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    ABO亚型鉴定解读课件.ppt

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    ABO亚型鉴定解读课件.ppt

    2012.03,ABO亚型,武汉亚洲心脏病医院检验中心,A和B抗原是红细胞膜表面糖蛋白、糖脂分子的糖类决定簇。A抗原末端糖基:N-乙酰氨基半乳糖B抗原末端糖基:D-半乳糖。,ABO抗原不是ABO基因的直接产物,ABO血型分子生物学基础,ABO亚型理论,A亚型分类依据,红细胞上的A抗原依次减少,H抗原的活性则相对增强幻灯片 3,1、红细胞被抗A及抗A1凝集的程度2、红细胞被抗AB凝集的程度3、红细胞的H反应性程度4、血清内有无抗A1抗体5、分泌型人唾液内具有的A及H物质,抗-A1抗-AB抗-HA2C,抗-A、抗-B、AC、BC、OC,亚型试剂,常规试剂,A1和A2,占A型的99.99%血清学区别:依赖抗-A1,1、如无抗-A1,A1和A2不需加以区分。2、产生抗-A1的频率,A2型为1%-8%;A2B型为22%-35%。3、抗-A1在37反应才具有临床意义。,A3和Aend,两者均呈现mf外观,1、A3凝集细胞占60%;Aend凝集细胞占10%,Aend需多次离心 才能被发现。2、出现mf时,要进行临床调查,了解患者是否是为白血病或骨 髓移植,如疑是疾病原因造成,应慎报亚型。,Ax、Ael和Am,Ay极罕见,表现型与Am很相似,各种弱A亚型的鉴别要领,B亚型,B3、Bx、Bel、Bend、Bm血清学特点同相应A亚型不同之处,鉴定时不需抗-A1试剂,及A2细胞,AB亚型,A2B、A3B、AxB、AmB、AelB、AendB、AB3、ABx、ABm、ABel、ABend同A亚型和B亚型的血清学特点不同之处:不需抗AB血清鉴定;与抗H的凝集强度弱,呈w/0,同A1B,cisAB,cisAB是一种罕见的ABO亚型,人群中的发生率非常低,大约在170000到580000之间。 最早出现起源于亲代与子代的ABO血型是遗传的矛盾,按照ABO三复等位基因学说和孟德尔遗传定律,AB和O型的双亲不可能生下AB型或O型的子代。分子机理:在A等位基因的基础上发生了碱基错义突变,变异的A基因具有编码双功能活性酶的能力,血清学除了表现A抗原的特异性外,还表现少量B抗原的特异性。血清学特点:A抗原接近正常或弱略于正常;B抗原较正常弱很多;,B(A),同cisAB的遗传方式相似,也是一种罕见的ABO亚型, cisAB是在1964年发现,B(A)是在1985年发现;分子机理:被认为是遗传学上的B型,在B基因基础上发生错义突变 ,由于单碱基突变,变异的B基因具有编码双功能活性酶的能力,血清学除了表现为B抗原特异性外,还表现为少量A抗原特异性。 血清学特点:较弱的A抗原和接近正常的 B抗原特异性,血清中有较强的抗-A。,cisAB、B(A),正常AB型,A和B等位基因分别位于9号同源染色体的ABO位点上,分别从父方或母方遗传得到。极少数人类个体的一条9号染色体上存在一个cisAB或B(A)基因,它编码的酶具有双功能活性,可以同时催化A抗原和B抗原的合成。cisAB的A抗原接近正常,B 抗原较正常弱很多;B(A)的B抗原接近正常,A抗原弱很多。cisAB或B(A)血清中存在针对弱抗原产生的不规则抗体与抗H反应强度仅次于甚至接近与O细胞。血清学方法判断为AB亚型,需分子生物学验证cisAB或B(A)是从一个亲本遗传而来的,因此基因型是cisAB / O或 B(A) / O,表现型为AB型。带有cisAB或B(A)等位基因的个体,若与O型血的人(基因型O / O)生育,子女的血型可能表现为AB型或O型,而不像通常AB型血与O型血的父母只能生出A或B型血的子女。,孟买型和类孟买型,孟买型和类孟买型在ABO血型系统中为罕见的稀有血型,常因交叉配血不合而被发现。为红细胞上H抗原缺乏而使ABO血型物质不能正常合成的一类血型。遗传特点:与A、B基因相对独立的H-h系统是hh纯合子,不能合成表达A或B基因的前提物质-H物质,孟买型和类孟买型,血清学特点,血清学方法繁琐,结合正反定型、抗体筛选、吸收放散试验、唾液中的血型物质测定以及家系调查来综合分析。分子生物学方法进行ABO基因定型简便、快速、可靠,成为输血医学的研究热点。,ABO正反定型不一致,ABO正反定型不合原因分析,同种抗体A亚型,缗钱状凝集冷自身抗体,AB型的亚型,同种抗体A型 抗-H,O型A亚型,同种抗体孟买型,同种抗体,ABO正反定型不一致,红细胞三洗6管:-A、-B、AC、BC、OC、自身C 正常:2管强凝集,其他4管阴性 (正定型4+;反定型2+) 异常:1、出现其他的凝集(不规则抗体) 2、不到2管强凝集(ABO亚型、抗原、抗体减弱),不规则抗体,亚型,6管反应结果,ABO亚型鉴定流程,1、人-A、 人-B2、-H (新鲜BC、OC对照)3、-AB (单独A亚型、B亚型)4、-A1 (A亚型的鉴定)5、排除其他不规则抗体,H抗原强弱:OA亚/B亚 B AB亚型 A1 A1B,ABO亚型案例分析,案例1,Step1,正定型多次离心4反应吸收放散,反定型多次离心4 反应加大血清量吸收放散,增强抗原抗体反应,分析:1、强凝集1管,弱凝集2管。2、B抗原减弱,血清中存在正常抗A,同时还有与BC反应的弱不规则抗体3、怀疑B亚型4、进一步实验:,Step2,Step3 关键步骤,考虑到人源抗血清效价比较低的缘故,并未得到预期的结果,但4显示有B抗原存在,与抗-AB也未见增强,H抗原:OA亚/B亚 B AB 亚型 A1 A1B,根据以上的反应格局,高度怀疑Bx,鉴于Bx亚型的血清学特征,即为血清中存在能凝集常规BC的抗体,为减少偶然性,选择健康B型2份,O型2份(对照),分别与待检血清反应,排除其他不规则抗体,进一步证实为不规则抗B,Step4,根据以上结果,该病例红细胞上有弱的B抗原,血清中有强的抗A 和弱的不规则抗B,红细胞与抗H呈强阳性凝集,根据血清学格局,初步判断为Bx亚型,须经分子生物学实验进一步确认。,结论,案例2,Step1,分析:1、强凝集只有1管,弱凝集有2管。 2、A抗原减弱,血清中有正常抗B,同时还存在 与A1C反应的比较弱的不规则抗体 3、怀疑A亚型 4、进一步实验:抗-A1 、抗-AB、抗-H,A2细胞,Step2,与抗-A1不反应,为A亚型;同时与抗-AB凝集增强,进一步证明为A亚型,血清与A1C反应,与A2C不反应,证明存在不规则抗-A1抗体,Step3,Step4,H抗原增强,凝集强度与O细胞相当,根据以上的反应格局,高度怀疑Ax。,排除其他不规则抗体,进一步证实为不规则抗A1,Step5,结论,根据以上结果,该病例红细胞上有弱的A抗原,血清中有强的抗A 和弱的不规则抗A1,红细胞与抗H呈强阳性凝集,根据血清学格局,初步判断为Ax亚型,须经分子生物学实验进一步确认。,案例3,Step1,分析:1、强凝集1管,弱凝集2管。 2、A抗原减弱,B抗原正常,血清中存与AC反应的弱不规则抗体 3、怀疑A亚型B 4、进一步实验,Step2,与抗-A1不反应,为A亚型,血清与A1C反应,与A2C不反应,证明存在不规则抗-A1抗体,Step3,Step4,H抗原未见增强,因为有正常的B基因,根据以上的反应格局,高度怀疑AxB,排除其他不规则抗体,进一步证实为不规则抗A1,Step5,案例4,Step1,AxB? B(A)?,Step2,Step3 PS+A2C,人-A并未得到预期的结果。抗-A1不反应,初步判断为A亚B。仍然不能区分是AXB还是B(A),排除AXB,AXB与A2细胞不反应,此点是鉴别B(A)与AXB最有价值的依据之一,Step4,AXB与抗-H呈弱凝集,而B(A)与抗-H呈强凝集,这也是区分两者的一个非常重要的标记,结论:根据以上血清学实验,初步定为B(A)亚型,须经分子生物学实验进一步确认。,B(A)亚型的特点:1、红细胞上A抗原减弱,B抗原基本正常 2、H抗原增强,与O细胞H抗原相当 3、血清中的抗-A与A1、A2细胞均有反应B(A)与AXB的区别:1、B(A)的H抗原增强,AXB不增强 2、B(A)的血清与A1、A2细胞均反应;AXB只与 A1 细胞反应。,案例5,Step1,分析:1、强凝集1管,弱凝集2管。 2、A抗原正常,B抗原减弱,血清中存与BC反应的弱不规则抗体 3、怀疑AB亚型 4、进一步实验:,Step2,Step3,人源抗血清显示有正常A抗原,有比较弱的B抗原。此处增加抗-A1的目的用以区分CisAB,H抗原未见增强,CisAB呈4+,两者可区分,根据以上的反应格局,怀疑ABx,排除其他不规则抗体,进一步证实为不规则抗B,Step4,案例6,Step1,分析:1、强凝集1管,弱凝集2管。 2、A抗原正常,B抗原减弱,血清中存与BC反应的弱不规则抗体 3、怀疑AB亚型 ABx? CisAB? 4、进一步实验:,Step2,与抗-A1不反应,说明A抗原为非正常A1型。初步排除ABX,Step3,ABx与抗-H呈弱凝集,而CisAB与抗-H呈强凝集,这是区分两者的一个非常重要的标记,结论:根据以上血清学实验,初步定为CisAB亚型,须经分子生物学实验进一步确认。,cisAB亚型的特点:1、红细胞上A抗原基本正常,B抗原弱于正常B抗原 2、H抗原增强,与O细胞H抗原相当 3、血清中存在弱的抗-BcisAB与ABx的区别:1、 cisAB的H抗原增强,ABx不增强 2、 cisAB的红细胞与抗-A1不反应;ABx与抗-A1反应,案例7,Step1,分析:1、强凝集1管,弱凝集1管。 2、O型:抗-B减弱 ? 3、B亚型:B抗原未检出,血清中有不规则抗B? 4、进一步实验:,Step2,Step3,人源血清和抗-AB均显示不反应。,H抗原增强,B亚型和O型仍然无法区分。由于该标本为健康献血员,无其他疾病史,可排除抗体减弱的可能。进一步实验,证明是否存在B抗原。,Step4 吸收放散试验,PC OC(对照),4 1h,离心吸出上清,4NS洗涤6次,56热放散10min,立即离心,吸出上清液(放散液),再次离心,放散液中加入BC,4 过夜,人-B,离心看结果,证明有B抗原存在,根据以上的反应格局,怀疑Bel,排除其他不规则抗体,进一步证实为不规则抗B,Step5,结论,根据以上血清学试验,初步鉴定为Bel型。其特点:红细胞上仅有很少量的B抗原,常规的血清学方法难以检测出,需通过吸收放散试验才能证明血清中通常存在不规则抗B需与抗B减弱的O型相区别,案例8,Step1,分析:1、强凝集1管,弱凝集呈mf。 2、mf:疾病原因、异型输血、嵌合体、骨髓移植、亚型 3、怀疑A3B 4、进一步实验:,鉴定血清中是否存在不规则抗-A1,排除,Step2,Step3,人-A也显示为mf,H抗原未见增强,结论,根据以上血清学试验,可初步鉴定为A3B,进一步进行分子生物学试验确定特点:红细胞与抗-A、抗-AB反应,表现为mf,大约有60%凝集,周围有约40%未凝集红细胞血型鉴定当出现mf外观时,对于白血病患者不轻易报亚型,我科案例,Step1,AxB? B(A)?,长春博得,南京欣迪,Step2,Step3,排除血清中ABO血型以外的不规则抗体,进一步排除AXB,AXB与A2细胞不反应,此点是鉴别B(A)与AXB最有价值的依据之一,Step4 PS+A2C,AXB与抗-H呈弱凝集,而B(A)与抗-H呈强凝集,排除AXB,结论:根据以上血清学实验,初步定为B(A)亚型,须经分子生物学实验进一步确认。送上海血液中心进行分子生物学验证,基因型为BA04/O04。遗憾之处:未进行家系调查,Step5 进一步排除其他不规则抗体的存在,Thank you!,

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