因子是菌毛和Vero毒素，血清型是0157 ：H7，可引起出血性结肠炎，有2 7发展成溶血性尿毒综合征，出现溶 血性贫血，血小板减少性紫癜和急性肾 衰竭，死亡率为310。(5) 肠凝聚型大肠埃希菌(EaggEC)：代表 一群不产生LT或ST，不能用O：H血清 分型，可粘附于Hep-2细胞的菌株。与 世界各地慢性腹泻有关。,三、微生物特性 1. 形态结构 G-直短杆状， 大小为1.01.5m， 多数有鞭毛能运动， 引起肠外感染的菌株有荚膜(微 荚膜)和周身菌毛。,2. 抗原成分 O抗原是多糖磷脂复合物(LPS)，耐 热加热100不能灭活，已有171种 是血清学分型的基础。 H抗原是不耐热的蛋白质，已知有56 种，均为单相菌株。 K抗原是多糖荚膜抗原，对热稳定， 能阻止O凝集。血清型别按O：K：H 的顺序以数字表示。,3. 培养特性 兼性厌氧，营养要求不高，在普通 琼脂上生长良好，形成圆形光滑、湿 润的菌落，在选择培养基上可发酵乳 糖形成有色菌落。IMViC 试验结果为 +-。,四、微生物检验 (1) 肠道外感染标本 1. 标本采集 血液标本以无菌操作技术采集静脉血 5ml注入血液培养瓶。痰标本取清晨口 腔清洁后从深部咳出的痰液。脓、分泌 物等标本用无菌棉拭子直接采取。 2. 直接涂片染色检查 除血液标本外，脓、痰、分泌物等标本 均作涂片染色检查。尿液和各种体液离 心后取沉淀物作涂片, 可见G-短杆菌。,3. 分离培养鉴定 (1) 血液标本接种肉汤增菌培养，待生 长后移种血平板。体液标本取离心 沉淀物接种于血平板。尿液标本应 同时作菌落计数。脓、痰和分泌物 标本可直接接种于血平板。35孵 育1824h后观察菌落形态。,(2) 鉴别培养基上挑选有色菌落，用生 化反应、血清学试验鉴定到属和种。 典型的生化反应特征： TSIA(双糖铁)产酸产酸产气， CIT(枸橼酸盐)阴性,URE(脲酶)阴性, IND(吲哚)阳性, MOT(动力)+-, ORN(鸟氨酸)+-。,四、微生物检验(2) 肠道内感染标本 引起腹泻的ETEC、EPEC 、EIEC和EHEC具有与肠道外感染的大肠埃希菌相似的生物学特性，但分别具有特殊的血清型、肠毒素或毒力因子。 检验程序同肠道外标本。采集腹泻 和食物中毒患者粪便和残留食物，肛拭标本，接种肠道选择鉴别培养基分离培养和鉴定 。,肠道感染大肠埃希菌鉴定 1) ETEC 生化反应、血清分型加肠毒素 测定：生化反应符合大肠埃希菌，但血 清型别与致病没有一定的联系。主要依 赖ST和LT肠毒素的检测。 2) EPEC 生化反应加血清分型：用多价抗 血清检测O抗原，进行特异性抗血清的 凝集试验，阳性的菌株测定凝集滴度以 排除交叉反应，同时做H抗原测定 (O：H分型)。,3)EIEC 生化反应、血清分型加肠毒素测定：用O：H血清分型，赖氨酸脱羧酶阴性，无动力，常见的血清型0152和0124，与志贺菌相似，主要的鉴别试验是醋酸钠、葡萄糖铵利用试验和粘质酸盐产酸试验，大肠埃希菌三者均阳性，而志贺菌三者均阴性。4)EHEC 血清分型加生化反应：应常规作0157：H7的培养，必须经生化反应证实为大肠埃希菌。凡山梨醇阴性的大肠埃希菌0157：H7分离株无须再做毒素的检测，因为均产生Vero毒素。5)EaggEC 用液体培养-凝集试验，检测细菌对细胞的粘附性或用DNA探针技术。,可致多种感染，轻者为自愈性胃肠炎，重者可引起致死性伤寒。伤寒和副伤寒A、B引起胃肠炎、菌血症和肠热症；猪霍乱沙门菌引起胃肠炎和败血症，儿童多见。,第三节 沙门菌,一、分 类 沙门菌属是肠杆菌科中最复杂的菌 属。根据O抗原分群，再根据H抗原 分血清型，将沙门菌属分为6个亚属 (亚属 1-6，其中亚属3再分为3a和3b, 见表7。8)，绝大多数(99)沙门菌 的临床分离株是亚群1中的菌种。本 属细菌DNA G+C含量为50-53。,二、临床意义 (一) 致病因素 1. 侵袭力 有Vi抗原的具有侵袭力，穿过小肠 上皮被吞噬后，由于Vi抗原的保护, 反 而在细胞内繁殖，并随吞噬细胞至机体 其他部位，故称细胞内寄生菌。,2. 内毒素 有较强的内毒素，可引起发热，白 细胞改变，中毒性休克，并能激活 补体，导致一系列病理生理变化。3. 肠毒素 某些沙门菌(如鼠伤寒沙门菌)能产 生类似大肠埃希菌的肠毒素。,(二)所致疾病 1. 胃肠炎 最常见，引起腹泻，伴有低热，恶心 和呕吐。 2. 菌血症或败血症 以猪霍乱沙门菌感染为多，表现为高热 寒战。常伴有胆囊炎、骨髓炎。血培养 阳性而便培养阴性。 3. 肠热症 由伤寒沙门菌引起。血培养或肥达反应 阳性。经口感染，穿过小肠上皮到达淋 巴结，进入血流，第一次菌血症。出现 发热等症状。,随血流播散至肝、脾等器官中继续繁 殖，再次进入血流扩散，第二次菌血症， 出现持续高热、肝脾肿大、皮疹和全身中 毒症状。细菌随胆汁进入肠腔，经粪便排 出。 潜伏期720天，典型病程3-4周，发病 2周后机体出现免疫反应，使疾病好转， 但同时也引起迟发性变态反应，导致肠壁 淋巴结坏死溃疡，可造成肠穿孔而危及生 命。4. 携带者 约3患者成为携带者，粪便持续排菌达 1年以上。,三、微生物特性 1. 形态染色 G-杆菌细长，1.03.0m, 有鞭毛， 无芽胞 和荚膜。 2. 抗原结构有3种: O抗原为多糖类脂蛋白质复合物，能耐 受100 2.5 h。共有58种，是分群的依据, 凡 含共同抗原的血清型归为一个群，沙门菌含 一种或数种O抗原,每群以O加上数字及括号 大写英文字母顺序编排，如02群(A)，Z以后 直接加数字表示，如051群。刺激机体产生 IgM抗体, 与相应抗血清反应呈颗粒状凝集。, H抗原 为蛋白质抗原，加热被破坏。有两个 相,第一相称特异相，用a、b、c表示, 是定型的依据。刺激机体产生的IgG 抗体,与相应的抗血清呈絮状反应。 表面抗原 为Vi抗原有保护作用。可阻止O抗原 与相应抗体发生凝集，故在沙门菌血 清学鉴定时应加以注意。,三、微生物特性 3. 培养特性 兼性厌氧，生长温度3537，最适 生长pH为6.87.8;营养要求不高，在肠道 选择性培养基上因不发酵乳糖形成透明菌 落，在SS琼脂上形成黑色的菌落。 4. 抵抗力 不强，加热601h或6520min，在水 中能活23周，粪便中呵存活12个月 5. 变异性 有S-R变异、H-O变异和位相变异等具 有双相H抗原菌变成单相菌 。,四、微生物检验 1. 采集标本 伤寒沙门菌发病第l周取血。第2、3 周取粪便、尿液做培养的分离率高。 2. 直接镜检 革兰阴性杆菌。直接用胶乳凝集试验 检测病人标本或增菌培养物沙门菌抗 原，可快速诊断。,3. 分离培养与鉴定 常用肠道鉴别培养基或选择培养 基。在菌最较少时，血液和骨髓液 分离培养用增菌肉汤。35-37孵 育，选择透明的可疑菌落做鉴定。,沙门菌的鉴定1. 用生化试验将可疑菌落鉴定到属和种, 基本 生化反应特征： TSIA(双糖铁) 产碱产酸 或产碱产酸产气，H2S阳性、CIT(枸橼酸 盐) 阳或阴性、URE (脲酶)阴性、IND(吲哚) 阴性、MOT(动力)阳性、VP阴性、ORN(鸟 氨酸)阳性。凡临床分离菌乳糖、吲哚阳性， 或脲酶阳性者，均不考虑为沙门菌。,2. 血清学分型： 用抗血清对所分离菌种的O抗原、Vi 抗原、第一、二相H抗原进行凝集试 验。先用多价O抗血清(A-F)进行分群 ，95以上都属A-F群，对早期诊断 有重要意义。再分别用单价因子血清 定群，用H因子血清检查H抗原。 综合O、H及Vi因子血清的检查结 果进行判断。,(五) 抗体检测(肥达反应) 用已知伤寒、副伤寒沙门菌的O、H 抗原，检测受检血清中有无相应的抗体 的半定量试管内凝集试验，称为肥达反 应。能辅助诊断伤寒，甲、乙、丙型副 伤寒沙门菌引起的肠热症。,1. 方法 将受检血清用生理盐水作倍比稀 释，分别加入等量伤寒沙门菌O、H 抗原及副伤寒沙门菌甲、乙、丙的 H抗原，进行试管内凝集试验，凡 血清最高稀释度出现明显凝集者为 凝集效价。,2. 结果解释 (1) 正常值：各地区有所不同，O 80, H1：160，A、B，Cl：80； 或第二份血清效价增高4倍以上具有 诊断意义。 (2) O抗原的抗体为IgM，出现较早，H 抗体为IgG，出现较迟。O高H不高, 可能为疾病早期；周后复查如升高 为肠热症。H高O不高，可能以往 患过伤寒或接受过预防接种，为回忆 反应。,、分 类 将志贺菌属分为4个血清群(种)：A群为 痢疾志贺菌；B群为福氏志贺菌；C群为鲍 特志贺菌；D群为宋内志贺菌。 最近将生化性状相近的A、B，C群归为 一群，统称志贺菌A、B、C血清群；而将 生化特征与之相异，鸟氨酸脱羧酶和-半 乳糖苷酶均阳性的宋内志贺菌单列出来。 DNA G+Cmol为4953。,第四节 志贺菌属,二、临床意义(一)致病因素 1. 侵袭力 因菌毛的作用，细菌粘附在肠粘膜表面; 2. 内毒素 造成粘膜细胞死亡发炎，并形成毛细血 管血栓，导致坏死脱落和溃疡，临床出现 脓血便；并引起全身中毒症状，导致发热 、意识障碍，甚至中毒性休克； 3. 外毒素 A群志贺菌和型产生志贺毒素，有 细胞毒、肠毒素和神经毒等生物学活性。,(二) 所致疾病 有以下3种临床类型： 1急性细菌性痢疾 表现为腹痛发热，有里急后重现象, 便中含有粘液和血。很少进血流，中毒 性菌痢见于小儿，常无消化道症状而表 现为全身中毒症状，往往造成死亡。,2. 慢性细菌性痢疾 菌痢治疗不彻底，造成反复发作 迁延不愈，超过2个月视为慢性菌 痢；3. 携带者 有恢复期带菌、慢性带菌和健康 带菌等3种，是主要的传染源。,三、微生物特性 1. G-杆菌，菌体短小，无芽胞荚膜和鞭 毛，有菌毛 2. 抗原成分 有群和型特异性两种O抗原，是分类依 据根据生化反应和O抗原的不同，分为 A 、B、C、D 4个血清群和40余个血清型。 O抗原耐热，加热100、60min不被破坏。K抗原能阻断O凝集。,3. 变异性 有S-R变异、耐药性变异。多重耐药性 问题己成为严重的医学问题。4. 培养特性 兼性厌氧，生长温度37，pH7.27.4 。营养要求不高，能在普通培养基上生 长。在鉴别培养基上形成无色半透明的 菌落。5. 抵抗力 比其他肠道细菌抵抗力低，在1石炭酸 中15-30min和加热6010min即被杀死,四、微生物检验 1. 标本采集 在治疗前采集粘液脓血便作床边 接种，不能及时接种可置甘油保存 液送检; 2. 直接镜检 G-杆菌。胶乳凝集试验和免疫荧 光技术检测抗原。,3. 核酸检测 志贺菌携带一个非结合型大质粒, 能 编码与侵袭性相关的外膜蛋白, 是产 生痢疾综合征的重要致病因子, 从中 2.5kb侵袭相关区段中设计出ipaH引 物, 可用于检测志贺菌序列。4. 分离培养 用鉴别培养基和选择培养基,取可疑 菌落鉴定。,志贺菌鉴定（1） 1.生化试验 鉴定到属和种 基本生化反应特征: TSIA(双糖铁)产碱产酸、不产气, CIT(枸橼酸盐)阴性, URE(脲酶)阴性, MOT(动力) 阴性, YP阴性。,志贺菌鉴定（2）2. 血清学鉴定 先用志贺菌属4种多价 (A群1，2型、B群 16型、C群l6型及D群)作玻片凝集试 验，凝集者再进一步作定型。 A群：即痢疾志贺菌，为一群甘露醇阴性 的菌株，共有10个血清型(1)0)，其O抗 原从1 X共10种均为独立的血清理，,群：即福氏志贺菌，有6个血清型和X、Y 2个变型。6型菌株缺少共同的群抗原，故多价血清中应包含6型因子血清，否则将会造成漏检。 C群：即鲍特志贺菌。本菌共有15个血清群， D群：即宋内志贺菌：仅有个血清型，但有光滑型(S)和粗糙型(R)两种茵落; R型菌 不被S型血清所凝集；因此诊断血清应含有S及R两种因子血清,包括3种人类致病菌：鼠疫耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶尔森菌。还可从临床标本中分离到弗氏、中间、克氏、舆氏、伯氏、莫氏、罗氏和鲁氏等8种耶尔森菌。,第五节 耶尔森菌属,一、鼠疫耶尔森菌 (一) 临床意义 是烈性自然疫源性传染病鼠疫的 病原菌。 1致病因素 有内毒素和鼠毒素两种毒素。鼠 毒素与毒力有关，作用于心血管系 统，引起不可逆性休克与死亡，该 毒素存在于细胞内，菌细胞裂解或 白溶后释放。,2临床类型 1) 腺鼠疫：局部淋巴结(多为腹股沟淋 巴结)的肿胀、坏死和脓肿； 2) 败血型鼠疫：由细菌侵入血流大量 繁殖所致。可在2-3天内死亡； 3) 肺鼠疫：由腺鼠疫、败血型鼠疫继 发而成，可通过呼吸道在人与人之 间直接传播，引起原发性肺鼠疫， 死亡率极高。,(二) 微生物特性 1. G-杆状，0.51.0m，两极浓染， 有荚膜，无芽胞和鞭毛。 2. 抗原构造构造复杂，重要的有(1)F1 抗原:是封套抗原。特异性高，抗原 性强，产生的抗体有良好的保护作 用; (2)VW抗原：是菌体的表面 抗原，与本菌的毒力和侵袭力有关。 (3)T抗原：为为鼠毒素,有良好的抗 原性和免疫原性，可脱毒成类毒素 制成抗毒素。,3. 兼性厌氧，生长温度为2730，最 适pH为6.97.2, 血琼脂培养48h后形成 粗糙菌落，肉汤培养48h后形成菌膜，稍 加摇动后的菌膜钟乳石状下垂；本菌动 力为阴性；IMViC试验反应模式为+ 、苯丙氨酸脱氨酶、脲酶、硫化氢 均为阴性；不液化明胶，当穿刺培养时 菌沿穿刺线纵树状发育；分解葡萄糖产 酸不产气，对多数糖不分解：,(三) 微生物检验 鼠疫耶尔森菌传染性极强，故应严格遵守操 作规程，一旦疑为本菌，应立即向省市疾病控 制中心等部门报告，并将菌种送检验中心或专 业实验室作进一步的鉴定。鼠疫的确诊主要依 赖病原学诊断，须经全面生化反应、噬菌体裂 解试验和动物实验才得以作出最终鉴定。诊断 确立后除对患者进行隔离治疗外，对疫区及有 关人员须采取有效的预防隔离措施，防止疫情 扩散。,二、小肠结肠炎耶尔森菌 天然寄居在多种动物体内，如猪、鼠 、家畜和兔等。通过污染食物(牛奶、猪 肉等)和水，经粪口途径或因接触染疫 动物而感染。本菌具有侵袭性及肠毒素 为人兽共患病原菌,通过污染食物和水源 经消化道传播，或因接触带菌动物而感 染。临床表现以小肠、结肠炎为多见,还 可引起结节性红斑、反应性关节炎等自 身免疫性疾病。,(一) 微生物特性 1G-球杆菌，偶有两极浓染，无芽胞荚 膜，35无动力，2225有动力。 2根据O抗原可分为血清型，我国主要 为O9、O8、O5、O3等几种血清型与 致病性有关。3培养特性 兼性厌氧, 耐低温，在440均能生长，最适 温度为2028。在普通琼脂上生 长良好。不发酵乳糖，能分解葡萄糖和 蔗糖产酸不产气，硫化氢阴性，脲酶阳 性，VP试验22-25阳性，35-37 阴性，鸟氨酸脱羧酶阳性。,(三) 微生物检验与鉴定 1. 采集粪便、食物，也取血液，尿液 等标本。 2. 直接涂片镜检 G-球杆菌。 3. 冷增菌 粪便标本可用7ml M15 Ph7.4 PBS 4增菌2-3周。 4. 耶尔森菌专用选择培养基(CIN)的 分离, 培养48h后, 菌落为粉红色。,生化反应特征：TSIA(三糖铁)产酸 产酸，不产气，H2S阴性， CIT(枸橼酸 盐)阴性，URE(脲酶)阳性，PHE(苯丙氨 酸)阴性，OXI(氧化酶)阴性，IND(吲哚) 阴性阳性，ORN(乌氨酸)阳性MOT(动 力)，V-P，-半乳糖苷酶)等结果与培养 温度有关(22-25阳性，35阴性)。5. 血清定型。,四、假结核耶尔森菌 鼠和鸟类是天然宿主，人类感染少 见。多数病例为肠道感染，有时可引 起肠系膜淋巴结炎，症状类似阑尾炎。 标本接种选择鉴别培养基, 孵育24h 后为无色(乳糖阴性)的小菌落;,生化反应特征：TSIA(三糖铁)产碱产酸、不产气，H2S阴性，CIT(枸橼酸盐)阴性，URE(脲酶)阳性，PHE(苯丙氨酸)阴性，OXI(氧化阴性，V-P阴性，IND(吲哚)阴性，MOT(动力)22-25阳性；35阴性；可与鼠疫耶尔森菌区别。,五、其他耶尔森菌 弗氏、中间、克氏、奥氏、伯氏 、莫氏、罗氏和鲁氏耶尔森菌亦可 从肠道内外标本分离到，生化性状 相似，均能在4以及在CIN上生长, 在冷冻食品中增殖，具有潜在的致 病性。,、分 类 包括4个种：弗劳地拘橼酸杆菌, 异型拘橼酸杆菌, 无丙二酸盐枸橼酸 杆菌和无丙二酸盐拘橼酸杆菌生物 群1群。,第六节 枸橼酸杆菌属,二、临床意义 为条件致病菌，与腹泻和肠道外感 染有关。 1. 异型枸橼酸杆菌引起新生儿脑炎、 败血症； 2. 弗劳地枸橼酸杆菌引起胃肠道感 染，也可致菌血症及许多感染； 3. 无丙二酸盐拘橼酸杆菌很少在肠 道外部位分离到；有时与G-无芽 胞厌氧菌(产黑色素类杆菌等)合 并感染。,三、微生物特性 1. 为G-杆菌，有动力(周身鞭毛)、无 芽孢、无荚膜。 2. 兼性厌氧，营养要求不高，能在普 通琼脂上生长。在血平板形成边缘 整齐，直径2-4mm的不溶血菌落。 在肠道选择培养基上为乳糖发酵的 菌落。 3. 弗劳地枸橼酸杆菌可产生硫化氢， 生化特性和抗原结构与沙门菌属 相似，应注意鉴别。,四、微生物检验 1. 直接镜检 G-杆菌 ； 2. 分离培养与鉴定 取可疑菌落乳糖 发酵菌株产生绿色金属光泽； SS上 菌落中央黑色，周围透明； 3. 将可疑菌落用生化、血清学试验进 步鉴定到属和种。 符合肠杆菌科和拘橼酸杆菌属的基本 特性。,五、枸橼酸杆菌属鉴定 1. 属的鉴别 生化反应与沙门 菌属(亚属1和3)及爱德华菌 属相似, 主要鉴别点是赖氨 酸脱羧酶阴性。,2.种间鉴别：弗劳地枸橼酸杆菌大部分菌株吲哚阴性，硫化氢多数阳性(80)而其他几个菌种相反，异型拘橼酸杆菌的生化特征为丙二酸盐和侧金盏花醇阳性，无丙二酸盐枸椽酸杆菌及生物l群之间的区别是后者棉子糖和蜜二糖阳性。,六、基本生化反应特征 TSI(三糖铁)产酸产酸产气或产碱 产酸产气，产生硫化氢，CIT(枸橼 酸盐)阳性，URE (脲酶)阴性阳性， IND(吲哚)阳性阴性，MOT(动力)阳 性，V-P阴性，ORN(乌氨酸)阳性阴 性，ARG(精氨酸)阳性，LYS(赖氨酸) 阴性。,一、分 类 克雷伯菌属共有7个种：肺炎克雷 伯菌、产酸(催娩)克雷伯菌、解鸟氨 酸克雷伯菌、植生克雷伯菌、臭鼻克 雷伯菌、鼻硬结克雷伯菌和土生克雷 伯菌。,第七节 克雷伯菌属,二、临床意义（1） 肺炎克雷伯菌 可引起典型的原发性肺炎；该菌在 口咽带菌率为16，住院病人中 高达20，是酒精中毒者，糖尿病人 和慢性阻塞性肺部疾病患者并发肺部 感染的潜在危险因素。,也能引起肺外感染，包括肠炎和脑膜炎(婴儿)，泌尿道感染(儿童和成人)及菌血症：由该菌引起的免疫低下患者感染或医院感染不断增多，本菌对氨苄西林天然耐药，对头孢菌素、妥布霉素、阿米卡早和多粘菌素B等敏感，易产生对第三代头孢菌素耐药。,二、临床意义（2） 本菌属存在于人和动物的胃肠道内, 将近半数的产酸克雷伯菌分离自粪便, 其次是血液：土生和植生克雷伯菌也 存在于自然界中，携带耐药质粒，能 引起多重耐药菌感染。,臭鼻克雷伯菌经常从萎缩性鼻炎和鼻粘膜的化脓性感染中分离到，亦有引起角膜溃疡的报道，以及从血、尿和其他组织中分离出该菌的报告，致病范围比以往所认识的更为广泛。 鼻硬结克雷伯菌引起呼吸道粘膜、口咽部 鼻和鼻旁窦的感染，导致肉芽肿性病变和硬结形成,三、微生物特性 1. 形态结构 G-杆菌 无鞭毛无芽胞, 有明显的荚膜。 2. 兼性厌氧，营养要求不高，形成较大 、凸起灰白色的粘液菌落，易发生融 合，用接种针沾取时可挑出长丝状细 丝。发酵乳糖产酸在MAC培养基形成 红色的菌落，红色可扩散至菌落周围 的培养中。,3. 基本生化反应特征： TSI(三糖铁)产 酸产酸产气或产酸产酸，CIT(枸 橼酸盐)阳性，URE(脲酶)阳性阴性, IND (吲哚)阴性，V-P阳性，MOT(动 力)阴性，ORN(鸟氨酸)阴性，丙二酸 盐阳性，DNA酶阴性。,1. 标本直接镜检G-杆菌, 有明显的荚 膜。2. 标本接种在血琼脂或肠道选样鉴别 培养基，37培养挑选粘稠的粉红 色易融合的可疑菌落,进一步鉴定到 属和种。3. 鉴定 氧化酶阴性，葡萄糖产酸产气, 动力阴性，吲哚阴性(产酸克雷伯菌 和解鸟氨酸克雷伯菌阳性)，脲酶阳 性。,克雷伯菌的鉴定1. 属的鉴定：动力阴性，鸟氨酸脱羧 酶阴性(解鸟氨酸克雷伯菌阳性)。2. 种的鉴定：肺炎克雷伯菌吲哚阴性, 不能在5和10生长，能在41生 长。而产酸克雷伯菌吲哚阳性, 能在 10和4l生长，不能在5生长。,3. 血清学鉴定 荚膜肿胀试验，可用特异性抗血清进行 荚膜肿胀试验加以确认。 方法是将待检菌接种于华弗(Worfel- Ferguson)培养基(有利于荚膜的产生), 35 1824h培养后，取1滴培养物加于载玻片 上，加墨汁(或美蓝液)1滴，再加抗血清1 滴，混合后加盖玻片，置显微镜油镜下观 察，在菌体周围出现较大的空白圈者判为 阳性：同时作不加抗血清的空白对照以进 行对比。,4. 肠毒素测定 对小儿肠炎患者除菌种鉴定之外, 尚需作肠毒素测定以明确致病性：用 兔肠结扎试验、细胞形态变化等方法 测定，原理及方法同ETEC肠毒素测 定。,一、分 类 1. 肠杆菌属 包括产气、阴沟、日勾 维、坂崎、泰洛、河生(分2个生物 群)、中间、阿氏、致癌、溶解和 超压肠杆菌11个种。 2. 多源菌属 包括聚团和弥散多源菌2 个种。 3. 哈夫尼菌属 包括蜂房哈夫尼菌1个 种。,第八节 肠杆菌属、多源菌属、 哈夫尼菌属,二、临床意义 肠杆菌是正常菌群，能引起条件 致病性感染。常见的是阴沟和产气 肠杆菌，可引起泌尿道、呼吸道和 伤口感染，败血症和脑膜炎, 有很 高的死亡率。治疗过程中易产生多 重耐药性。,坂崎肠杆菌能引起新生儿脑膜炎和败血症，死亡率高达75。日勾维肠杆菌能引起泌尿道感染。 可从血和脑脊液中分离得到泰洛肠杆菌，可从血液、尿液、粪便、伤口和呼吸道中分离得到阿氏肠杆菌。 河生肠杆菌是水中的细菌，尚无引起感染的证据。,三、微生物特性 1. G-粗短杆菌，有周鞭毛无芽胞，有 些菌株有荚膜。 2. 兼性厌氧，营养要求不高，在普通 培养基上能够生长，形成大而湿润 的粘液状菌落，选择培养基上形成 乳糖发酵的菌落。,3. 生化特性及抗原结构(荚膜抗原)与肺 炎克雷伯菌相似，应注意鉴别。生化 反应特征是：TSI(三糖铁)产酸/产酸 产气或产酸/产酸，CIT(枸橼酸盐)阳 性，URE(脲酶)和IND(吲哚)阳性/阴 性，MOT(动力)阳性，V-P阳性阴 性，ORN(鸟氨酸脱羧酶)阳性。,四、微生物检验 1. 标本直接镜检 G-杆菌。 2. 分离培养 接种鉴别培养基，37 孵 育，挑选乳糖发酵的菌落, 进一步鉴 定到属和种。生化反应特征是：TSI (三糖铁)产酸产酸产气或产酸产 酸，CIT(枸橼酸盐)阳性，URE(脲酶) 和IND(吲哚)阳性阴性, MOT(动力) 阳性，V-P阳性阴性，ORN(鸟氨酸 脱羧酶)阳性。,五、肠杆菌属鉴定 1. 初步鉴定:IMViC试验：为- - +， 大肠埃希菌为+ - -。动力和鸟苷 酸脱羧酶均阳性。 2. 主要菌种间的鉴别：产气肠杆 菌和日勾维肠杆菌对赖氨酸精 氨酸鸟氨酸的反应均为+-+, 但前者侧金盏花醇+；, 阴沟、坂崎和泰洛肠杆菌对赖氨酸 /精氨酸/鸟氨酸的反应均为-/+/+, 但坂崎肠杆菌能产生黄色色素；而 阴沟肠杆菌与泰洛肠杆菌在发酵糖 类有区别； 阿氏肠杆菌的VP、动力和鼠李糖反 应均阴性。,三、多源菌属 可分离到聚团多源菌，是条件致 病菌。为G-粗短杆菌，有周鞭毛， 无芽胞和荚膜。发酵乳糖不定，阳 性占40。根据分解葡萄糖分两个 生物型，生化反应不规则。,微生物学检验可参照克雷伯菌属和肠杆菌属的程序和方法进行。 多源菌属以赖氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶和鸟氨酸脱羧酶均阴性为特征。可用水杨苷试验鉴别本属两个菌种，聚团多源菌为阳性，弥散多源菌为阴性。,四、蜂房哈夫尼菌,本菌存在于人和鸟类的粪便中，属条件致病菌，因是混合感染，故在感染中的作用尚不明确。生化特性与肠杆菌属相似，但分解糖产酸的能力较低，不发酵乳糖、蔗糖、侧金盏花醇、山梨醇等。不产生DNA酶和脂酶可与沙雷菌鉴别。 微生物学检验方法与克雷伯菌属相同。,第九节 沙雷菌属,一、分类 包括粘质沙雷菌、沙雷菌液化群、深红沙雷菌、臭味沙雷菌、普城沙雷菌、无花果沙雷菌和虫媒沙雷菌。,二、临床意义,本菌具有侵袭性并对许多抗生素有耐药性，已成为一种重要的病原菌。粘质沙雷菌是引起肠道外感染的主要病原菌，与医院内感染的暴发流行有关，可致肺炎、败血症、输血和术后感染及泌尿道感染等。近来报道臭味沙雷菌与医院感染败血症有关，而普城沙雷菌是致社区感染的菌血症。,三、微生物特性,1.为G-小杆菌，有周鞭毛，臭味沙雷菌有微荚膜，无荚膜无芽胞。粘质沙雷菌是最小的细菌，可用于检查滤器的除菌效果。2.兼性厌氧，营养要求不高，形成不透明红色的菌落。在室温中产生两种色素：灵菌红素和吡羧酸。灵菌红素是非水溶性色素不扩散，而吡羧酸是一种水溶性能扩散的粉红色色素。3.生化反应特征：TSI(三糖铁)产碱产酸或产酸产酸，CIT(拘橼酸盐)阳性，URE(脲酶)阳性弱阳性 IND(吲哚)阴性，MOT(动力)阳性，ORN(鸟氨酸) 阳性(深红沙雷菌为阴性),丙二酸盐利用阴性(深红沙雷菌为阳性)。,四、微生物检验,1.标本直接镜检为G-杆菌。 2.接种肠道选择鉴别培养基，37孵育，挑选可疑菌落进一步鉴定到属和种。,