微生物实验室质量控制课件.ppt

卫生微生物实验室的质量保证与质量控制,二00九年四月,微生物实验室,卫生微生物实验室病原微生物实验室临床微生物实验室分子微生物实验室,微生物检测的定义,在特定的环境下(无菌)，采用适当的方法对样品中目标微生物进行增殖和培养，并对以放大后的目标微生物进行感官、生理、生化等到方面的特性分析和判定，以确定样品中目标微生物的量或质的特性的过程。,微生物检测涉及的要素,检验人员检测经验的判断能力检测设备保证目标菌种的生长的外部环境菌种试剂保证目标菌种的生长的内部环境检测方法选择适宜目标菌种检测的方法测试环境保证操作过程不受外界干扰（保护样品和人员）,检验人员,检验人员需经过微生物专业基础知识和无菌技术的培训后,方可上岗操作,并应了解本专业国内外的最新文献资料、参加专业培训，不断更新专业知识和提高检验质量，从实践中不断提高实验室质量管理规范，以保证检验工作科学、规范、优质、高效，确保数据准确和报告公正，实现实验室的标准化、规范化和管理科学化。,质量保证和质量控制的目的,质量保证为使人们能确信某产品(这里指培养基)能满足规定的质量要求所必须的执行的有计划的和系统的活动。质量控制为达到质量要求所采取的作业技术和活动。为监测整个检测的过程，排除在具体的技术操作中导致不满意的原因，以取得可靠的检测结果。,微生物实验室设施,微生物检验必须在无菌环境中进行，保持样品的原污染状态，防止二次污染。在未普遍采用现代化的无菌隔离器技术之前，无菌室仍然是最常用的无菌环境之一，无菌室及配套的相关建筑设计应充分考虑其合理布局，操作安全，使用方便等条件。,微生物实验室布局,无菌室应远离交通干道、厕所及污染区，最好在二楼以上，应选上、下水道及其他安装适宜的位置。灭菌物品存放和传输、培养间、结果观察、阳性对照实验室和办公室等，要集中，减少污染，便于管理和使用。,微生物实验室布局,无菌操作间应具有单向流空气净化设备，无菌操作间面积不小于5m2,高度不超过2.4m,温度控制在1826，相对湿度40%60%。新鲜空气经高效层流过滤后进入操作间。洁净度级别为局部百级、周围环境万级。应保持对环境形成正压，不同级别的洁净室之间的压差不低于4.9Pa，洁净区对与其相通的非洁净区的压差不低于10Pa。无菌室洁净度要定期检查沉降菌或浮游菌及悬浮粒子。,微生物实验室布局,无菌室内应六面光滑、平整、无缝隙、不起灰、耐腐蚀、易清洗，墙与地面、台面、墙壁之间连接处应呈凹弧形，不留死角，室内不安装上、下水道，进出口应为拉门，出入操作间和缓冲间的门不应直对。室内的电源总控制应设在室外。,微生物实验室布局,无菌室内采光的面积要大，照明灯应嵌装在天花板内，光照应分布均匀，光照度不低于300勒克斯，缓冲间和操作间匀应设置紫外灯（22.5w/m3)，距实验台面高度不超过1m。,微生物实验室使用,无菌检查、微生物限度检查、微生物效价检定应有专用的无菌室，不可混用，以免彼此干扰或交叉污染。阳性对照实验以及具有危险性的毒菌、毒素等检验，如破伤风梭菌、黄曲霉毒素等检验，必须有单独使用的无菌间或生物安全柜，以便控制，防止传播。,微生物实验室使用,无菌室一般应设有一更、二更、缓冲间和无菌操作间。无菌室内应有人净、物净设施，所有实验器材应经过消毒处理后，通过物流间无菌传递系统进入无菌室，执行人流和物流分开。,微生物实验室的分级,根据中华人民共和国国家标准GB19489-2004实验室生物安全通用要求把所有操作的微生物因子的危害程度和采取的防护措施，将微生物实验室所处理样本的生物危险性程度将微生物实验室分为四级：级对生物安全隔离要求最低，级最高。以BSL-1、 BSL-2、 BSL-3、 BSL-4表示微生物实验室的相应生物安全防护水平。,微生物实验室的分级,级生物安全防护实验室：实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对健康成年人巳知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。级生物安全防护实验室：实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。,微生物实验室的分级,级生物安全防护实验室：实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其病毒，通常巳有预防传染的疫苗。艾滋病病毒的研究（血清学实验除外）应在级生物安全防护实验室中进行。,微生物实验室的分级,级生物安全防护实验室：实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及毒素。与上述情况类似的不明微生物，也必须在级生物安全防护实验室中进行。待有充分数据后再决定此种微生物或毒素应在级还是在较低级别的实验室中处理。,仪器设备,所用的各种器械及设备应按计量要求定期检测，全部设备应满足检测项目的要求，做到设备档案齐全，每台（件）设备需使用标签标识，需检定或校准的设备表明状态和有效期限，仪器使用作业指导书，手册和使用记录，环境监测记录、维修记录等，以保证其正常使用。,仪器设备,无菌实验室配备的紫外消毒装置，使用前后进行照射消毒，要定期进行紫外线强度和空气质量监测，高效过滤器应定期进行风速监测，根据检测的情况，必要时予以更换处理。生物安全实验室，要正常进行管理维护和工作人员隔离防护。高压蒸汽灭菌器除定期校验表压和温度外，应定期用生物指示剂对灭菌效果进行验证。,仪器设备,其他微生物学检验所用的仪器，如培养箱、电热恒温水浴箱、电热恒温干燥箱、酸度计、电子天平、微量加样器、光学光度计、冰箱、低温冰箱、光学显微镜、生物安柜等，应严格按规定进行检查。培养箱内保持清洁，要定期进行细菌和霉菌的检查。,实验室维护,工作台面：测定样品前或开始工作前，必须用清洁剂（消毒剂）彻底消洁台面。工作结束（样品制备、接种、转移）或当天工作结束后，台面要再清洁消毒。处理致病菌性物质时，用75%的乙醇，7090%的异丙醇或次氯酸盐溶液消毒。,实验室维护,生物危害性物质：所有物质用后立即置于厂商建议浓度的消毒液中（如5%的苯酚溶液），或直接扔到危害袋中。所有物质在121持续高压灭菌至少30分钟。灭菌后按规定丢弃所有具器。遵守废弃物处理规定。,培养基的质量控制标准,培养基分类上属于体外诊断试剂。其质量控制的标准有：中华人民共和国质量监督检验检疫总局商品化微生物培养基的质量保证SNCCLS-1996中华人民共和国卫生部商业性微生物养基质量检验规程WS/T232-2002(所谓商业性就是即买即用的一次性培养基)中华人民共和国医药行业标准 YY/T 0577-2005,培养基的质量控制标准,中华人民共和国质量监督检验检疫总局培养基制备指南 第1部分实验室培养基制备和质量保证通则SN/T1538.1-2005中华人民共和国药典2005年版中国药品标准检验操作规范2005年版中国合格评定国家认可委员会（CNAS-CL09:2006)检测和校准实验室能力认可准则在微生物领域的应用说明,培养基的质量控制标准,中华人民共和国质量监督检验检疫总局培养基制备指南 第2部分培养基性能测试实用指南SN/T1538.2-2007中华人民共和国食品药品监督管理局 国食药监械2008535号 培养基类产品分类界定等综合上述的质量控制标准，下面主要以SN/T 1538的标准为主要内容简述一下培养基的质量保证与质量控制。,培养基制备指南:SN/T1538,SN/T1538.1-2005(2005-7-1实施)第1部分：实验室培养基制备质量保证通则提出要求并制定系统的控制计划属于质量保证的范围SN/T1538.2-2007(2007-10-16实施)第2部分：培养基性能测试实用指南为保证提出的质量要求所需要采取的技术操作属于质量控制的内容,SN/T1538标准制定情况,本部分为SN/T1538的第1部分对应于：ISO/TS11133-1:食品和动物饲料培养基制备指南-培养基制备指南-实验室培养基制备质量保证通则(2000英文版)与其的一致性程度 (2005-07-01实施）本部分为SN/T1538的第2部分对应于：ISO/TS11133-2:2003食品和动物饲料培养基制备指南与其的一致性程度 (2007-10-16实施）,SN/T1538 标准的作用,为培养基质量保证和质量控制标准体系，有利于对培养基的标准化管理，提高实验室检测质量。第1部分为质量保证和培养基质量基本要求。第2部分为质量控制技术。为中国实验室国家认可委员会（CNAS）合格评定微生物实验室认证工作提供参考依据。,培养基的类型,各别成分培养基（自制培养基）：实验室用不同的化学试剂或生物工程试剂按照一定的配方、比例配置而成的培养基。即用型培养基（商业培养基）：以即用形式置于容器中（例如：平皿、试管、安瓿或其它容器）供应的培养基。脱水合成培养基（干粉培养基）：不立即使用的干粉形式的（如：粉末、颗粒、冻干等形式）培养基。,培养基的分类,培养基是指以液体、半固体或固体形式，包含天然或合成成分，用于促进微生物的繁殖或保持其活力的物质组成。培养基分类按状态分类：液体、固体、半固体培养基。按用途分类运送培养基：保护和维持微生物活性，不含有使微生物增殖的物质。,培养基的分类,保存培养基；在一定期限内保护和维持微生物活力，或使微生物在长期保存后容易复苏（如卵黄培养基）。复苏培养基：能够使受损或应激的微生物修复、使微生物恢复正常生长能力，但不促进微生物繁殖的培养基（如缓冲蛋白胨水）。增菌培养基（选择性：如胆盐乳糖增菌液、非选择性：如营养肉汤）。,培养基的分类,分离培养基选择性分离培养基：支持特定微生物的生长而抑制其他微生物生长（如胆盐硫乳琼脂）非选择性分离培养基：对微生物没有选择性的抑制作用（如营养琼脂）鉴别培养基：能够进行一项或多项微生物生理学或生化特性鉴定试验（如三糖铁琼脂）鉴定培养基：能够产生一个特定的鉴定反应而不需要做进一步确认实验的培养基（如MUG培养基）,培养基的质量保证,生产企业提供的材料：培养基名称、各种成分和增补剂名称、产品批号。培养基使用前的PH值。储藏条件和有效期。技术数据清单。质控证书（性能评价和所用的测试菌种）。必要的安全及危害数据。,培养基的质量保证,实验室验收：保存有效的培养基目录清单。包装情况和完整性。培养基的名称和批号。接收日期、有效期。首次开封日期。内容物的感官检查(粉末的流动性、均匀性、结块情况和颜色变化)。,培养基的储存,例行常规检查（干粉培养基）：容器密封性复查；首次开封日期；内容物感官检查。使用前检查（商业性培养基）：颜色是否发生变化？是否蒸发/脱水？ 是否有微生物污染？严格按照供应商提供的储藏条件、有效期和使用方法进行培养基的保存和使用。有计划购买，先购先用。,培养基的储存,成品培养基（系指配好待用的培养基,下同）已分装好的培养基：避光、冷藏。最终成分在使用前加入的培养基，冰箱保存不超过三个月，室温保存不超过一个月。不稳定的选择性添加成分应在培养基制备的当天使用。观察任意颜色变化，记录培养基蒸发或微生物生长情况。,培养基的实验室制备,使用商品化的脱水合成培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配置，如重量/体积、PH值、制备的数据、灭菌条件、操作步骤。使用独立成分制备培养基时，按配方准确配置并记录配置步骤。,培养基的实验室制备,水：要求使用蒸馏水或相同质量的水，不含有抑制或影响微生物生长的物质。称量和复水：防止培养基结块。溶解和分装：适当加热重复搅拌。 pH值的测定和调整：使用 pH计。 1mol/L的氢氧化钠溶液或1mol/L的盐酸溶液进行pH值的调整。,培养基的实验室制备,分装灭菌 湿热灭菌：按使用说明规定进行 ，监控高压灭菌过程，保证灭菌温度，避免过度加热。过滤除菌：真空负压或正压条件下进行，滤膜和滤垫除菌。滤器121灭菌20分钟。,培养基的使用,琼脂培养基的融化 避免过度加热，融化后的培养基应尽快使用，不要放置超过4小时。对热不稳定的添加成分应在培养基冷却至482时加入。平板培养基的保存：暗处存放一周或412冰箱密封袋，存放三周或按厂商提供标准进行。作好标记（名称、制备日期、有效期）。平板冷却后装袋避免产生冷凝水。,培养基的使用,平板培养基的培养 每垛最多堆放六个平板，平板间要留有空隙 进行空气流通，使温度尽快达到一致。培养基的弃置所有污染和未使用的培养基的弃置必须采用安全的方式，并且要符合相关法规（废弃物处理程序）的规定。,成品培养基的质量控制,物理质量的控制2025时的pH值。液体培养基：外观透明、清亮、无混浊、无沉淀。固体培养基：具有特定颜色、表面湿润无水气、平整光洁无凹坑和气泡、无杂质 厚度34mm。,成品培养基的质量控制,无菌实验压力蒸汽灭菌后的固体培养基，随机抽取一定数量放361温箱培养24小时。煮沸消毒的选择性培养基可取部分琼脂，放入无菌肉汤培养24小时。培养后无细菌生长视为合格。,成品培养基的质量控制,细菌生长实验：用已知标准菌株做质控。测试菌种要求 具有稳定特性，能代表其种并能有效证明实验室特定培养基的最佳性能。可溯源至国家或国际公认的菌种收藏中心。可使用实验室自己分离的具有良好特性的菌种，但必须对照标准菌株进行鉴定。,成品培养基的质量控制,质控菌种要求具有稳定特性，能代表其种并能有效的证明实验室特定培养基的最佳性能的菌种。测试菌种主要购于参考菌种的菌种保藏中心。 中国医学细菌保藏管理中心CMCC。美国细菌收集和分型中心ATCC。,成品培养基的质量控制,培养基的测试菌种应具备以下性能：典型反应的强阳性菌种；弱生长的阳性菌种（选择更敏感的菌种）；生化反应菌种（显示不同发酵和荧光反应的菌种）；完全抑制菌种。,成品培养基的质量控制,菌液制备将工作用的质控菌株在培养平板上转种，培养后取35个单个的菌落悬浮于少量的灭菌TSB中，培养4h5h。用分光光度计调整浊度至0.5麦氏标准或在625nm吸光度值为0.080.1，使菌落计数达到(12)108 CFU/mL。,成品固体培养基的质量控制,将361培养1824h的新鲜菌悬液用生理盐水作1:10稀释，在每个待测培养基上用3mm接种环或0.1mL稀释悬液接种,使浓度达到100 CFU/碟。至少使用两块平板，每块平板的菌落平均数应为100cfu。按适宜的温度培养，观察平板上细菌的生长特征。结果应生长良好。,成品固体培养基的质量控制,平板培养技术：倾注法涂布法旋转涂布法,成品液体培养基的质量控制,将361培养1824小时的新鲜菌悬液用生理盐水作1:10稀释，取50100cfu 接种至试验培养基和参照培养基中。按适宜的温度进行培养。观察每瓶（管）细菌的生长情况，结果应生长良好。对于不透明的培养基，在确定生长时需接种到琼脂培养基上。,成品培养基质量检查记录,培养基质量检查记录表,微生物检验的量值溯源,为满足培养基、试剂盒和试剂的质量测定和微生物工程检测过程的质量控制需要，实验室应准备好足够种类和数量的参考菌株和参考培养物。参考菌株和参考培养物可以由有资质的单位提供或经过准确鉴定的分离株。菌种：个体形态以及菌落特征相近，而且生化反应、基因特征、血清型均保持一致的细胞菌落。,微生物检验的量值溯源,参考菌种：至少定到属或种水平的菌种，按其特征进行分类和描述。参考原种：将实验室获得的或供应商提供的标准菌种在实验室经过一代转接后获得的一套独立的相同的菌种。工作菌种：由参考原株转接一代获得的菌种。,菌种保藏的目的,菌种保藏的目的：保持菌种较高的存活率；降低菌种的变异幅度；防止其他微生物污染；在适宜条件下，菌种可以重新恢复原有生物学活性。,菌种保藏的原理,菌种保藏的原则是根据菌种的生理、生化特性，在人工创造的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细胞处于休眠状态，生长繁殖受到抑制但又不至于死亡，以减少菌的变异率。低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都有抑制微生物的代谢作用。因此低温、干燥、真空是用于菌种保藏的重要手段。,菌种的管理,1、实验用菌、毒种的申购，应有科室负责人签字。申购单应注明菌种名、菌号、数量及请购单位盖章。2、菌种应有专人保管，管理人员应具有较强的责任心。从指定单位购到的菌毒种，应有登记。一一核对菌种、菌号、数量，无误后方可转种。3、用适宜培养基将冻干菌种稀释、转种、培养。该菌种经鉴定无误后可作为对照菌用。如发现菌株特性不符，不得使用。,菌种的管理,4、 试验用菌种在使用过程中，应检查其生物学特性。如有变异或污染杂菌，均不得使用。发现染菌 或变异、衰退等现象时，应及时恢复或废弃。5 、试验菌种不得任意带出实验室。外单位索取菌种时，应经领导同意，包装严密，妥善携带。,菌种保藏,菌种的保藏是微生物检验工作中的一项常规技术，科学的保藏和管理直接关系到检验结果的正确与否。不同微生物根据其特征选择最适宜的保藏方法，菌种保藏方法一般分四个阶段（1）挑选特征典型的纯菌菌落。（2）能产生孢子或芽孢的微生物应用孢子和芽孢进行保存。（3）选择最适宜的方法保藏。（4）定期对保藏菌种进行检查。,标准菌株的储备,标准菌株在实验室经过一次传代获得的一组完全相同的菌株。传代菌株应当完全具备标准菌株的所有性状。传代时要保证一定的量，以减少传代的次数每株菌株尽量避免多次使用。采用不同的保存方法保存期限不同（如斜面保存法、穿刺法，液体石蜡法等保存期限的长短都不一样）。,常用菌种的保藏方法,菌种保藏方法有多种，如琼脂斜面低温保藏法、液体石蜡保藏法、干燥（沙土）保藏法、玻璃珠保藏法、冷冻真空保藏法、超低温保藏法、液氮保藏法等。但对不同的微生物应通过保藏试验来选择最适宜的保藏方法。注意事项:保藏的菌种均应是新鲜纯菌培养物,至少应是第三代的培养物。不同细菌用不同培养基，定期检查菌种保存环境做好记录。1、琼脂斜面低温保藏方法,常用菌种的保藏方法,2、半固体高层培养基穿刺培养3、液体石蜡覆盖保藏法：本法是用石蜡将培养物与空气隔绝，以降低菌种的生理、升化水平，延长菌种保藏时间。方法：选择优质液体石蜡，121高压灭菌30min后在160烘箱12h除去掉水分冷却后备用。取经培养的高层半固体菌管加入液体石蜡，高出培养基面1cm为宜，放入4 保藏。可保存半年或一年。,常用菌种的保藏方法,4、冷冻真空保藏法保护剂：有多种，多用脱脂牛奶。将牛奶煮沸、静止、冷却除去上面一层脂肪，重复3次后用脱脂棉过滤，灭菌。菌悬液制备：直接刮取用营养琼脂培养基培养的细菌，悬浮于分散剂中。用液体培养基培养的细菌，哀告离心沉淀倾出上清液，加入分散剂。菌悬液浓度：1091012cfu/ml。低温、冷冻、真空干燥置-35 保存。,常用菌种的保藏方法,5、液氮保藏法保存：制备菌悬液，用甘油或二甲亚砜作保护剂，分装安瓿，每管0.5ml，预冻至-40（控制温度下降速率为1/min)，放入液氮生物贮存罐中保存。恢复：直接浸入38水浴中解冻510min，转种于适宜培养基内培养。注意：大多数属种适于慢速冻结和快速冻结。,蒸馏水保藏法,6、蒸馏水保藏法在斜面培养基上加无菌蒸馏水56ml，用吸管轻轻吹散表面菌苔，移入灭菌螺旋口小试管中，盖严盖子在室温保存。霉菌、酵母和放线菌、植物病原菌可在室温保存数年。,玻璃珠保藏法,7、玻璃珠保藏法无菌操作将菌悬液加入玻璃瓶中，充分搅动包被玻璃珠，移去多余悬液。标记后保存-6085冰柜。不同颜色有助菌株辨别。使用使取出1粒用相应培养基培养需氧菌营养肉汤，厌氧菌强化梭状芽孢杆菌培养基。 嗜盐菌盐营养肉汤加15%甘油。,甘油低温保藏法,8、甘油低温保藏法菌种悬浮在10%15%甘油蒸馏水，超低温冰箱保藏（ -7080 ）。菌种最好培养至对数生长期。使用液体培养基时，可直接加到已灭菌的甘油中，使甘油终浓度10%30%。分装于冻存管中，避免反复冻融。基因工程菌及难以冷冻干燥的丝状真菌。,适用菌种的保藏方法,液氮保藏法适用菌种：病毒、支原体、各类细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌、动物细胞等。甘油低温保藏法适用菌种：细菌、酵母菌、丝状真菌、基放线菌和基因工程等。液体石蜡覆盖保藏法适用菌种：真菌、酵母菌、多种细菌。不适用菌种：乳酸杆菌、分枝杆菌等。,菌种的传代,将在适宜的培养基上生长良好的培养物（庖肉培养基、半固体、高层琼脂）放置在低温处保存，使细菌停止生长或缓慢生长。当培养基中营养成分被利用完以前或尚未陈旧以前，将它重新移植于新鲜培养基，再于适宜条件培养，生长良好后，再置低温保存。,菌种的传代,最好每株接种两管以上，需定期移种。培养基表面需加灭菌液体石蜡，用橡皮塞代替棉塞，以防止干燥脱水。传代菌株采用斜面、穿刺方法、液体。多数菌株要求保藏温度为45。 反复传代后，在使用前需进行确认试验。一般1个月6个月传代一次。适用菌种：大肠、沙门、铜绿、金葡、生孢、枯草、短小、藤黄、白念、黑曲等。,菌种检查和复壮,经过长期保藏和传代的菌种，由于种种原因易发生衰退、变异或死亡，因此各类菌种在保藏期间必须定期检查，发现变异或衰退，应及时给予恢复。定期检查： 在一定间隔时间需重新复活、分离、纯化、鉴定再保藏。检查项目：菌落形态、革兰染色、显微镜下菌体形态、生化特性及血清学检查。,防止菌种衰退,控制传代次数。采用有效的菌种保藏方法。创造良好的培养条件。利用不同类型细胞进行接种传代。,菌种的复苏,对已保藏的菌种进行恢复培养，使其恢复至保藏前状态。液氮超低温保存：配置合适的培养基；解冻与恢复培养（迅速放入3840水浴中震荡510min 解冻）；开启安瓿，将菌种移入相应的培养基中，在适宜的温度下培养。,菌种的复苏,使用真空冷冻干燥保存：开启安瓿瓶，滴入无菌生理盐水或营养肉汤0.5ml，溶解后摇匀，悬液移入相应的培养基中，在适宜的温度下培养。冷冻菌种复原：使用复苏培养液，对活性较弱的菌种（弧菌属）可另加入其他物质提高存活率。,菌种的使用,专人负责详细登记定期移种安全管理确认实验复壮注意事项,菌种的使用,传代保藏的菌种，最多使用到第五代，每次转接尽量扩大子代管数。经冷冻保存的菌种，复苏时应一次用完，避免反复冻融。菌种使用完毕，应按规定方法灭菌后弃置，注意人员防护。,我所标准工作菌种复苏方法,1、复苏菌种前应准备适于该菌种生长的培养基和培养设备，所有的操作应在符合生物安保护及无菌条件下进行。 2、扭开冻存管前，先用75%的乙醇棉球消毒菌种冻存管外壁，注意记住菌种的标记名称（一般要求每次只打开一种菌种），用灭菌吸管将冻存管内的菌悬液全部吸出，接入10ml的液体培养基中（大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌、,我所标准工作菌种复苏方法,金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、克雷伯肺炎杆菌接种到营养肉汤培养基；生孢梭菌接种到硫乙醇酸盐流体培养基；白色念珠菌、黑曲霉、啤酒酵母菌接种到改良马丁培养基）。3、细菌置3537培养2448小时，真菌置2528 培养4872小时。观察菌种生长情况，如菌未生长，细菌继续培养至72小时，真菌继续培养至96小时。,我所标准工作菌种复苏方法,4、复苏后的菌种再传种一次后使用。保藏菌种用的培养基可用固体琼脂斜面、半固体高层琼脂、液体培养基等。 5、需保藏的菌种置于46 冰箱保藏，细菌一般每隔一个月传代一次，真菌一般每隔23个月传代一次。,菌种保藏的相关记录,在菌种的采购、使用和保藏过程中，应建立菌种的接收、传代和使用的相关档案，以备实验室验证时查案。表1：菌种接收记录表,菌种保藏的相关记录,表2：菌种传代记录表表3：菌种使用记录表,菌种的确认实验,根据中国合格评定国家认可委员会（CNAS-CL09）检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明5.6.2.2.1“参照菌种必须定期转种传代,并做确认试验,包括实验室中所需要的关键诊断指标,实验室必须加以记录并予以保存”的规定，因此，微生物实验室对保藏的标准工作菌种要定期进行确认试验（即关键诊断）。例如：大肠埃希菌的确认实验,菌种的确认实验,标准工作菌种关键诊断指标实验结果记录表,染色液的质量控制,初次使用时用革兰氏阳性球菌金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003和革兰氏阴性杆菌大肠杆菌 CMCC(B)44102标准株做质量鉴定。商品化染色液控制：试剂名称、批号、存放条件、有效期。各种染液滴管不能混用。每月做一次质控。发现问题及时更换染液。,生化试剂的质量控制,保证试剂的稳定性：避光保存（通常配制在棕色玻瓶中）；有效期限；依据说明书使用；新批号要使用标准菌株做确认实验。,诊断血清的质量控制,避光冷藏保存，保证试剂的稳定性。有效期。依据说明书使用。新批号要使用标准菌株做确认实验。,诊断血清的质量控制,生产厂商资质验收：批号、效价、透明度、色泽。试验中注意无菌操作。4 冰箱储存，发现浑浊、絮状应停止使用。每三个月使用标准菌株对血清进行一次质控。,诊断血清生化试剂的质量控制,谢谢，再见!,